- Cao lỏng VQK được bào chế theo tỷ lệ 1:1 đóng chai nhựa 90ml tại khoa Dược
2.3.2.1. Phương pháp nghiên cứu tác dụng chống viêm bảo vệ niêm mạc dạ dày
Đánh giá tác dụng bảo vệ niêm mạc dạ dày của VQK trên mơ hình thực nghiệm gây loét dạ dày bằng indomethacin ở chuột cống trắng [105],[106].
*Cách tiến hành
Chuột cống trắng được đánh số thứ tự và được chia thành 5 lô, mỗi lô 9 con với tỷ lệ đực/cái như nhau ở mỗi lô. Các lô chuột được uống thuốc như sau:
Lô 1: Lô chứng( n=9): Uống nước lọc tại tất cả các ngày nghiên cứu bằng với thể tích nhóm uống thuốc(1ml/100g).
Lơ 2: Mơ hình( n=9) uống nước lọc (1ml/100g) 3 ngày đầu tiên. Ngày thứ 4 của nghiên cứu cho uống nước liều 1ml/100g, 30 phút sau cho uống indomethacin liều 30mg/kg.
Lô 3: Misoprostol (n=9): uống nước lọc (1ml/100g) 3 ngày đầu tiên. Ngày thứ 3 chuột được uống misoprostol liều 100mg/kg. Ngày thứ 4, tại thời điểm trước khi uống indomethacin 30 phút, chuột được uống misoprostol liều 100mg/kg.
Lô 4: Liều thấp (n=9): chuột được uống VQK liều 13g dược liệu /kg (liều tương
đương với liều điều trị trên người tính theo hệ số 7) trong 4 ngày. Vào ngày thứ 4,
sau khi uống thuốc VQK 30 phút, chuột được uống indomethacin liều 30mg/kg. Lô 5: liều cao (n=9): chuột được uống VQK liều 26g dược liệu /kg (gấp 2 lần
liều tương đương với liều điều trị trên người) trong 4 ngày. Vào ngày thứ 4, sau
khi uống VQK 30 phút, chuột được uống indomethacin liều 30mg/kg.
* Đánh giá kết quả
Sau 6 giờ kể từ khi uống indomethacin, tất cả chuột được gây mê bằng thiopental để đánh dấu kết quả. Tất cả chuột được đánh số mã hóa, nghiên cứu viên được làm mù để không biết được chuột ở lơ nào khi đánh giá nhằm mục đích hạn chế sai số.
Chuột được mổ bụng, bộc lộ dạ dày. Phần ống tiêu hóa từ thực quản (sát tâm vị) đến ruột non (cách môn vị 1cm) được cắt riêng rẽ, mở tá tràng và dạ dày bằng kéo theo đường bờ cong lớn. Rửa sạch bằng nước muối sinh lý, thấm bề mặt vết loét bằng Fomaldehyd 5%, cố định dạ dày tá tràng trên tấm xốp bằng ghim.
Quan sát bằng kính lúp độ phóng đại 10 lần, đánh giá các chỉ số sau:
- Đánh giá mức độ loét (Ulcer score- S) theo cách tính của Reddy và cộng sự 2012. Dạ dày bình thường : 0 điểm; xung huyết (red coloration): 0,5 điểm; chấm loét(spot ulcer) : 1 điểm; vệt xuất huyết (hemorrhagic streak): 1,5 điểm; loét sâu
(deep ulcers) : 2 điểm; thủng (perforation): 3 điểm Số ổ loét( Number- N)
- Chỉ số ổ loét của từng con chuột được tính theo cơng thức sau: UI= UN+US+ UP.10- 1
Trong đó:
UI ( Ulcer Index): Chỉ số loét
UN ( Ulcer Number): Số ổ loét trung bình của chuột US( Ulcer Score): Mức độ loét trung bình của chuột.
UP( Ulcer Percentage): Phần trăm số chuột có lt trong cả lơ chuột.
So sánh chỉ số lt trung bình giữa các lơ chuột để đánh giá kết quả nghiên cứu. Phần trăm ức chế lt được tính theo cơng thức:
100 X ( UI lơ mơ hình- UI lơ uống thuốc) UI lơ mơ hình
- Tất cả các dạ dày của chuột được chụp ảnh để đánh giá hình ảnh đại thể.
- Đánh giá vi thể: Tại mỗi lô chọn ngẫu nhiên 3 con, đánh giá tổn thương vi thể bằng xét nghiệm giải phẫu bệnh học của tất cả các ổ loét trên những chuột được chọn.