Mơi trường nuơi cấy mơ thực vật cĩ thành phần rất phức tạp, cĩ sự hiện diện của rất nhiều loại hố chất với hàm lượng rất nhỏ.
Các mơi trường nuơi cấy hay mơi trường làm việc sẽ được pha trước các dung dịch đậm đặc (cân hố chất mỗi lần pha với độ đậm đặc từ X10 – X100 - dung dịch mẹ (stock)).
Dung dịch đậm đặc sau đó s ẽ được pha loãng khi sử dụng. Các dung dịch đậm đặc được bảo quản dài ngày trong tủ lạnh thường hoặc tủ lạnh sâu.
Thơng thường pha các dung dịch mẹ: stock đa lượng, stock vi lượng, Fe – EDTA, stock vitamin, stock chất sinh trưởng, và các stock cần thiết khác.
Ví Dụ: Pha 1 lít mơi trường MS cĩ cơng thức: MS + Suc (30g/l) + Agar (8g/l), pH=5,8 MS + Suc (30g/l) + Agar (8g/l), pH=5,8
Bước 1: Chọn mơi trường cần pha
Bước 2: Chuẩn bị, kiểm tra đầy đủ hĩa chất – trang thiết bị - dụng cụ
Bước 3: Pha chế các dung dịch mẹ (stock)
3.1. Pha stock khống đa lượng nồng độ đậm đặc 20 lần (x20)
3.2. Pha stock khống vi lượng nồng độ đậm đặc 100 lần (x100)
3.3. Pha stock vitamin nồng độ đậm đặc 100 lần (x100)
3.4. Pha stock Fe-EDTA nồng độ đậm đặc 100 lần (x100)
3.5. Pha stock các hormon điều hịa sinh trưởng thực vật
Bước 4: Pha mơi trường làm việc: tiến hành tuần tự
- Dùng ống đong, đong khoảng 500 ml nước cất vào becher - Bổ sung 30 g đường sucrose vào, khuấy tan hồn tồn
- Bổ sung 50 ml dung dịch stock đa lượng x20, khuấy đều. - Bổ sung 10 ml dung dịch stock vi lượng x100, khuấy đều. - Bổ sung 10 ml dung dịch stock Fe-EDTA x100, khuấy đều. - Bổ sung 10 ml dung dịch stock vitamin x100, khuấy đều.
- Bổ sung stock điều hịa sinh trưởng thực vật với lượng tùy mục đích nuơi cấy.
- Chuyển tất cả dung dịch vào bình định mức, dùng nước cất chuẩn lại cho đủ 1000 ml.
- Chỉnh pH của dung dịch bằng NaOH 1N hay HCl 1N về pH=5,8.
- Bổ sung 8g agar.
- Đun sơi cho tan agar, khuấy đều. Chia hỗn hợp mơi trường vào các bình nuơi cấy. Hấp khử trùng bằng autoclave ở 1210C, 1atm, 30phút. Mơi trường sau khi hấp được bảo quản ở 250C.