Exon Loại đột biến Tỷ lệ n % 2 Đột biến điểm 4 12,9 3 Đột biến điểm 7 22,6 7 Đột biến điểm 14 45,2 8 Đột biến điểm 0 0 Từ 2 đến 7 Đột biến xóa 5 16,1 Từ4 đến 7 Đột biến xóa 1 3,2 Chung 31/70 100
Phát hiện 31 đột biến trên gen EGFR: trong đó đột biến điểm trên exon 7 chiếm cao nhất (45,2%), đứng thứ 2 là đột biến điểm trên exon 3 (22,6%), tiếp theo là đột biến xóa đoạn từ exon 2 đến exon 7 (16,1%) và đột biến điểm trên exon 2 (12,9%), thấp nhất là xóa từ exon 4 đến exon 7 (3,2%).
81
3.2.5. Kết quả giải trình tự phát hiện đột biến trên exon 12 và exon 13 gen FGFR FGFR
Sản phẩm nhân bản exon 12 và exon 13 gen FGFR được giải trình tự và so sánh kết quả với trình tự chuẩn trên GeneBank bằng phần mềm CLC Main
Workbench.
* Kết quảđột biến vị trí p.N546K trên exon 12 gen FGFR
A)
B)
Hình 3.16. Hình ảnh kết quả giải trình tự đoạn exon 12 gen FGFR
chứa đột biến điểm p.N546K
A) Mẫu đại diện có đột biến của bệnh nhân UNBTKĐ mã số GB48 B) Mẫu đại diện khơng có đột biến của bệnh nhân UNBTKĐ mã số GB49
Kết quả giải trình tự ở mẫu GB48, tại vị trí codon 546 bên dưới tín hiệu của đỉnh C, có xuất hiện tín hiệu của đỉnh A, đột biến điểm tại vị trí acid amin 546 làm thay đổi mã bộ ba AAA mã hóa cho acid amin Asparasine, thành
AAC mã hóa cho acid amin Lysine, ký hiệu p.N546K. Mẫu GB49 không phát hiện thấy đột biếndạng này.
82
* Kết quả đột biến vị trí p.A575V trên exon 13 gen FGFR
A)
B)
Hình 3.17. Hình ảnh kết quả giải trình tự đoạn exon 13 gen FGFR chứa đột biến điểm p.A575V
A) Mẫu đại diện có đột biến của bệnh nhân UNBTKĐ mã số GB46
B) Mẫu đại diện khơng có đột biến của bệnh nhân UNBTKĐ mã số GB55
Kết quả trên hình cho thấy sản phẩm giải trình tự rõ nét, các đỉnh màu tương ứng với các nucleotide rõ ràng và khơng có tín hiệu nhiễu, tương đồng với trình tự exon 13 của gen FGFR, chứng tỏ sản phẩm PCR đặc hiệu. Kết quả giải trình tự ở mẫu GB46, tại vị trí codon 575 bên dưới tín hiệu của đỉnh C, có xuất hiện tín hiệu của đỉnh T, đột biến điểm tại vị trí acid amin 575 làm thay đổi mã bộ ba CCC mã hóa cho acid amin Alanine thành TCC mã hóa cho
acid amin Valine, ký hiệu p.A575V; Mẫu GB55 không phát hiện thấy dạng đột biến này.
83
* Kết quả đột biến vị trí p.R576W trên exon 13 gen FGFR
A)
B)
Hình 3.18. Hình ảnhgiải trình tự đoạn exon 13 gen FGFR chứa đột biến điểm p.R576W
A) Mẫu đại diện có đột biến của bệnh nhân UNBTKĐ mã số GB52 B) Mẫu đại diện khơng có đột biến của bệnh nhân UNBTKĐ mã số GB48
Tại vị trí codon 576 trên exon 13 gen FGFR, bên dưới tín hiệu của đỉnh C, có xuất hiện tín hiệu của đỉnh T chứng tỏ có đột biến biến đổi nucleotid C thành T. Kết quả làm thay đổi mã bộ ba CGG mã hóa cho acid amin Arginine,
thành TGG mã hóa cho Triptophan, tại codon 576 trên phân tử protein, kí hiệu
là p.R576W.
Giải trình tự 70 mẫu xác định đột biến điểm trên exon 12 và exon 13 của gen FGFR, kết quả được trình bày ởbảng 3.6.
84