C .4 H 4 0 4 N 2 S Q H i o O Q 3 H 2 4 O 5 N 2 S
2.2.4-Phưoìig pháp thử tác dụng sinh học của các chất tổng hợp được
Với mục đích tổng hợp những dãy chất mới có tác dụng sinh học hy vọng có thể có ý nghĩa trong ngành dược, chúng tôi đã tiến hành thử tác dung kháng khuẩn, kháng nấm của các chất tổng hợp được bao gồm 4 hợp chất azomethin và 8 hợp chất P-aminoceton, từ đó tìm hiểu mối liên quan giữa cấu trúc hoá học và tác dụng sinh học của các chất này.
Thử đinh tính theo phươnspháp khuvếch tẩn trên thãch ÍDươc điển Viêt Nam m )
* Môi trườns:
- Môi trường thạch nền (môi trường 1)
Thạch : 18g
Nước cất v/đ rlOOOml
-Môi trường cao thịt- cao men -Môi trường Sabouraud
(môi trường 2) (Môi trường 3)
Pepton :1 0g Pepton :10g Cao thịt :l,5g Glucose : 20g Cao men :3g Thạch :13g Glucose : Ig Nước cất v/đ :1000ml Thạch : 13g PH = 5,8 ± 0,2 Nước cất v/đ : lOOOml PH =7,2 ±0,2 * Chuẩn bị nhũ dịch vi sinh vật
Các chuẩn vi sinh vật trước khi thử được cấy vào các môi trường dinh dưỡng thích hợp. Sau 18 - 24h nuôi cấy được làm thành các nhũ dịch vi sinh vật có nồng độ khoảng 10’ đến 10* tế bào/ml trong NaCl 0,9%
* Chuẩn bị mẩu thử :
Các mấu thử được pha thành các nồng độ theo qui định trong dung môi dimethylformamid. Sau đó cho 0,0 Iml dung dịch thử vào mỗi khoanh giấy sắc ký đường kính 7mm, trọng lượng trung bình 4mg (đã tiệt trùng) để bay hơi hết dung môi ở 37”c, trung bình mỗi khoanh giấy có khoảng 2 0 0mcg hoạt chất.
Trên các hộp petri có đường kính bằng nhau đổ khoảng 10 -12 ml môi trường Iđể tạo mặt phẳng, sau đó cho thêm 8ml môi trường 2 (đối vói vi khuẩn) và môi trường 3 (đối với vi nấm) có trộn nhũ dịch vi sinh vật kiểm định với tỷ lệ 1% so với môi trường lên bề mặt môi trường 1. Khi thạch nguội, các khoanh giấy tẩm chất thử được đặt lên bề mặt thạch theo một sơ đồ đã qui định, để ở nhiệt độ phòng trong 2h cho các chất thử khuyếch tán vào môi trường. Kết quả được đọc sau 18-24h nuôi cấy ở nhiệt độ 35®c đến 37°C(đối với vi khuẩn) và 25°c - 28®c (đối với vi nấm). Đo đường kính vòng vô khuẩn chính xác đến 0,lmm.
Song song vói các mẫu thử làm mẫu chứng âm (khoanh giấy chỉ tẩm dimethylformamid) và mẫu so sánh là sulfanilamid.
Kết quả được ghi trong bảng 6
Bảng 6: Phổ kháng khuẩn, kháng nấm của các chất tổng hợp.
vsv chất thử
Đường kính vòng vô khuẩn (mm)