Chun b thí ngh im

Một phần của tài liệu 0335NGHIÊN CỨU TÓI ƯU HÓA QUY TRÌNH THỦY PHÂN CÁ TẠP ĐẺ SẲN XUẤT CHẺ PHÁM SINH HỌC SỬ DỰNG LÀM THỨC ĂN CHO CÁ LÓC BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUY HOẠCH THỰC NGHIỆM (Trang 63 - 71)

Hình 3.6 Kt qu thí nghi mt ng thích gi a2 ch ng thí ngh im

P HN 2 VT L IU VÀ H NG HÁ NGHIÊ NC U

2.12. Thí ngh im kho sát nhi tđ kh trùng nguyên l iu cá tp

2.12.1. Chun b thí ngh im

D ch khu n: 2 ch ng B. polyfermenticus F27, B. subtilis Q111, đ c t ng sinh

riêng bi t trong 20 mL môi tr ng NB 37 OC, 24 gi , l c t c đ 200 vòng/phút (Nguy n Th Tr n Th y, 2009). M t đ vi khu n sau khi t ng sinh đ c xác đnh

b ng ph ng pháp đ m tr c ti p trên bu ng đ m (m c 2.5.1) tr c khi b t đ u th nghi m và đ c gi l nh cho đ n khi th nghi m đ tránh sai s .

Chu n b d ng c đ ng m u: bình serum 100 mL h p vơ trùng 121 OC, 15 phút. Nguyên li u cá sau khi qua s ch đ c cho vào các bình serum, m i bình 50 mL.

2.12.2. Ti n hành thí nghi m

Nguyên li u cá sau khi s ch đ c cho vào bình schott sau đó đ c kh trùng v i các đi u ki n khác nhau theo b ng 2.1.

B ng 2.1. B ng b trí thí nghi m kh o sát nhi t đ kh trùng

Th t Nghi m th c Th tích nguyên li u Nhi t đ Th i gian

1 NT 1 500 mL 70 OC 30 phút

2 NT 2 500 mL 80 OC 30 phút

3 NT 3 500 mL 121 OC 30 phút

Ki m tra m t đ vi sinh trong các m u: pha loãng dch cá đ n n ng đ thích h p trang lên đ a NA 37 OC, 24 gi .

Ki m tra kh n ng th y phân c a nguyên li u cá v i đi u ki n: m t đ VK ban

đ u là 106 CFU/mL, n ng đ NaCl là 5%, n ng đ m t r 0%, pH = 6,5.

2.12.3. c k t qu

K t qu m t đ vi sinh đ c xác đ nh theo ph ng pháp gián ti p (m c 2.5.2) Ki m tra các ch s đ m: đ m nit t ng s b ng ph ng pháp Kjeldahl (m c 2.6.1), đ m axit amin b ng ph ng pháp đ nh đ m axit amin (m c 2.6.2) t i 2 th i

đi m b t đ u và sau khi th y phân 5 ngày.

2.13. Thí nghi m xác đnh y u t nh h ng

2.13.1. Thi t k thí nghi m

xác đnh y u t quan tr ng nh h ng đ n q trình th y phân, thí nghi m

đ c b trí v i các bi n s sau: n ng đ vi sinh v t b sung, n ng đ mu i, pH (Tr n Thanh D ng, 2007), n ng đ m t r b sung (Lê Xuân Ph ng, 2008).

Thí nghi m đ c b trí theo thi t k Plackett – Burman (Plackett và Burman, 1946) m i nghi m th c đ c th c hi n v i 3 l n l p l i và x lý k t qu b ng ph n m m Minitab 16 c a Minitab Inc. (USA).

Giá tr các bi n s đ c trình bày trong b ng 2.2 v i m i bi n đ c kh o sát 2 m c đ cao (+1) và th p (-1).

B ng 2.2. Giá tr các bi n s trong thí nghi m xác đnh y u t nh h ng đ n quá trình th y phân theo thi t k Plackett – Burman

Th t Y u t n v Giá tr t ng c p đ -1 1 1 M t đ VK ban đ u CFU/mL 104 106 2 NaCl % 1 5 3 M t r % 0,3 1,2 4 pH - 5 7

nh h ng c a các y u t đ n s th y phân, th hi n qua đ đ m axit amin (Tr n

Thanh D ng, 2007) xác đnh đ c sau 36 thí nghi m, đ c mơ t qua ph ng trình

h i quy b c nh t g i giá tr y u t th i là Xi (i = 1, 2, 3, 4) là: Y= + 1X1+ 2X2+ 3X3+ 4X4 V i: : là ch n (intercept) t c giá tr lúc Xi = 0.

i: là đ d c (gradient) c a y u t th i.

D a vào ph ng trình h i quy, n u m c ý ngh a đ t trên 95% (p < 0,05), thì y u t đó đ c coi là có nh h ng đ n s th y phân nguyên li u cá (Nguy n V n Tu n, 2007).

2.13.2. Ti n hành thí nghi m

D ch khu n: 2 ch ng B. polyfermenticus F27, B. subtilis Q111, đ c t ng sinh

riêng bi t trong 20 mL môi tr ng NB 37 OC, 24 gi , l c t c đ 200 vòng/phút (Nguy n Th Tr n Th y, 2009). M t đ vi khu n sau khi t ng sinh đ c xác đnh b ng ph ng pháp đ m tr c ti p trên bu ng đ m (m c 2.5.1) tr c khi b t đ u th nghi m và đ c gi l nh cho đ n khi th nghi m đ tránh sai s .

Chu n b d ng c đ ng m u: bình serum 100 mL h p vơ trùng 121 OC, 15 phút. Nguyên li u cá sau khi qua s ch và kh trùng đ c cho vào các bình serum, m i bình 50 mL.

Các y u t kh o sát đ c b sung theo đúng thi t k Plackett – Burman c a ph n m m Minitab 16.

Các y u t không đ c kh o sát đ c gi c đ nh:

• Th i gian: 20 ngày

• Nhi t đ : nhi t đ phịng

• T c đ l c: 120 vòng/phút

2.13.3 c k t qu

Sau 20 ngày th y phân, k t qu đ c xác đ nh b ng cách đo n ng đ đ m axit amin trong các bình serum. N ng đ đ m đ c xác đnh b ng ph ng pháp đnh

l ng đ m axit amin (m c 2.6.4).

K t qu sau khi xác đ nh đ c th ng kê, phân tích b ng ph n m m Minitab 16.

2.14. Thí nghi m kh i đ u

2.14.1. Thi t k thí nghi m

Sau thí nghi m xác đnh y u t nh h ng chính, chúng tơi ti n hành thí nghi m kh i đ u c a ph ng pháp t i u hóa v i các y u t nh h ng khơng có ý ngh a

th ng kê trong thí nghi m tr c đã đ c lo i b .

Thí nghi m đ c thi t k d ng riêng ph n theo thi t k Plackett – Burman. Thi t k đ c b sung thêm các đi m thí nghi m trung tâm nh m đánh giá m c đ phù h p c a ph ng trình b c nh t xây d ng cho hàm m c tiêu.

M i y u t đ c kh o sát 3 m c đ : m c đ cao (+1) và m c đ th p (-1) và m c trung tâm (0). Thi t k đ c b trí d a theo ph ng pháp quy ho ch th c nghi m b ng ph n m m th ng kê Minitab 16. Thí nghi m đ c l p l i 3 l n. (Nguy n V n D và c ng s , 2011)

nh h ng c a các y u t đ n s th y phân, th hi n qua đ đ m axit amin (Tr n

Thanh D ng, 2007), đ c mơ t qua ph ng trình h i quy b c nh t g i giá tr y u t th i là Xi (i = 1, 2, 3, 4) là:

Y= + 1X1+ 2X2+ 3X3+ 4X4 V i: : là ch n (intercept) t c giá tr lúc Xi = 0.

i: là đ d c (gradient) c a y u t th i.

2.14.2. Ti n hành thí nghi m

D ch khu n, d ng c đ ng m u, nguyên li u cá đ c chu n b t ng t m c 2.13.2.

Ti n hành thí nghi m kh i đ u theo thi t k c a ph n m m Minitab 16 v i 3 c p

đ thí nghi m (-1; 0; 1) cho m i y u t , th c hi n 3 l n l p l i và x lý k t qu b ng ph n m m Minitab 16. Các y u t không đ c kh o sát đ c gi c đ nh: • Th i gian: 72 gi • Nhi t đ : nhi t đ phịng • T c đ l c: 120 vòng/phút 2.14.3. c k t qu Sau 72 gi th y phân, k t qu đ c xác đnh t ng t m c 2.13.3. 2.15. Tìm kho ng t i u c a các y u t nh h ng chính b ng ph ng pháp leo d c 2.15.1. Thi t k thí nghi m

N u k t qu c a b c kh i đ u cho th y có th mơ t hàm m c tiêu b ng m t hàm h i quy b c nh t, đi u đó ch ng t vùng thí nghi m kh o sát còn xa vùng c c tr . Ti n hành các thí nghi m leo d c nh m xác đ nh vùng c c tr . Các thông s cho

ph ng pháp này đ c tính tốn thơng qua h s h i quy t ph ng trình h i quy c a thí nghi m kh i đ u.

y = b + b x + + b x

T m c c s c a các y u t này và các h s h i quy, các b c chuy n đ ng s

đ c tính nh sau:

Ch n b c chuy n đ ng ng v i y u t có giá tr tuy t đ i c a h s h i quy l n nh t và tính tốn các b c chuy n đ ng cịn l i b ng các cơng th c:

= b b

Trong đó: : kho ng bi n thiên.

b : h s h i quy c a y u t x1.

: b c chuy n đ ng c a y u t x1.

T k t qu tính tốn b c chuy n đ ng c a t ng y u t nh h ng, thí nghi m b t đ u t m c trung tâm c a các y u t nh h ng chính. (Nguy n V n D và c ng s , 2011)

2.15.2. Ti n hành thí nghi m

D ch khu n, d ng c đ ng m u, nguyên li u cá đ c chu n b t ng t m c 2.13.2.

Ti n hành thí nghi m leo d c theo theo giá tr b c chuy n đ ng đã tính đ c, m i y u t nh h ng đ c c ng thêm m t giá tr b c chuy n đ ng trong m i

b c leo d c. Các y u t không đ c kh o sát đ c gi c đ nh: • Th i gian: 72 gi • Nhi t đ : nhi t đ phòng • T c đ l c: 120 vịng/phút 2.15.3. c k t qu Sau 72 gi th y phân, k t qu đ c xác đnh t ng t m c 2.13.3. 2.16. Thí nghi m b m t ch tiêu 2.16.1. Thi t k thí nghi m

Khi vào đ n vùng c c tr , thí nghi m b m t ch tiêu đ c th c hi n nh m xác

đnh giá tr t i u c a các y u t nh h ng chính. T k t qu c a các thí nghi m

tr c, thi t k Box – Behnken đ c s d ng đ xác đnh giá tr t i u c a các y u t

nh h ng.

Thi t k đ c b trí d a theo thi t k Box –Behnken trong ph ng pháp quy

ho ch th c nghi m b ng ph n m m th ng kê Minitab 16. M i y u t nh h ng

đ c kh o sát 3 m c đ : m c đ cao (+1) và m c đ th p (-1) và m c trung tâm (0). Thí nghi m đ c l p l i 3 l n. (Nguy n V n D và c ng s , 2011)

Các y u t không đ c kh o sát đ c gi c đ nh:

• Th i gian: 72 gi

• Nhi t đ : nhi t đ phịng

• T c đ l c: 120 vòng/phút

2.16.2. Ti n hành thí nghi m

D ch khu n, d ng c đ ng m u, nguyên li u cá đ c chu n b t ng t m c 2.13.2.

Ti n hành thí nghi m b m t ch tiêu theo thi t k Box – Behnken c a ph n m m Minitab 16 v i 3 m c đ thí nghi m (-1; 0; 1) cho m i y u t , th c hi n 3 l n l p l i và x lý k t qu b ng ph n m m Minitab 16.

2.16.3. c k t qu

Sau 72 gi th y phân, k t qu đ c xác đnh b ng cách ki m tra n ng đ đ m axit amin và m t đ vi khu n có l i trong các m u thí nghi m.

N ng đ đ m axit amin đ c xác đnh b ng ph ng pháp đ nh l ng đ m axit amin (m c 2.6.4).

K t qu m t đ vi sinh v t đ c xác đnh b ng ph ng pháp gián ti p (m c 2.5.2).

PH N 3

Một phần của tài liệu 0335NGHIÊN CỨU TÓI ƯU HÓA QUY TRÌNH THỦY PHÂN CÁ TẠP ĐẺ SẲN XUẤT CHẺ PHÁM SINH HỌC SỬ DỰNG LÀM THỨC ĂN CHO CÁ LÓC BẰNG PHƯƠNG PHÁP QUY HOẠCH THỰC NGHIỆM (Trang 63 - 71)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(115 trang)