- Nuôi cấy tiếp tục, sau –3 ngày kiểm tra sự biểu hiện của protein
3.7.Các kỹ thuật bảo quản tế bào a/ Ky ̃ thuậtĐông lạnh Tế bào
• Đông lạnh tế bào động vật là sử dụng môi trường đông lạnh, nhiệt độ thấp (-800C, -1960C) để lưu giữ các tế bào động vật phục vụ cho nghiên cứu và ứng dụng.
• Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình đông lạnh gồm: - Tốc độ đông lạnh
- Kỹ thuật đông lạnh - Chất bảo quản lạnh
- Môi trường dinh dưỡng - Nhiệt độ bảo quản
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.7. Các kỹ thuật bảo quản tế bàoa/ Kỹ thuật Đông lạnh Tế bào a/ Kỹ thuật Đông lạnh Tế bào
• Quy trình bảo quản đông lạnh
Chuẩn bị
- Môi trường đông lạnh và các ống đông lạnh chuyên dụng. - Môi trường này thường là môi trường dinh dưỡng, bổ sung khoảng 20-90 % huyết thanh và khoảng 5-10 % chất bảo quản lạnh ( DMSO, Glycerol…)
Bảo quản
- Chuyển dịch huyền phù tế bào nuôi cấy đang ở pha log vào
ống ly tâm, tiến hành ly tâm ở nhiệt độ 2 - 80C với tốc độ
khoảng 1000 v/p trong 5 phút.
- Trộn tế bào vào môi trường đông lạnh để tạo dạng huyền phù, mật độ thích hợp khoảng 107 tế bào/ml
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.7. Các kỹ thuật bảo quản tế bàoa/ Kỹ thuật Đông lạnh Tế bào a/ Kỹ thuật Đông lạnh Tế bào
Ghi nhãn, dùng giấy nến, bao gói và các ống đông lạnh có huyền phù vào tủ đông lạnh -800C trong một vài giờ, và chuyển vào giữ trong bình chứa Nitơ lỏng
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.7. Các kỹ thuật bảo quản tế bàob/ Kỹ thuật Giải Đông Tế bào b/ Kỹ thuật Giải Đông Tế bào
Mục đích: Khôi phục lại trạng thái hoạt động, đặc điểm, tính chất của tế bào trong nuôi cấy tế bào động vật.
Kỹ thuật giải đông có ảnh hưởng đến chất lượng tế bào:
- Nếu quá trình giải đông chậm, các tế bào bị tổn thương hoặc - Nếu quá trình giải đông chậm, các tế bào bị tổn thương hoặc bị chết nhiều, ảnh hưởng đến kết quả nuôi cấy.
- Nếu giải đông càng nhanh, đúng kỹ thuật, chất lượng tế bào càng tốt.
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.7. Các kỹ thuật bảo quản tế bàob/ Kỹ thuật Giải Đông Tế bào b/ Kỹ thuật Giải Đông Tế bào
Quy trình giải đông tế bào động vật có vú trữ lạnh theo quy trình của Schrieber’s gồm có các bước chủ yếu sau:
Lấy ống tế bào đông lạnh từ trong
bình Ni tơ lỏng, đặt ngay vào bình bình Ni tơ lỏng, đặt ngay vào bình
ổn nhiệt có lắc ở 37oC.
Chuyển dịch huyền phù tế bào
trong ống đông lạnh sang ống ly tâm 15ml vô trùng. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Bổ sung huyết thanh bê bào thai
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.7. Các kỹ thuật bảo quản tế bàob/ Kỹ thuật Giải Đông Tế bào b/ Kỹ thuật Giải Đông Tế bào
Ly tâm trong 5 phút với tốc độ
1000 vòng/phút
Bổ sung 5 - 6ml môi trường
dung dịch đã làm ấm dung dịch đã làm ấm
Chuyển sang bình nuôi, ủ ở
37oC trong điều kiện nồng độ
CO2 5 %.
Sau 24h thì kiểm tra kết quả
nuôi cấy, bỏ môi trường cũ và bổ sung 5 - 6ml môi trường mới
CHƯƠNG 3: NUÔI CẤY TẾ BÀO ĐỘNG VẬT
3.7. Các kỹ thuật bảo quản tế bàoc/ Chuẩn bị tế bào cho vận chuyển