Chương 2 : VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3 Phương pháp nghiên cứu
2.3.1 Phương pháp trích ly dịch chiết
a) Nguyên liệu:
Toàn cây Nhân trần lá tươi sau khi thu hái, sẽ được rửa sạch, sấy khô ở nhiệt độ 45oC và xay cho đến khi tạo thành bột có kích thước từ d=1,5 – 2 mm.
b) Chiết:
Mục đích: Chiết các hợp chất có trong cây Nhân trần tía nhờ dung mơi ethanol, q trình chiết được diễn ra trong thời gian 24 – 48 giờ, trên máy lắc 150 vòng/phút
Cách thực hiện: Ngâm Nhân trần tía vào dung mơi ethanol 70%, tỷ lệ khối lượng và dung môi là 1:10, lắc 12 – 24 giờ, với tốc độ lắc 150 vòng/phút, lặp lại 5 lần.
c) Lọc
Để thu hồi dịch chiết cần phải qua lọc thô để loại bỏ cặn bã nguyên liệu lẫn trong dịch chiết, thu dịch trong để chuẩn bị quá trình thu cao. Qúa trình lọc được thực hiện bằng máy lọc chân khơng với đường kính lọc 47mm, vùng lọc hiệu quả là 9,6 cm2 và tốc độ dịng 20 lít/phút.
d) Cô quay:
Nhằm thu hồi dung môi để tái sử dụng. Dịch sau cô quay được chuyển sang dung môi khác để loại bỏ hợp chất khác khơng mong muốn cũng như thực hiện q trình tiếp theo.
e) Chiết phân đoạn
Cao ethanol thơ sau đó được hịa vào nước cất vừa đủ để hòa tan cao và tiếp tục được phân chia bằng kỹ thuật chiết lỏng-lỏng.
Cho dung dịch cao ethanol vào bình lóng, thêm vào khoảng một thể tích Hexan (H) với tỉ lệ so với cao chiết là 1:1, lắc nhẹ, chờ cho hỗn hợp phân lớp hoàn toàn. Lúc này, nhẹ nhàng tháo van chiết lấy pha H nằm trên, pha nước nằm dưới được cho vào bình chứa, lặp lại quá trình này 4 lần.
Đuổi dung mơi bằng phương pháp cô quay ở nhiệt độ 45oC, thu được cao phân đoạn hexan.
Dịch còn lại tiếp tục được chiết với dung môi Hexan: Ethyl actete tỉ lệ 1:1 (H:Ea 1:1) theo phương pháp tương tự như trên, đuổi dung môi bằng phương pháp cô quay ở nhiệt độ 45oC đối với pha HE nằm trên ta thu được cao phân đoạn HE. Tiếp tục chiết như vậy với dung mơi ethyl acetate đối với phần dịch cịn lại nằm dưới, cô quay đuổi dung môi, thu đươc cao phân đoạn Ea.
Các cao phân đoạn được bảo quản ở nhiệt độ 0oC – 4oC để dùng cho các thí nghiệm tiếp theo.