Đường Glucose K2HPO4 KH2PO4 MgSO4 x 7 H2O FeSO4 x 7 H2O MnSO4 x 6 H2O ZnSO4 x 6 H2O CuSO4 x 6 H2O Na2MoO4 x 2 H2O Thạch Nước cấấ́t
Lưu ý: Điều chỉnh pH đến 6,5. Khử trùng riêng glucose (10g chế phẩm trong 50 ml H2O) và trộộ̣n đều sau khi để nguộộ̣i. phẩm trong 50 ml H2O) và trộộ̣n đều sau khi để nguộộ̣i.
Môi trường Beijerinckia Medium (DSMZ Medium 111)
1. Xác định hàà̀m lượậ̣ng NH4 + do vi khuẩn tạo ra bằng phương pháp so màà̀u (thuốấ́c thử phenol - nitroprusside) phenol - nitroprusside)
Húấ́t cẩn thậộ̣n 0,5 ml phần dịch trong sau khi ly tâm dịch nuôi vi khuẩn cho vào các ống nghiệm đãễ̃ chứa sẵn 2 ml nước cấấ́t khử trùng cộộ̣ng với 0,5 ml EDTA. Thêm 1 ml dung dịch Phenol nitroprusside và 2 ml dung dịch Sodium hypocloride vào mỗễ̃i ống, trộộ̣n đều dung dịch bằng máy Vortex. Để ổn định ở nhiệt đợộ̣ phịng khoảả̉ng 30 phúấ́t. Sau đó tiến hành đo OD ở bước sóng 636 nm (OD636nm). Kết quảả̉ đo OD của các dòng vi khuẩn được thay vào phương trình đờồ̀ thị đường chuẩn, từồ̀ đó suy ra được hàm lượng ammonium sinh ra trong dung dịch.
2. Xác định hàà̀m lượậ̣ng nitrogenase đượậ̣c tạo ra bằng phương pháp khử acetylene:
_ Tiến hành bơm acetylene vào các ống nghiệm có chứa vi khuẩn, lấấ́y 1 ml chạy trên sắc ký để xác định lượng khí ethylene sinh ra hoặc acetylene cịn lại và quy về hàm lượng nitrogenase (Tilak et al., 2006).
Phương pháp nhậậ̣n diện vi khuẩn
Định danh vi khuẩn bằng phương pháp giảả̉i trình tựộ̣ gen 16S. Tách chiết DNA tổng số của vi khuẩn và nhân đoạn gen mãễ̃ hóa 16S rRNA bằng kỹ thuậộ̣t PCR (Polymerase Chain Reaction). Xác định trình tựộ̣ đoạn gen mãễ̃ hóa 16S rRNA theo phương pháp của Sanger, sử dụng máy đọc trình tựộ̣ tựộ̣ đợộ̣ng ABI PRISM 3100 Avant Data Collection v1.0 và
Sequence Analysis. Trình tựộ̣ của đoạn gen mãễ̃ hóa 16S rRNA của mẫu được so sánh với các đoạn gen mãễ̃ hóa 16S rRNA đãễ̃ được cơng bố trên Blast Search. Sử dụng phần mềm Clustal X, Bioedit để phân loại chủng vi khuẩn.
Xử lý số liệu: Số liệu được xử lý theo phương pháp thống kê sinh học bằng phần mềm
Excel 2010 và Statistix 10.0.
ỨNG DỤNG
• Một số nghiên cứu cho biết năng lực cố định nito của B. indica và B. fluminensis được tăng lên nhiều khi có mặt lồi nấm men Lipomyces starkey (Y. Dommergues, 1965).
• Ngồi ra Beijerinckia cịn được ứng dụng trong quá trình ngâm chiết sinh học của tuyển khoáng.
Lipomyces starkey TIEU LUAN MOI download : skknchat123@gmail.com moi nhat
Bảng 2. Hiệu quả sử dụng một số phân vi sinh cố định đạm đối với cây trồng