PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU
2.7 Kỹ thuật PCR RFLP
2.7.1 Nguyên tắc
Nhằm khắc phục hiện tƣợng tạo ra quá nhiều băng DNA khi phân cắt genome bằng một enzyme giới hạn và phải thiết kế probe thích hợp trong việc phân tích sự đa hình DNA của kỹ thuật RFLP ngƣời ta đƣa ra kỹ thuật PCR – RFLP. PCR – RFLP là kỹ thuật dựa trên cơ sở khuyếch đại có chọn lọc một đoạn DNA bằng kỹ thuật PCR trƣớc. Sau đó tiến hành phân cắt đoạn DNA này bằng một enzyme thích hợp. Sự khác nhau của các băng DNA sau khi chạy điện di và nhuộm ethium bromide cho ta biết đƣợc sự đa hình của đoạn DNA. Nhƣ vậy quá trình thực hiện kỹ thuật PCR – RFLP gồm các giai đoạn sau:
Tiến hành phản ứng PCR với cặp primer thích hợp để phân lập đoạn DNA
cần phân tích sự đa hình.
Tiến hành phân cắt đoạn DNA này với một enzyme cắt thích hợp.
Chạy điện di xác định sự khác nhau của các băng DNA và đƣa ra kết luận.
2.7.2 Ứng dụng
Trong chọn giống thực vật có thể sử dụng kỹ thuật RFLP để chọn lọc trực tiếp các gen lặn mong muốn, khơng cần phân tích qua nhiều thế hệ. Mặt khác đối với các đặc điểm do nhiều gen kiểm sốt, hoặc có sự liên kết giữa các gen, sử dụng kỹ thuật RFLP để xác định quan hệ giữa các gen đó. Đây là một kỹ thụât có thể xác định sự
phân li di truyền của một số tính trạng theo qui luật Mendel. Ví dụ nhƣ kiểm tra gen xác định màu hoa,…
Trong chọn giống động vật, đây là một kỹ thuật hữu hiệu để xác định những con giống có đặc điểm di truyền tốt nhƣ những gen liên quan đến sinh sản, liên quan đến ngoại hình, liên quan đến phẩm chất thịt, sữa,…