Bảng 2 .1 Các chất chuẩn phẩm màu sử dụng
Bảng 2.2 Điều kiện gradient pha động của phương pháp LC-MS/MS
Thời gian
(phút)
ACN (%) Acid formic 0,1 % 1 20 80 8 70 30 12 70 30 12 90 10 15 90 10 15,01 20 80 20 20 80
- Khoảng tuyến tính: Trong khoảng 1 µg/L đến 500 µg/L. - Giới hạn phát hiện: Từ 5 µg/kg đến 50 µg/kg
- Độ thu hồi: từ 90% - 98% - Độ lặp lại: RSD ≤16,4%
Định tính: Dựa vào thời gian lưu, số khối mảnh mẹ và mảnh con và tỷ lệ tín hiệu giữa các
mẫu (bảng 2.1).
Định lượng: Dựa vào đáp ứng MRM của mảnh con định lượng (đánh dấu * trong bảng
2.1)
2.3.2 Phẩm màu được phép
Sử dụng phương pháp phân tích phẩm màu thực phẩm theo thường quy kỹ thuật của Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm Quốc gia, mã số NIFC.02.M.26, ban hành ngày 05/04/2020.
a, Xử lý mẫu
Dung môi chiết:
24
+ Hỗn hợp (B) CH3COONH4 0,13M : Cân khoảng 5,005g CH3COONH4 hòa tan và chuyển vào bình định mức 500ml bằng nước cất 2 lần, rung siêu âm.
Đối tượng mẫu nghiên cứu gồm 102 mẫu xúc xích, thịt xiên nướng, cá viên chiên, thịt viên được lấy ngẫu nhiên trên địa bàn Hà Nội. Mua ngẫu nhiên khoảng 200 g mỗi mẫu (tương ứng 3 xiên thịt hoặc 3 cái xúc xích). Chia thành hai phần bằng nhau để tiến hành chuẩn bị mẫu cho phân tích phẩm màu khơng được phép và phẩm màu thực phẩm theo hai quy trình riêng biệt.
Phân tích phẩm màu thực phẩm: Xay mẫu bằng máy xay sinh tố sao cho mẫu đồng nhất về màu sắc. Sau mỗi lần xay rửa cối, dao cắt và thìa, sau đó lau khơ. Ghi nhãn cho mỗi mẫu, cho mẫu vào túi zip, bảo quản trong tủ đông.
Chuẩn bị dung dịch mẫu thử: Cân chính xác 5g mẫu vào ống ly tâm 50 ml. Thêm 10ml hỗn hợp A và 10 ml hỗn hợp B vào ống ly tâm có chứa mẫu. Lắc xốy trong 2 phút. Rung siêu âm 15 phút ở 30 ℃, để nguội đến nhiệt độ phòng. Ly tâm 6000 vòng/5 phút. Phần dịch trong được gạn vào bình định mức 50 ml, phần cặn được chiết lặp với dung môi chiết ở trên. Định mức đến vạch bằng nước cất 2 lần, lọc. Dịch lọc được bơm vào hệ thống HPLC-PDA.
b, Phương pháp phân tích HPLC-PDA
Chuẩn bị dung dịch chuẩn:
Chuẩn bị dung dịch chuẩn gốc 1000 µg/ml: Cân chính xác 50 mg các chuẩn trên cân phân tích có độ chính xác 0,1 mg. Hịa và định mức đến 50 ml bằng nước, ta thu được dung dịch chuẩn gốc có nồng độ 1000 g/ml.
Dung dịch chuẩn trung gian 200 g/ml: Hút 5 ml dung dịch chuẩn gốc cho vào các bình định mức 25 ml, pha lỗng dung dịch bằng nước, lắc đều.
Dãy chuẩn làm việc nồng độ từ 0,1-50 g/ml pha trong nước cất.
Pha động: Cân 1,043g NaH2PO4.H2O hòa tan bằng nước cất 2 lần và chuyển vào bình định mức 1 lít, chỉnh đến pH 7,0 bằng NaOH 30%, định mức đến vạch bằng nước cất 2 lần, lọc qua màng 0,2 µm, rung siêu âm để loại khí.
Điều kiện phân tích:
- Cột C18 (250 x 4,6x 5µm)
25
Bảng 2.3. Điều kiện gradient pha động của phương pháp HPLC-PDA Thời gian (phút) Kênh A (%) Kênh B (%)