4 Kết quả cần đạt của phớa Việt Nam trong thực hiện nhiệm vụ hợp tỏc
2.3.2.1 Phương phỏp điều tra, thu thập và phõn lập mẫu bệnh và VSV đối khỏng
* Phương phỏp điều tra, thu thập và phõn lập mẫu VSV gõy bệnh
- Phương phỏp nghiờn cứu về vi khuẩn học và nấm học của trường đại học Damstadt, CHLB Đức, trường Đại học Quốc gia Seoul, Hàn Quốc và Viện Khoa học Cụng nghệ Hàn Quốc.
- Phương phỏp điều tra cơ bản và phõn lập VSV gõy hại theo phương phỏp nghiờn cứu BVTV ở quyển I, II, III ấn hành 1997, 1998 của Viện BVTV, tiờu chuẩn Bảo vệ thực vật (quyển 1) [20].
+ Phương phỏp phõn lập VSV gõy bệnh
- Phõn lập vi khuẩn R. solanacearum theo phương phỏp của Kelman A., 1954 [26]. Mẫu bệnh lấy từ thõn cõy bị bệnh cú triệu chứng hộo rũ xanh đột ngột, ở gốc nhổ lờn cú màu nõu đen, cũ mựi. Mẫu bệnh được khử trựng rồi lấy dịch cấy lờn mụi trường TZC. Sau 24 - 48h chọn khuẩn lạc đơn cú tõm màu hồng và xung quanh cú màu trắng ngà, rỡa mộp hơi nhầy là đặc trưng của vi khuẩn R. solanacearum. Sau đú thử phản ứng siờu nhạy trờn cõy thuốc lỏ và thử lại trờn cõy khoai tõy để kiểm tra triệu chứng đặc trưng cho bệnh HXVK.
- Phõn lập nấm F. solani theo phương phỏp của B.W.Burgess, B.A. Summerrell, et.al., 1994 [28]. Mẫu bệnh lấy từ phần thõn, lỏ và gốc cõy bị bệnh hộo vàng. Sau đú khử trựng rồi lấy dịch cấy trờn mụi trường PDA. Sau 24 - 48h lấy bào tử quan sỏt, chọn bào tửđặc trưng của nũi nấm F. solani, soi lờn kớnh để chọn bào tửđơn đặc trưng cho nghiờn cứu.
- Phõn lập nấm Phytophthora bằng bẫy du động bào tử trong dung dịch đất, sử dụng mồi bẫy là cỏnh hoa theo phương phỏp của giỏo sư David I.Get và Andre Drenth (2004) [27] như sau: Lấy mẫu đất ở gốc của cõy bị bệnh. Khuấy nhẹđất trong cốc bằng đũa thủy tinh, để đất lắng xuống trong 2 giờ (tốt nhất để qua đờm). Cắt cỏnh hoa cú màu sắc 0,5 x 0,5 cm (1 mồi bẫy) thả vào cốc nước trờn. Để cốc bẫy bào tử qua đờm ở nhiệt độ phũng. Quan sỏt cỏnh hoa sau 1,2,3 ngày thấy cỏnh hoa bị mất màu đem lờn kớnh hiển vi soi, quan sỏt thấy bào tử nấm Phytophthora. Làm thuần cỏnh hoa đem cấy lờn mụi trường: CA, CMA, PCA.
+ Phương phỏp thu thập mẫu, phõn lập VSV đối khỏng: Theo phương phỏp nghiờn cứu về vi khuẩn học và nấm học đối khỏng của trường đại học Damstadt, CHLB Đức, Viện Khoa học Cụng nghệ Hàn Quốc. Vi sinh vật - phương phỏp đỏnh giỏ hoạt tớnh đối khỏng vi khuẩn gõy bệnh hộo xanh cõy trồng cạn R. solanacearum Smith (10TCN 714-2006); vi sinh vật - phương phỏp đỏnh giỏ hoạt tớnh đối khỏng nấm gõy bệnh vựng rễ cõy trồng cạn (10TCN 867-2006); theo phương phỏp về VSV đối khỏng và phõn bún của tập III Tiờu chuẩn phõn bún, tuyển tập Phõn bún tiờu chuẩn nụng nghiệp Việt Nam, 2001 [22].
+ Định danh VSV gõy bệnh: Đối với vi khuẩn Ralstonia solanacearum theo
phương phỏp của Kelman A, 1954 [26]; nấm Fusarium solani theo phương phỏp của L.W. Burgess và cs., 1994 [28]. Nấm Phytophthora capsici phõn lập theo phương phỏp của Andre Drenth và David I.Guest, 2004 và Donald C. Erwin và Olaf K.Ribeiro, 2004 [27], [36]. Phõn lập VSV gõy bệnh cũng theo phương phỏp nghiờn cứu BVTV ở quyển I, II, III ấn hành 1997, 1998 của Viện BVTV.
+ Định danh VSV đối khỏng theo phương phỏp của trường Đại học Quốc gia Seoul, viện NIAST (2002) [51], [52]; Viện phũng trừ sinh học của trường Đại học Darmstadt, Cụng hoà Liờn Bang Đức, 2006 và phương phỏp nghiờn cứu vi sinh vật học của Nguyễn Lõn Dũng và cs., 1972 [9], [54].