CHƢƠNG 1 : TỔNG QUAN
1.6. Phƣơng pháp thăm dị hoạt tính sinh học về khả năng ức chế sự phát
của tế bào ung thƣ của phức chất
Phương pháp thử độ độc tế bào là phép thử nhằm sàng lọc, phát hiện các chất có khả năng kìm hãm sự phát triển hoặc diệt tế bào ung thư ở điều kiện in vitro. Các dịng tế bào ung thư nghiên cứu được ni cấy trong các môi trường nuôi cấy phù hợp có bổ xung thêm 10% huyết thanh phơi bị (FBS) và các thành phần cần thiết khác ở điều kiện tiêu chuẩn (5% CO2; 37oC; độ ẩm 98%; vơ trùng tuyệt đối). Tùy thuộc vào đặc tính của từng dịng tế bào mà thời gian cấy chuyển khác nhau. Dung dịch tế bào phát triển pha loãng sẽ được sử dụng để thử độc tính.
Hình 1.16: Phức chất của Pd(II) với bis(thiosemicacbazon) 2,5-hexanđion
Các dòng tế bào ung thư ở người được cung cấp bởi Bảo tàng giống chuẩn vi sinh vật của Mỹ (American Type Culture Collection), viết tắt là ATCC gồm: KB
(Human epidermic carcinoma) - ung thư biểu mô; Hep-G2 (Hepatocellular
carcinoma) - ung thư gan; LU (Human lung carcinoma)- ung thư phổi và MCF-7
(Human breast carcinoma) - ung thư vú. Trong đó dịng tế bào KB là dịng ln ln được sử dụng trong mọi phép thử độ độc tế bào.
Mẫu thử được pha loãng theo dãy nồng độ là 128; 32; 8;2 ;0,5 g/ml trong dung môi DMSO. Bổ sung 200l dung dịch tế bào pha loãng nồng độ 3.104 tế bào/ml vào mỗi giếng (đĩa 96 giếng) trong môi trường RPMI 1640 (Roswell Park Memorial Institute) cho các dịng tế bào Hep-G2, MCF-7, KB; mơi trường DMEM (Dulbecco’s Modifiel Eagle Medium) cho LU-1. Giếng điều khiển có 200 l dung dịch tế bào 3.104 tế bào/ml, ủ ở 37oC/5% CO2. Sau 3 ngày thêm 50 l MTT (3-(4,5- dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, 1mg/ml pha trong môi trường nuôi cấy không huyết thanh) và ủ tiếp ở 37oC/4 giờ; loại bỏ môi trường, thêm 100 l DMSO lắc đều đọc kết quả ở bước sóng 540 nm trên máy quang phổ.
Giá trị IC50 (50% inhibitor concentration - nồng độ ức chế 50%) được tính dựa trên kết quả số liệu phần trăm kìm hãm sự phát triển của tế bào bằng phần mềm máy tính table curve.