2.2.1. Dụng cụ và hoá chất
Các dung môi hữu cơ sử dụng: Hexane, chlorofome, etylaxetat, acetone, methanol và ethanol.
Dung môi hữu cơ để chiết mẫu thực vật, khảo sát sắc kí lớp mỏng, sắc kí cột phải là dung môi tinh khiết (PA). Nếu dung môi công nghiệp thì phải sử lý nhƣ sau: Dung mơi etylaxetat kỹ thuật đƣợc rửa axit 3 lần với dung dich Na2CO3 5%, sau đó đƣợc rửa bằng nƣớc cất đến pH=7. Làm khơ bằng Na2SO4 khan sau đó bằng CaCl2 khan, cất lấy etylaxetat ở phân đoạn có nhiệt độ sơi 76-780C.
Dung môi n-hecxane kỹ thuật đƣợc rửa bằng axit H2SO4 đậm đặc, sau đó đƣợc rửa bằng nƣớc cất đến pH=7, làm khô bằng Na2SO4 khan và cất lấy ở phân đoạn có nhiệt độ 67-680C.
Sắc kí lớp mỏng (SKLM) đƣợc chạy trên những bản nhôm tráng sẵn silicagel 60F254 độ dày 0,2mm của hãng Merck.
Các sắc đồ lớp mỏng đƣợc nhận bằng:
Thuốc thử Vanilin/H2SO4 1% (dùng để nhận biết các nhóm chức nhƣ steroit, tecpenoit, saponin, các chất màu, chất sáp…), đƣợc điều chế nhƣ sau: cho 0,2g vanilin vào 10ml H2SO4 đặc 98% khuấy đến khi tan hết, thu đƣợc dung dịch thuốc thử.
Thuốc thử Dragendorff để nhận biết các ankaloit, đƣợc điều chế nhƣ sau: Dung dịch 1: Lấy 0,85 gam NaHSO3 hoà tan trong 40ml nƣớc cất và 10 ml axit
axetic băng. Dung dịch 2: Lấy 8 gam KI hoà tan trong 20ml nƣớc cất. Lấy 2ml dung dịch 1 trộn với 5ml dung dịch 2 và thêm 20ml axit axetic sau đó thêm nƣớc đến 100ml là đƣợc thuốc thử Dragendorff.
Thuốc thử FeCl3 để nhận biết các hợp chất flavonoid, các axit cacboxylic. Chất hấp thụ dùng trong q trình sắc kí cột là silicagel cỡ hạt 0.040-0.063mm của hãng Merck.
Sắc kí cột sử dụng 3 loại cột có kích thƣớc khác nhau : Cột 1: Ø= 4cm; l= 100cm
Cột 2: Ø= 2.5cm; l=60cm Cột 3: Ø= 1.5 cm; l=40 cm
2.2.2. Thiết bị nghiên cứu
Máy xác định điểm chảy Boetius
Phổ hồng ngoại (IR) đƣợc ghi trên máy Impac 410-Nicolet FT-IR
Phổ khối lƣợng ESI-MS, APCI-MS Ion Trap Agilent 1200 Series (USA). Máy sắc kí khí nối ghép khối phổ GC-MS Agilent 6890N
Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân (NMR): 1
H-NMR, 13C-NMR, 13C-NMR-DEP- 135, 13C-NMR-DEP-90, HMBC, HSQC đƣợc ghi trên máy Brucker Advance- 500 MHz, chuẩn nội TMS (tetrametyl silan), độ chuyển dịch hoá học (δ) đƣợc biểu thị bằng ppm, hằng số J tính theo Hz.