chất kháng khuẩn từ chủng B. amyloliquefaciens subsp plantarum CP 1604
3.4. Thử nghiệm tính an tồn của chất kháng nấm và chất kháng khuẩn
3.4.2. Thử nghiệm khả năng sinh trưởng của cây
Hạt nẩy mầm được gieo vào trong đất tới khi cây phát triển ổn định (khoảng 5 - 7 ngày). Sau đó, dịch kháng sinh thô được phun trực tiếp lên các vị trí của bề mặt lá. Quan sát hàng ngày cho thấy mầu sắc và trạng thái lá khơng có hay xuất hiện những thay đổi khác biệt so với cây đối chứng. Sau 5 ngày, kích thước lá được đo lại và so sánh. Kết qủa cho thấy khơng có sự khác biệt về kích thước giữa nhóm
đối chứng và nhóm thí nghiệm (giá trị P đều > 0,05 ở từng phép so sánh, Bảng 3.10). Điều đó chứng tỏ chất kháng nấm và kháng khuẩn sản sinh từ chủng B. amyloliquefaciens subsp. plantarum CP 1604 không ảnh hưởng tới sự sinh trưởng
của các loại cây thử nghiệm.
Bảng 3.10. Khả năng sinh trưởng của cây non khi xử lý với chất kháng sinh
Tốc độ sinh trưởng của cây non (GTTB ± KBT, cm)
Đối chứng Thí nghiệm Giá trị P
Lá 1 Lá 2 Lá 1 Lá 2 Lá 1 Lá 2
Cây lúa 15,1 ± 0,3 9,1 ± 0,3 14,8 ± 0,2 9,0 ± 0,3 0,59 0,80 Cây lạc 19,0 ± 0,3 12,7 ± 0,3 19,8 ± 0,2 13,1 ± 0,1 0,06 0,28 Cây ngô 17,3 ± 0,5 14,7 ± 0,4 17,3 ± 0,3 15,2 ± 0,3 1,00 0,15
GTTB = Giá trị trung bình; KBT = Khoảng biến thiên
Sử dụng thuốc trừ sâu hóa học trong phịng trừ sâu bệnh hại cây không những gây ô nhiễm mơi trường mà cịn làm ảnh hưởng nghiêm trọng đến sức khỏe con người. Do đó, việc tìm kiếm các chất mới có thời gian bán hủy nhanh, tiêu diệt đặc hiệu vi sinh vật đích và có nguồn gốc từ vi sinh vật vẫn đang được các nhà khoa học quan tâm [12]. Vì vậy, nghiên cứu tiếp theo để thử nghiệm tính an tồn và hiệu quả phịng trừ bệnh hại cây là việc làm cần thiết nhằm tìm kiếm khả năng ứng dụng của chất kháng nấm và chất kháng khuẩn từ chủng B. amyloliquefaciens subsp. plantarum CP 1604 trong phát triển nông nghiệp xanh và bền vững.
KẾT LUẬN
- 15 chủng B. amyloliquefaciens subsp. plantarum phân lập được từ các vùng sinh thái khác nhau của Việt Nam có sự đa dạng cao về mặt di truyền.
- Các chủng này đều có khả năng sinh tổng hợp các chất kháng nấm và vi khuẩn gây hại cây trồng. Ngồi ra, các chủng này cịn có khả năng phân giải phosphate khó tan, sinh chất kích thích sinh trưởng thực vật IAA và sản sinh hàng loạt các enzyme thủy phân như lipase, protease, amylase, CMCase, xylanase và chitinase. - Chủng B. amyloliquefaciens subsp. plantarum CP 1604 sản sinh chất kháng nấm
và chất kháng khuẩn. Dựa trên phân tích khối phổ, chất kháng nấm được xác định là iturin A có trọng lượng phân tử là 1042 Da và chất kháng khuẩn là macrolactin A có trọng lượng phân tử là 402 Da.
- Chất kháng nấm bền nhiệt nhưng chất kháng khuẩn bị giảm hoạt tính khi bị xử lý ở 100o
C. Cả hai chất này đều giảm hoạt tính ở pH axít nhưng duy trì hoạt tính ở pH bazơ. Hoạt tính kháng nấm và kháng khuẩn khơng thay đổi khi xử lý với các enzyme thủy phân là trypsin, α-chymotrypsin, amylase, lipase và proteinase K. - Bước đầu thử nghiệm tính an tồn cho thấy chất kháng nấm và chất kháng khuẩn
sản sinh từ chủng CP 1604 không ảnh hưởng đến sự nẩy mầm và sinh trưởng của các loại hạt thóc, hạt lạc và hạt ngơ.
KIẾN NGHỊ
- Cần nghiên cứu triển khai ứng dụng các chủng B. amyloliquefaciens subsp. plantarum trong sản xuất các loại phân bón hữu cơ sinh học có khả năng phịng
chống các bệnh cây.
- Cần đánh giá hiệu quả tiêu diệt bệnh của chất kháng nấm và chất kháng khuẩn trên cây nhiễm bệnh.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1. Abriouel, H., C. M. Franz, N. Ben Omar and A. Galvez (2011), "Diversity and applications of Bacillus bacteriocins", FEMS Microbiol Rev, 35, pp. 201-232. 2. Arguelles-Arias, A., M. Ongena, B. Halimi, Y. Lara, A. Brans, B. Joris and P.
Fickers (2009), "Bacillus amyloliquefaciens GA1 as a source of potent antibiotics and other secondary metabolites for biocontrol of plant pathogens",
Microb Cell Fact, 8, pp. 63.
3. Ash, C., F. J.A.E., A. Wallbank and S. M. D. Collin (1991), "Phylogenetic heterogeneity of the genus Bacillus revealed by comparative analysis of small- subunit-ribosomal RNA sequences", Letters in Applied Microbiology, 13, pp.
202-206.
4. Borriss, R., X. H. Chen, C. Rueckert, J. Blom, A. Becker, B. Baumgarth, B. Fan, R. Pukall, P. Schumann, C. Sproer, H. Junge, J. Vater, A. Puhler, and H. P. Klenk (2011), "Relationship of Bacillus amyloliquefaciens clades associated
with strains DSM 7T and FZB42T: a proposal for Bacillus amyloliquefaciens
subsp. amyloliquefaciens subsp. nov. and Bacillus amyloliquefaciens subsp. plantarum subsp. nov. based on complete genome sequence comparisons", Int J Syst Evol Microbiol, 61, pp. 1786-1801.
5. Chakraborty, K., B. Thilakan, and V. K. Raola (2014), "Polyketide family of novel antibacterial 7-O-Methyl-5′-hydroxy-3′-heptenoate-macrolactin from seaweed-associated Bacillus subtilis MTCC 10403", J Agric Food Chem, 62,
pp. 12194-12208.
6. Chen, X. H., J. Vater, J. Piel, P. Franke, R. Scholz, K. Schneider, A. Koumoutsi, G. Hitzeroth, N. Grammel, A. W. Strittmatter, G. Gottschalk, R. D. Sussmuth, and R. Borriss (2006), "Structural and functional chracterization of three polyketide systhase gene clusters in Bacillus amyloliquefaciens FZB42", J
7. Chen, D., X. Liu, C. Li, W. Tian, Q. Shen, and B. Shen (2014), "Isolation of
Bacillus amyloliquefaciens S20 and its application in control of eggplant
bacterial wilt", J Environ Manage, 137, pp. 120-127.
8. Chowdhury, S. P., A. Hartmann, X. Gao, and R. Borriss (2015), "Biocontrol mechanism by root-associated Bacillus amyloliquefaciens FZB42 - a review", Front Microbiol, 6, pp. 780.
9. Chun, J., J. H. Lee, Y. Jung, M. Kim, S. Kim, B. K. Kim and Y. W. Lim (2007), "EzTaxon: a web-based tool for the identification of prokaryotes based on 16S ribosomal RNA gene sequences", Int J Syst Evol Microbiol, 57(Pt 10), pp.
2259-2261.
10. Chung, E. J., M. T. Hossain, A. Khan, K. H. Kim, C. O. Jeon, and Y. R. Chung (2015), "Bacillus oryzicola sp. nov., an Endophytic Bacterium Isolated from the Roots of Rice with Antimicrobial, Plant Growth Promoting, and Systemic Resistance Inducing Activities in Rice", Plant Pathol J, 31, pp. 152-164.
11. Cochrance, S. A. and J. C. Vederas (2014), "Lipopeptides from Bacillus and Paenibacillus spp.: A golden mine of antibiotic cadidates", Med Res Rev, 36,
pp. 4-31.
12. Copping L. G. and J. J. Mann (2000), "Biopesticides: a review of their action, applications and efficacy", Pest Mag Sci, 56, pp. 651-676.
13. Dunlap, C. A., S. J. Kim, S. W. Kwon, and A. P. Rooney (2015), "Bacillus
velezensis is not a later heterotypic synonym of Bacillus amyloliquefaciens; Bacillus methylotrophicus, Bacillus amyloliquefaciens subsp plantarum and
'Bacillus oryzicola' are later heterotypic synonyms of Bacillus velezensis based on phylogenomics", Int J Syst Evol Microbiol.
14. Dworkin, M., S. Falkow, E. Rosenberg, K. H. Schleifer and E. Stackebrandt (2006), "The Prokaryotes".
15. Freitas D. B., M. P. Reis, C. I. Lima-Bittencourt, P. S. Costa, P. S. Assis, E. Chartone-Souza, and A. M. Nascimento (2008), "Genotypic and phenotypic
diversity of Bacillus spp. isolated from steel plant waste", BMC Research Notes, 1, pp. 92-103.
16. Gabor E. M., Vreis E. J., and D. B. Janssen (2003), "Efficient recovery of environmental DNA for expression cloning by indirect extraction methods",
FEMS Microbiol Ecol, 44, pp. 153-163.
17. Glickmann E. and Y. Dessaux (1995), "A critical examination of the specificity of the salkowski reagent for indolic compounds produced by phytopathogenic bacteria", Appl Environ Microbiol, 61, pp. 793-796.
18. Goldman, E. and L. H. Green (2009), "Practical handbook of microbiology". 19. Gong, M., J. Wang, J. Zhang, H. Yang, X. Lu, Y. Pei, and J. Cheng (2006),
"Study of the antifungal ability of Bacillus subtilis strain PY-1 in vitro and identification of its antifungal substance (iturin A)", Acta Bioch Bioph Sin, 38,
pp. 233-240.
20. Gong, A. D., H. P. Li, Q. S. Yuan, X. S. Song, W. Yao, W. J. He, J. B. Zhang, and Y. C. Liao (2015), "Antagonistic mechanism of iturin A and plipastatin A from Bacillus amyloliquefaciens S76-3 from wheat spikes against Fusarium graminearum", PLoS One, 10, pp. 0116871.
21. Gustafson, K., M. Roman, and W. Fenical (1989), "The macrolactins, a novel class of antiviral and cytotoxic macrolides from a deep-sea marine bacterium",
J Am Chem Soc, 111, pp. 7519-7524.
22. Han, Y., B. Zhang, Q. Shen, C. You, Y. Yu, P. Li, and Q. Shang (2015), "Purification and Identification of Two Antifungal Cyclic Peptides Produced by
Bacillus amyloliquefaciens L-H15", Appl Biochem Biotechnol, 176, pp. 2202- 2212.
23. He, Z., D. Kisla, L. Zhang, C. Yuan, K. B. Green-Church, and A. E. Yousef (2007), "Isolation and identification of a Paenibacillus polymyxa strain that
coproduces a novel lantibiotic and polymyxin", Appl Environ Microbiol, 73, pp. 168-178.
24. He, S., H. Wang, X. Yan, P. Zhu, J. Chen, and R. Yang (2013), "Preparative isolation and purification of macrolactin antibiotics from marine bacterium
Bacillus amyloliquefaciens using high-speed counter-current chromatography in
stepwise elution mode", J Chromatogr A, 1272, pp. 15-19.
25. Holman W. I. M. (1943), "A new technique for the determination of phosphorus by the molyndenum blue method", Biochem, 37, pp. 256-259.
26. Hopwood D.A. (2007), "Streptomyces in Nature and Medicine: The antibiotic Makers", Oxford Univesity Press.
27. Huang, J., Z. Wei, S. Tan, X. Mei, Q. Shen, and Y. Xu (2014), "Suppression of bacterial wilt of tomato by bioorganic fertilizer made from the antibacterial compound producing strain Bacillus amyloliquefaciens HR62", J Agric Food Chem, 62, pp. 10708-10716.
28. Idriss, E. E., O. Makarewicz, A. Farouk, K. Rosner, R. Greiner, H. Bochow, T. Richter and R. Borriss (2002), "Extracellular phytase activity of Bacillus amyloliquefaciens FZB45 contributes to its plant-growth-promoting effect",
Microbiology, 148(Pt 7), pp. 2097-2109.
29. Kubo Y., Rooney A., Tsukakoshi Y., Nakagawa R., Hasegawa H., and K. Kimura (2011), "Phylogenetic analysis of Bacillus subtilis strains applicable to Natto (fermented soybean) production", Appl Environ Microbiol, 77, pp. 6463- 6469
30. Ji, S. H., N. C. Paul, J. X. Deng, Y. S. Kim, B. S. Yun, and S. H. Yu (2013), "Biocontrol Activity of Bacillus amyloliquefaciens CNU114001 against Fungal Plant Diseases", Mycobiology, 41, pp. 234-242.
31. Kim D. H., H. K. Kim, K. M. Kim, C. K. Kim, M. H. Jeong, K. H. Moon, and J. S. Kang (2011), "Antibacterial activities of macrolactin A and 7-O-succinyl macrolactin A from Bacillus polyfermenticus KJS-2 against vancomycin-
resistant enterococci and methicillin-resistant Staphylococcus aureus", Arch Pharm Res, 34, pp. 147-152.
32. Kang, S. M., R. Radhakrishnan, and I. J. Lee (2015), "Bacillus
amyloliquefaciens subsp. plantarum GR53, a potent biocontrol agent resists
Rhizoctonia disease on Chinese cabbage through hormonal and antioxidants regulation", World J Microbiol Biotechnol, 31, pp. 1517-1527.
33. Lecadet, M. M., E. Frachon, V. C. Dumanoir, H. Ripouteau, S. Hamon, P. Laurent and I. Thiery (1999), "Updating the H-antigen classification of Bacillus thuringiensis", J Appl Microbiol, 86(4), pp. 660-672.
34. Lee, H. and H. Y. Kim (2011), "Lantibiotics, class I bacteriocins from the genus Bacillus", J Microbiol Biotechnol, 21(3), pp. 229-235.
35. Madhaiyan, M., S. Poonguzhali, S. W. Kwon, and T. M. Sa (2010), "Bacillus
methylotrophicus sp. nov., a methanol-utilizing, plant-growth-promoting bacterium isolated from rice rhizosphere soil", Int J Syst Evol Microbiol, 60, pp. 2490-2495.
36. Maragakis, L. L. and T. M. Perl (2008), "Acinetobacter baumannii: epidemiology, antimicrobial resistance, and treatment options", Clin Infect Dis, 46(8), pp. 1254-1263.
37. Meena K. R. and S. S. Kanwar (2015), "Lipopeptides as the antifungal and antibacterial agents: Application in food safety and therapeutics", Biomed Res Int, pp. 173050.
38. Moyes, R. B., J. Reynolds and D. P. Breakwell (2009). "Differential staining of bacteria: gram stain", Curr Protoc Microbiol, 3.
39. Romero-Tabarez, M., R. Jansen, M. Sylla, H. L nsdorf, S. H ußler, D. A. Santosa, K. N. Timmis, and G. Molinari (2006), "7-O-Malonyl macrolactin A, a new macrolactin antibiotic from Bacillus subtilis active against methicillin-
resistant Staphylococcus aureus, vancomycin-resistant enterococci, and a small- colony variant of Burkholderia cepacia", Antimicrob Agents Chem, 50, pp.
1701-1709.
40. Rooney, A. P., N. P. Price, C. Ehrhardt, J. L. Swezey, and J. D. Bannan (2009), "Phylogeny and molecular taxonomy of the Bacillus subtilis species complex
and description of Bacillus subtilis subsp. inaquosorum subsp. nov", Int J Syst Evol Microbiol, 59, pp. 2429-2436.
41. Ruiz-Garcia, C., V. Bejar, F. Martinez-Checa, I. Llamas, and E. Quesada (2005), "Bacillus velezensis sp. nov., a surfactant-producing bacterium isolated from the river Velez in Malaga, southern Spain", Int J Syst Evol Microbiol, 55, pp. 191-195.
42. Pyoung, K., J. Ryu, Y. H. Kim, and Y. T. Chi (2010), "Production of biosurfactant lipopeptides iturin A, fengycin, and surfactin a from Bacillus subtilis CMB32 for control of Colletotrichum gloeosporioides", J Microbiol Biotechn, 20, pp. 138-145.
43. Schneider, K., X. H. Chen, J. Vater, P. Franke, G. Nicholson, R. Borriss, and R. D. Sussmuth (2007), "Macrolactin is the polyketide biosysthesis product of the pks2 cluster of Bacillus amyloliquefaciens FZB42", J Nat Prod, 70, pp. 1417-
1423.
44. Shivaji, S., P. Chaturvedi, K. Suresh, G. S. Reddy, C. B. Dutt, M. Wainwright, J. V. Narlikar and P. M. Bhargava (2006), "Bacillus aerius sp. nov., Bacillus aerophilus sp. nov., Bacillus stratosphericus sp. nov. and Bacillus altitudinis sp. nov., isolated from cryogenic tubes used for collecting air samples from high altitudes", Int J Syst Evol Microbiol, 56(Pt 7), pp. 1465-1473.
45. Van D. T. T., B. N. H. Linh, D. V. Hop, D. M. Phuong, and T. T. Trung (2014), "Identification of antibiotic-producing Bacillus sensu lato isolated from national parks of Hoang Lien and Phu Quoc in Vietnam", J Viet Env, 6, pp. 77-83.
46. Vos, P. D., G. M. Garrity, D. Jones, N. R. Krieg, W. Ludwig, F. A. Rainey, K. H. Schleifer and W. B. Whitman (2009), "BERGEY’S MANUAL OF Systematic Bacteriology".
47. Wang, X., and G. Liang (2014), "Control efficacy of an endophytic Bacillus amyloliquefaciens strain BZ6-1 against peanut bacterial Wilt, Ralstonia solanacearum", Biomed Res Int, pp. 465435.
48. Wu, Y., J. Yuan, W. Raza, Q. Shen, and Q. Huang (2014), "Biocontrol traits and antagonistic potential of Bacillus amyloliquefaciens strain NJZJSB3 against
Sclerotinia sclerotiorum, a causal agent of canola stem rot", J Microbiol Biotechnol, 24, pp. 1327-1336.
49. Yuan J, Li B, Zhang N, Waseem R, Shen Q & Huang Q (2012), "Production of bacillomycin- and macrolactin-type antibiotics by Bacillus amyloliquefaciens NJN-6 for suppressing soilborne plant pathogens", J Agric Food Chem, 60, pp. 2976-2981.
PHỤ LỤC
1. Hình ảnh hoạt tính enzyme của các chủng B. amyloliquefaciens subsp. plantarum
Hình ảnh vịng phân giải cơ chất tinh bột tan của 15 chủng B. amyloliquefaciens
subsp. plantarum phân lập ở các vùng sinh thái Việt Nam. Thứ tự lần lượt các
chủng như trình bày ở bảng 3.1.
Hình ảnh vịng phân giải cơ chất casein của 15 chủng B. amyloliquefaciens subsp.
plantarum phân lập ở các vùng sinh thái Việt Nam. Thứ tự lần lượt các chủng như
Hình ảnh vòng phân giải cơ chất tributyrin của 15 chủng B. amyloliquefaciens
subsp. plantarum phân lập ở các vùng sinh thái Việt Nam. Thứ tự lần lượt các
chủng như trình bày ở bảng 3.1.
2. Trình tự đa gen của chủng B. amyloliquefaciens subsp. plantarum CP 1604
>Seq1 [organism= B. amyloliquefaciens subsp. plantarum] strain CP 1604 gyrase subunit alpha (gyrA) gene, partial cds.
GCGTTATCGTATCCCGGGCGCTTCCGGATGTGCGTGACGGTCTGAAGCCGGTTCACAGACGGAT TTTGTACGCAATGAATGATTTAGGCATGACCAGTGACAAACCATATAAAAAATCTGCCCGTATC GTCGGTGAAGTTATCGGTAAGTACCACCCGCACGGTGACTCAGCGGTTTACGAATCAATGGTCA GAATGGCGCAGGATTTTAACTACCGCTACATGCTTGTTGACGGACACGGCAACTTCGGTTCGGT TGACGGCGACTCAGCGGCCGCGATGCGTTACACAGAAGCGAGAATGTCAAAAATCGCAATGGA AATTCTGCGTGACATTACGAAAGACACGATTGACTATCAAGATAACTATGACGGTTCAGAAAG AGAGCCTGCCGTCATGCCTTCGAGATTTCCGAATCTGCTCGTAAACGGGGCTGCCGGTATTGCG GTCGGAATGGCGACAAACATTCCCCCGCATCAGCTTGGGGAAGTCATTGAAGGCGTGCTTGCCG TAAGTGAGAATCCTGAGATTACAAACCAGGAGCTGATGGAATACATCCCGGGCCCGGATTTTCC GACTGCAGGTCAGATTTTGGGCCGGAGCGGCATCCGCAAGGCATATGAATCCGGACGGGGATC AATCACGATCCGGGCTAAGGCTGAAATCGAAGAGACTTCATCGGGAAAAGAAAGAATTATTGT CACGGAACTTCCTTATCAGGTGAACAAAGCGAGATTAATTGAAAAAATCGCGGATCTTGTCCGG GACAAAAAAATCGAAGGAATTACCGATCTGCGAGACGAATCCGACCGTAACGGAATGAGAATC GTCATTGAGATCCGCCGTGACGCCAATGCTCACGTCATTTTGAATAACCTGTACAAACAAACGG CCCTGCAGACGTCTTTCGGAATCAACCTGCTGGCGCT
>Seq2 [organism= B. amyloliquefaciens subsp. plantarum] strain CP 1604 polymerase subunit beta (rpoB) gene, partial cds.
AAAGATGATGTATACACATCTATTCACATTGAAGAATATGAATCAGAAGCACGTGATACAAAG CTTGGACCGGAAGAGATCACCCGCGATATTCCAAACGTAGGGGAAGACGCGCTTCGCAACCTT GATGACCGCGGAATTATCCGTATCGGTGCGGAAGTCAACGACGGAGACCTTCTCGTAGGTAAA GTAACGCCTAAAGGTGTAACTGAGCTTACGGCTGAAGAACGCCTTCTTCATGCGATCTTTGGAG AAAAAGCGCGTGAAGTCCGTGATACTTCTCTCCGTGTGCCTCACGGCGGCGGCGGAATTATCCA CGACGTAAAAGTCTTCAACCGTGAAGACGGCGACGAACTTCCTCCGGGAGTGAACCAGCTTGT ACGCGTATATATCGTTCAGAAACGTAAGATTTCTGAAGGTGATAAAATGGCCGGACGTCACGG AAATAAAGGGGTTATCTCGAAGATTCTTCCTGAAGAAGATATGCCTTACCTTCCTGACGGCACG CCGATCGATATCATGCTTAACCCGCTGGGTGTACCATCACGTATGAATATCGGTCAGGTATTAG AACTTCACATGGGTATGGCTGCCCGCTACCTCGGCATTCACATCGCGTCACCTGTATTTGACGGC GCGCGTGAAGAAGATGTGTGGGAAACACTTGAAGAAGCAGGCATGTCAAGAGACGCTAAAAC AGTTCTTTATGACGGCCGTACGGGAGAACCGTTCGACAACCGTGTATCAGTCGGAATCATGTAC ATGATCAAACTGGCTCACATGGTTGACGATAAACTTCATGCCCGTTCTACAGGTCCTTACTCACT TGTTACGCAGCAGCCTCTCGGCGGTAAAGCCCAATTCGGCGGACAGCGTTTCGGTGAGATGGAG GTTTGGGCGCTTGAAGCTTACGGCGCAGCTTACACGCTTCAAGAAATCCTGACTGTGAAGTCCG ATGACGTGG
>Seq3 [organism= B. amyloliquefaciens subsp. plantarum] strain CP 1604
phosphoribosylaminoimidazolecarboxamide formyltransferase (purH) gene, partial cds. AAAACTTCTTCAGGAAAACGGTGTGGATGTCATCGGCATTTCAGAAGTGACCGGATTTCCTGAA ATTATGGACGGACGGTTAAAAACACTCCATCCTAATATTCACGGCGGACTGCTTGCCGTAAGAG ACAATGAAGAGCATATGGCGCAGATCAATGAGCACGGCATTGCACCGATTGACCTTGTGGTCGT CAACCTTTATCCGTTTAAAGAAACGATTTCAAAAGAAGACGTAACATACGATGAAGCGATAGA AAACATTGATATCGGCGGTCCCGGCATGCTGCGCGCCGCATCGAAAAACCATCAGGATGTGAC GGTCATCACAGATCCGGCCGATTACAGCTCCGTGCTCAATGAGATGAAAGAACACGGCGGCGT TTCGCTCAAAAGAAAACGCGAGCTTGCGGCCAAAGTATTCCGCCATACTGCGGCATACGACGC ATTAATCGCTGATTACTTAACACGCGAGGCCGGTGAGAAAGACCCTGAGCAATTCACTGTTACT TTTGAGAAAAAACAGTCGCTCCGCTACGGTGAAAACCCTCACCAAGAGGCGGTTTTCTACCAAA GCGCACTTCCTGTCTCCGGTTCCATCGCGGCGGCAAAACAGCTTCACGGCAAAGAGCTTTCTTA CAACAATATTAAGGACGCGGATGCGGCCGTTCAAATCGTCCGGGAATTTACAGAACCCGCAGC TGTTGCCGTTAAACATATGAATCCATGCGGAGTCGGTACGGGAGCTTCAATTGAGGAAGCATTC AATAAAGCGTATGAAGCTGATAAAACCTCCATTTTCGGCGGCATCATCGCGCTGAACCGTGAAG TTGATCAGGCAACGGCTGAAGCCCTTCACGGCATCTTTTTAGAAATCA
>Seq4 [organism= B. amyloliquefaciens subsp. plantarum] strain CP 1604 polymerase C (polC) gene, partial cds.
GATATGGGATTTTTAAATGTGGCGTACAAGCGTCTTTTGAAAACGGAAAAAGCGAAAAATCCG GTCATTGATACGCTGGAACTCGCGCGTTTCCTGTATCCTGAATTTAAAAATCACCGCTTAAATAC GTTATGTAAGAAGTTTGATATCGAATTAACCCAGCATCACCGAGCGGTCTTTGACGCTGAAGCA ACGGGCTACCTGCTGTTGAAAATGCTCAAAGATGCCGCTGAAAAAGACATTTTTTATCATGATC AGCTGAATGAGAATATGGGACAATCCAATGCTTATCAAAGATCAAGGCCTTATCACGCTACATT GCTTGCCGTAAATGAGACCGGCCTTAAAAATCTGTTTAAGCTCGTGTCCATTTCTCATATTCAAT ATTTCTACAGAGTGCCGCGCATTCCGAGGTCGCAGCTTAATAAATACAGAGAAGGTCTGTTAAT CGGCTCTGCCTGTGACAGGGGAGAGGTCTTTGAAGGCATGATGCAAAAATCACCTGAAGAGGT TGAAGATATCGCATCATTCTATGATTATCTTGAAGTGCAGCCGCCGGAAGTATACAGACACCTT CTGCAGCTTGAGCTCGTCCGGGATGAAAAAGCGCTGAAAGAAATCATCGCCAACATCACGAAG CTCGGGGAAAAATTGAATAAGCCGGTCGTTGCCACCGGAAATGTTCACTATTTAAACGATGAGG ACAAAATTTACCGGAAGATCTTAATATCTTCCCAAGGCGGCGCCAACCCGTTAAACCGGCACGA ACTGCCTAAA
>Seq5 [organism=Bacillus velezensis] strain CP 1604 GroEL (groEL) gene, partial cds. TTACATGGTGACTGACTCTGATAAGATGGAAGCGGTTCTTGACAATCCTTACATCTTAATCACA GACAAAAAAATCACAAACATTCAAGAAATCCTTCCTGTGCTTGAGCAAGTTGTACAGCAAGGC AAACCATTGCTTCTGATCGCTGAAGATGTTGAAGGTGAAGCTCTTGCTACACTCGTTGTCAACA AACTTCGCGGCACATTCAACGCTGTTGCCGTTAAAGCTCCTGGCTTCGGTGACCGCCGTAAAGC AATGCTTGAAGACATCTCTGTTCTTACAGGCGGAGAAGTAATCACAGAAGACTTAGGCCTTGAC CTGAAATCTACTGAAATCGGACAATTGGGACGCGCTTCTAAAGTTGTGGTAACGAAAGAAAAC ACAACAATCGTAGAAGGCGCCGGCGACACTGAAAAAATCGCAGCTCGCGTTAACCAAATCCGC GCTCAAGTGGAAGAAACAACTTCTGAATTCGACAGAGAAAAATTACAAGAGCGTCTTGCGAAA CTTGCCGGCGGCGTAGCTGTCATCAAAGTCGGCGCTGCGACTGAAACTGAGCTGAAAGAGCGT AAACTTCGCATCGAAGACGCCCTCAACTCAACTCGCGCAGCTGTTGAAGAAGGTATCGTATCCG GCGGTGGTACAGCGCTTGTCAACGTATACAACAAAGTCGCTGCAGTGGAAGCTGAAGGCGATG CGCAAACAGGTATCAACATCGTGCTTCGCGCGCTTGAAGAGCCGATCCGTCAAATCGCACACAA TGCAGGACTTGAAGGATCTGTCATCGTTGAGCGCCTGAAAAATGAAAAAATCGGCGTAGGCTTC AACGCTGCA
>Seq6 [organism= B. amyloliquefaciens subsp. plantarum] strain CP 1604 16S ribosomal RNA gene, partial sequence.
GGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTCTGAACCGCATGGTTCAGACATA AAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAAC GGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGA CACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGAC
GGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAAC AAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACG TGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGC TCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAA CTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAG ATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAA GCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGT GTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACG GTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTT AATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGA CGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGT TGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATCTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCT AAGGTGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTA TGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAGGTTAAG CCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCG
3. Hình ảnh kháng các loại vi sinh vật kiểm định
Hình ảnh hoạt tính kháng S. hydrophilum của 15 chủng B. amyloliquefaciens subsp.
plantarum phân lập ở các vùng sinh thái Việt Nam. Thứ tự lần lượt các chủng như
Hình ảnh hoạt tính kháng X. oryzae của 15 chủng B. amyloliquefaciens subsp. plantarum phân lập ở các vùng sinh thái Việt Nam. Thứ tự lần lượt các chủng như
trình bày ở bảng 3.1.
4. Hình ảnh thử nghiệm tính an toàn của chất kháng nấm và kháng khuẩn tách chiết từ chủng CP 1604
Hình ảnh hạt ngơ nảy mầm sau 6 ngày.
Hình ảnh hạt thóc nảy mầm sau 4 ngày.
Hình ảnh cây lúa sau 5 ngày phun chất kháng nấm và chất kháng khuẩn từ dịch nuôi cấy chiết thô của chủng CP 1604
ĐC TN
Hình ảnh ngơ sau 5 ngày phun chất kháng nấm và chất kháng khuẩn từ dịch nuôi cấy chiết thô của chủng CP 1604