CHƢƠNG 2 : PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3. Phƣơng pháp đánh giá hiệu quả khử trùng của vật liệu bentonite
2.3.1. Vật liệu
- Vi khuẩn chủng quốc tế E.coli (ATCC1 14169) và Salmonella (ATCC 25241).
- Các loại vật liệu: Vật liệu gồm bentonite tinh chế, bentonite biến tính Na2CO3, bentonite biến tính H2SO4,bentonite biến tính LiOH gắn và không gắn nano bạc.
Bảng 2.1: Ký hiệu các loại mẫu bentonite tinh chế, biến tính
STT Tên mẫu Ký hiệu mẫu
1 Bentonite tinh chế B.TC
2 Bentonite biến tính Na2CO3 B.Na 3 Bentonite biến tính H2SO4 B.H
4 Bentonite biến tính LiOH B.Li
5 Bentonite tinh chế gắn nano bạc B.TC.Ag 6 Bentonite biến tính Na2CO3 gắn nano bạc B.Na.Ag 7 Bentonite biến tính H2SO4 gắn nano bạc B.H.Ag 8 Bentonite biến tính LiOH gắn nano bạc B.Li.Ag
2.3.2. Phương pháp thí nghiệm
2.3.2.1. Phương pháp xác định vịng kháng khuẩn của bentonite
Vi khuẩn đƣợc nuôi cấy trên môi trƣờng PCA ở 370C trong 48 giờ, thu sinh khối vi khuẩn trong nƣớc cất sao cho nồng độ đạt đƣợc 106
cfu/ml, trang đều 0,1 ml vi khuẩn này lên đĩa thạch khô (PCA). Bentonite gắn nano bạc đƣợc sấy khô ở 500C trong 2 giờ và bentonite không gắn nano bạc đƣợc sấy khô ở 1700C trong 3 giờ. Sau đó, vật liệu đƣợc ép viên theo kích thƣớc đƣờng kính 7 mm và trọng lƣợng 200 mg. Viên vật liệu đƣợc đặt lên bề mặt thạch chứa vi khuẩn ở trên. Đĩa thí nghiệm đƣợc đƣa vào trong tủ ấm nuôi ủ ở 370C 0,5, theo dõi trong 72 giờ, quan sát vòng kháng khuẩn. Mẫu đối chứng là viên vật liệu Ampicillin/bentonite (1:500 (w/w)).
2.3.2.2. Xác định khả năng khử trùng tối thiểu của bentonite gắn bạc
Nồng độ khử trùng tối thiểu của bentonite đƣợc xác định bằng phƣơng pháp pha loãng Agar theo Magana S. M. và cộng sự [30].
Bột bentonite đƣợc sấy khô ở 500C trong 2 giờ, sau đó 40 - 440 mg bentonite đƣợc cho vào cốc thủy tinh, đặt vào tủ cấy vi sinh bật đèn tím trong 30 phút nhằm loại bỏ vi sinh vật nhiễm trong vật liệu. Sau đó, vật liệu đƣợc cho vào bình tam giác có 60 ml mơi trƣờng PCA ở 500C, trộn đều trong 10 giây và đổ vào 4 đĩa pettri. Tiếp theo, cho 1 ml dịch vi khuẩn E.coli hoặc Salmonella ở nồng độ 106
cfu/ml lên trên bề mặt PCA, nuôi ủ ở 370C trong 24 giờ. Thực hiện lặp lại với 4 loại vật liệu: bentonite tinh chế gắn 2% bạc, biến tính B.Na gắn 2% bạc, biến tính B.H gắn 2% bạc và biến tính B.Li gắn 2% bạc, mỗi loại thực hiện 5 lần ở 4 nồng độ bentonite khác nhau, có đối chứng mẫu trắng. Mẫu đối chứng là bentonite tinh chế không gắn nano bạc.
2.3.2.3. Xác định khả năng khử trùng trực tiếp của vật liệu bentonite
Bột bentonite đƣợc sấy khô ở 1700C trong 3 giờ. Tiếp theo, 1200 mg bentonite đƣợc cho vào cốc thủy tinh và đặt vào tủ cấy vi sinh bật đèn tím trong 30 phút nhằm loại bỏ vi sinh vật nhiễm trong vật liệu. Sau đó, vật liệu đƣợc đƣa vào bình tam giác có chứa 60 ml mơi trƣờng PCA ở 500C, trộn đều trong 10 giây và đổ vào 4 đĩa pettri. Tiếp theo, cho 1 ml dịch vi khuẩn E.coli hoặc Salmonella ở nồng độ
106 cfu/ml lên trên bề mặt PCA, ni ủ ở 370C trong 24 giờ. Thí nghiệm đƣợc thực hiện lặp lại với 5 loại vật liệu: tinh chế, biến tính dạng B.Na, B.H, B.Li và dung dịch nano bạc (nồng độ 20 ppm), mỗi loại thực hiện 9 lần, có đối chứng mẫu trắng. Mẫu đối chứng là mẫu khơng có bentonite.