3.5.2.2. Phương pháp thu thập mẫu vật - Dụng cụ thu mẫu: - Dụng cụ thu mẫu:
+ Vợt côn trùng.
Vợt côn trùng là dụng cụ phổ biến nhất để thu bắt côn trùng. Cũng nhƣ trong thu thập mẫu vật ve – rầy, chúng tơi sử dụng vợt có đƣờng kính 60cm, chiều dài cán vợt có thể thay đổi từ 1-7m phụ thuộc vào vị trí ve - rầy đậu trên thân cây hoặc bay
tự do trên không.
+ Bẫy màn (Malaise trap).
Bẫy màn là bẫy làm bằng vải lƣới, có hình dạng nhƣ một cái lều, và đƣợc để cố định ở một chỗ. Thông thƣờng ngƣời ta hay đặt bẫy này ở dƣới đất, nhƣng cũng có loại bẫy đƣợc treo ở trên cao, sau khoảng 5-7 ngày thì kiểm tra và thu mẫu 1 lần. Bẫy màn khi đƣợc đặt dọc theo đƣờng bay của côn trùng. Trên các tuyến điều tra lựa chọn từ 1-2 điểm để đặt bẫy màn thu thập mẫu ve - rầy.
+ Bẫy đèn.
Hầu hết các loài ve - rầy đều bị thu hút bởi ánh sáng vào ban đêm. Do vậy, bẫy đèn là một phƣơng pháp rất có hiệu quả trong việc điều tra thu thập mẫu vật. Bẫy đèn đƣợc thiết kế gồm hai bóng đèn cao áp 250w và một tấm vài trắng khổ lớn
cùng dây điện. Máy phát điện sẽ đƣợc sử dụng là nguồn điện cho bẫy đèn. Để sử dụng hiệu quả bẫy đèn thì việc lựa chọn vị trí đặt bẫy là quan trọng. Bẫy đèn đƣợc đặt ở vị trí thống, rộng và hƣớng ánh sáng vào khu vực mong muốn. Tại các khu vực của rừng chọn từ 1-2 địa điểm đại diện để tiến hành thu thập mẫu vật bằng bẫy
đèn. Mỗi tháng 2 kỳ vào đầu và cuối tháng, vào thời điểm này khơng có ánh trăng để ve - rầy không bị phân tán bởi ánh sáng. Thời gian bẫy từ 19h đến 22h.
- Điều tra thu thập trên tuyến.
Di chuyển trên tuyến điều tra với tốc độ chậm, tiến hành quan sát hai bên tuyến với khoảng cách chiều rộng tuyến từ 5-7 mét, thu thập mẫu ve - rầy ở nhiều trạng thái hoạt động khác nhau (đang bay, trú ẩn trên lá, thân cây gỗ, dây leo, thảm tƣơi) nếu bắt gặp côn trùng dùng vợt hoặc dùng tay bắt. Điều tra ve - rầy theo phƣơng pháp điều tra theo tuyến là thu thập mẫu mang tính định tính để xác định thành phần loài ve - rầy.
Bảng 3.3. Phiếu điều tra ve - rầy theo tuyến
Khu vực: Số hiệu tuyến:
Ngày điều tra: Thời gian: Bắt đầu: Kết thúc:
Ngƣời điều tra: Thời tiết:
STT
Tên loài/ký hiệu mẫu
Số lƣợng mẫu Sinh cảnh Ghi chú Tên khoa
học phƣơng Tên địa (nếu có) Chân núi Sƣờn núi Đỉnh núi
- Điều tra thu thập theo điểm:
Song song với điều tra trên tuyến sẽ tiến hành điều tra tại các điểm đại diện. Tại mỗi điểm điều tra (bán kính 10m) dừng lại tiến hành điều tra với thời gian từ 30
- 40 phút để thu thập ve - rầy ở các trạng thái hoạt động và trú ẩn khác nhau nhƣ thu
trên tuyến. Đối với các lồi cơn trùng đã rõ tên khoa học tiến hành ghi vào sổ tay điều tra, những loài chƣa rõ tên tiến hành bắt rồi ghi kí hiệu mẫu theo thứ tự và cho vào lọ hoặc hộp đựng mẫu. Sau đó đƣợc tổng hợp ghi chép vào mẫu biểu điều tra điểm và đây là số liệu để tính tốn các chỉ số đa dạng của ve - rầy.
Cƣờng độ điều tra thu thập trên tuyến và điểm đƣợc thực hiện tập trung từ
tháng 10-12, đây là thời gian hoạt động của ve - rầy và có thể thu thập đƣợc số lồi
nhiều nhất. Hàng tháng bố trí 2 đợt, mỗi đợt điều tra từ 4-5 ngày. Hàng ngày tổ chức theo nhóm từ 2-3 ngƣời, một ngƣời ghi chép, 2 ngƣời quan sát, chụp ảnh và thu mẫu.
Các tuyến và điểm điều tra đƣợc tiến hành có cùng thời gian, cƣờng độ và đƣợc lặp lại số lần nhƣ nhau.
Bảng 3.4. Phiếu điều tra ve - rầy theo điểm
Khu vực: Số hiệu điểm:
Ngày điều tra: Thời gian: bắt đầu: Kết thúc:
Ngƣời điều tra: Thời tiết:
STT
Tên loài/Ký hiệu mẫu
Số lƣợng mẫu Ghi chú
Tên khoa học Tên địa phƣơng (nếu
có)
Bảng 3.5. Phiếu điều tra ve - rầy bằng phƣơng pháp bẫy đèn
Khu vực: Số hiệu điểm:
Ngày điều tra: Thời gian: Bắt đầu: Kết thúc:
Ngƣời điều tra: Thời tiết:
STT
Tên loài/Ký hiệu mẫu
Số lƣợng mẫu Ghi chú
Tên khoa học phƣơng (nếu Tên địa
3.5.3. Phương pháp xử lý số liệu và bảo quản mẫu
3.5.3.1. Phương pháp xử lý và bảo quản mẫu - Xử lý mẫu - Xử lý mẫu
+ Một số loài bộ cánh đều đƣợc thu từng cá thể riêng lẻ vào ống tuýp mang
về phòng để ngăn lạnh cho ve - rầy chết và làm mẫu nếu là thời gian đi điều tra 1 ngày, còn dài ngày lƣợng mẫu có nhiều thì phải dùng lọ độc giết và bảo quản trong tủ lạnh hoặc để nhiều lớp giấy thấm nƣớc.
+ Mẫu đƣợc giết chết bằng chất gây mê Ethyl acetate đựng trong lọ hoặc sau
đó gói vào giấy parafin mang về làm mẫu. Trong quá trình thu mẫu phải đánh số ký hiệu cho từng mẫu vật.
+ Định hình: Với mẫu vật cịn tƣơi thì có thể cắm kim và làm mẫu ngay. Nhƣng mẫu vật đã khô cần làm mềm trƣớc khi làm mẫu. Cách làm mềm: Dùng hộp nhựa để giấy bản thẩm đủ ẩm vào đáy hộp, đặt mẫu vào, cho một ít thymol vào hộp, sau đó đậy lên trên một tấm giấy bản ẩm nữa rồi đậy hộp lại. Khi thấy giấy khơ có thể nhỏ thêm nƣớc. Tùy theo từng loại ve - rầy mà thời gian lấy mẫu ra làm mẫu cũng khác nhau. Thƣờng là 24 giờ đối với loài nhỏ, lồi lớn thì thời gian nhiều hơn.
Mẫu các lồi ve - rầy đƣợc ép, gắn định hình bằng dụng cụ chuyên dụng nhƣ: panh, bàn kẹp, ghim, giấy ép cắm trên ghim. Mỗi một họ, bộ ve - rầy khác nhau, dùng các loại kim khác nhau. Đối với loài nhỏ dùng giấy mũi nhọn dán vào sƣờn phải của mẫu vật.
Giấy mũi nhọn (Card Points): là một miếng giấy cứng nhỏ hình tam giác dẹt. Đầu rộng của giấy đƣợc cắm kim còn mẫu vật đƣợc dán lên trên giấy này. Có thể cắt giấy mũi nhọn bằng kéo, chiều dài <12mm, chiều rộng <3mm. Giấy dùng để cắt là giấy loại tốt hơn loại dùng cho nhãn. Nếu mẫu vật đƣợc xử lý tốt có thể bảo quản theo cách này đƣợc khá lâu.
- Bảo quản mẫu
+ Bảo quản khô: Với các mẫu vật lớn nhƣ nhóm Ve sầu, Ve sầu đầu dài và một số loài thuộc họ Cercopidae sẽ đƣợc ghim mẫu bằng ghim côn trùng và sấy khô ở nhiệt độ khoảng 500C trong vòng 48 giờ và cứ 2 tuần sau sấy lại 1lần (trong 1-2 ngày) trong 2 tháng, sau đó có thể 2 tháng sấy lại 1 lần. Khoảng 1-2 năm thì ngừng
sấy mẫu lúc đó đã khơ hẳn (tùy thuộc vào tình trạng mẫu vật, điều kiện độ ẩm từng nơi mà điều chỉnh thời gian sấy mẫu cho phù hợp).
Với các mẫu có kích thƣớc nhỏ nên không thể căng cánh và cố định bằng ghim cơn trùng thì đƣợc xếp thành hàng vào đệm bơng (kèm theo etyket) và đƣợc làm khơ. Do kích thƣớc nhỏ nên có thể dễ dàng làm khơ bằng Silicagel. Sau đó bảo quản mẫu trong điều kiện giống nhƣ trên.
+ Bảo quản ƣớt: Bên cạnh các mẫu vâ ̣t đƣợc bảo quản theo phƣơng pháp bảo quản khô, cũng có một số mẫu vật này đƣợc bảo quản trong cồn Ethylnol 70%.
+ Mẫu vật đƣợc kiểm tra thƣờng xuyên tháng 1 lần, tránh kiến, nhện hay mối
mọt xâm hại. Trong hộp mẫu có thể để băng phiến để chống sâu, mọt, mối, kiến và thymol chống mốc. Để giảm bớt độ ẩm trong tủ mẫu có thể để vơi cục dƣới đáy tủ để chống mốc. Phịng lƣu giữ mẫu cần có điều hồ nhiệt độ, máy hút ẩm: nhiệt độ phịng ln giữ khoảng 20-220C ẩm độ 40-50% là tốt nhất, mẫu vật bảo quản trong điều kiện tối.
- Trưng bầy mẫu
+ Sau khi mẫu vật đƣợc sấy khơ và định tên thì tiến hành trƣng bầy mẫu vào hộp sƣu tập. Hộp sƣu tập đƣợc làm bằng gỗ hay nhơm, kích thƣớc 30x25x6cm hoặc lớn hơn. Có thể thiết kế nắp kính bản lề hoặc nắp đậy. Hộp phải thật kín để có thể chống đƣợc sự xâm nhập của sinh vật gây hại. Đối với hộp sƣu tập chứa mẫu cắm kim đáy hộp phải lót một miếng xốp dầy 1cm, trên có bọc giấy kẻ ly.
+ Đối với mẫu cắm kim trong hộp sƣu tập: Mỗi loại mẫu cắm kim đều phải
có nhãn đi kèm. Có thể bố trí mẫu trong 1 hộp sƣu tập theo hệ thống phân loại (theo giống, họ, bộ) hoặc bố trí mẫu của nhiều loài thuộc nhiều họ vào trong một hộp sƣu tập.
+ Đối với mẫu bơng: Trong hộp sƣu tập lót một lớp bơng đã đƣợc sấy khơ, là phẳng và ít băng phiến chống kiến rồi nhẹ nhàng đặt tiêu bản đã sấy khô lên trên, đậy nắp kính và cố định hộp sƣu tập.
- Sử dụng phƣơng pháp so sánh hình thái để nghiên cứu phân loại . Các tài liê ̣u dùng trong đi ̣nh loa ̣i các loài gồm : Distant, 1916, 1918; Fennah, R. G., 1956, 1978; Phạm Hồng Thái & Tạ Huy Thịnh 2004, 2005a; Nilson, 2015; Chou et al.,
1997; Ding, J.H, 2006; Soulier- Perkins, A 2015; Yang, T.C, 1989… [53], [54], [56], [57], [23], [75], [44], [48], [97], [106].
- Ảnh của ve - rầy trƣởng thành sẽ đƣợc chụp bởi máy ảnh kỹ thuật số có độ phân giải cao.
- Làm nhãn tiêu bản: Hoàn chỉnh hệ thống Êtêket với đầy đủ thông tin đi
kèm cho từng mẫu nhƣ:
Loài.
Số hiệu mẫu. Ngày thu mẫu. Địa điểm thu mẫu. Sinh cảnh nơi thu mẫu. Ngƣời thu mẫu.
3.5.3.3. Phương pháp xử lý số liệu
Các chỉ số sinh học theo dõi:
- Để biết đƣợc mức độ phân bố, bắt gặp ve - rầy, chúng tôi sử dụng công thức xác định tần suất xuất hiện của một loài (P%):
% .100
N n
P
Trong đó: P%: Tỷ lệ phần trăm điểm điều tra có lồi ve-rầy cần tính
n: Là số điểm điều tra có lồi ve - rầy cần tính N: Tổng số điểm điều tra (N=27)
Khi P%>50%: Loài thƣờng gặp
Khi P% từ 25% - 50%: Lồi ít gặp
Khi P%<25%: Lồi ngẫu nhiên gặp.
- Đa dạng về lồi trong mỗi sinh cảnh (tính chỉ số đa dạng Margalef - d).
Chỉ số đa dạng Margalef đƣợc sử dụng để đánh giá tính đa dạng lồi trong mỗi sinh cảnh do Margalef xây dựng năm 1958. Trong các khu vực, dạng sinh cảnh khác nhau nếu khu vực, sinh cảnh nào có chỉ số đa dạng d càng lớn thì chứng tỏ tính đa
dạng về lồi của sinh cảnh ấy càng cao và ngƣợc lại khu vực, dạng sinh cảnh nào có chỉ số đa dạng d thấp chứng tỏ tính đa dạng sinh học lồi ở đó thấp. Nhƣ vậy chỉ số
phong phú Margalef có thể dùng để so sánh tính đa dạng về loài giữa các sinh cảnh
khác nhau trong khu vực. Cơng thức xác định đƣợc tính nhƣ sau:
S: Tổng số loài ghi nhận đƣợc trong sinh cảnh. N: Tổng số cá thể ghi nhận đƣợc trong sinh cảnh.
- Đa dạng về quần xã sinh vật trong mỗi sinh cảnh (tính chỉ số đa dạng
Simpson-D).
Chỉ số đa dạng Simpson đƣợc sử dụng để xác định tính đa dạng về quần xã sinh vật trong mỗi sinh cảnh do Simpson xây dựng năm 1949. Với hai kiểu sinh cảnh khác nhau nếu sinh cảnh nào có chỉ số đa dạng D cao hơn thì sinh cảnh ấy có tính đa dạng về quần xã cao hơn và ngƣợc lại. Nhƣ vậy sử dụng chỉ số này ta có thể so sánh đƣợc tính đa dạng về quần xã sinh vật giữa các sinh cảnh khác nhau. Công thức xác định chỉ số đa dạng Simpson đƣợc tính nhƣ sau:
Pi: Xác suất “vai trị”của lồi i.
S: Tổng số loài trong sinh cảnh.
Pi = ni/N
ni: Số lƣợng cá thể của loài thứ i.
N: Tổng số cá thể của các loài trong sinh cảnh.
- Để xác định mối quan hệ tƣơng đồng của ve - rầy giữa các sinh cảnh tại
khu vực nghiên cứu chúng tôi dựa vào công thức của Stugren, Radulescu (1961):
N S d 2 log 1 S i i p D 1 2 1 (0≤D≤ 1) Rg, s = c b a c b a ) (
Trong đó: s là ký hiệu lồi, g là ký hiệu giống.
a là số giống hoặc lồi có ở sinh cảnh A mà khơng có ở sinh cảnh B. b là số giống hoặc lồi có ở sinh cảnh B mà khơng có ở sinh cảnh A. c là số lƣợng giống hay loài phân bố trên cả A, B.
R là hệ số tƣơng quan.
Khi có hệ số bằng 2, R dao động từ -1 đến 1, giá trị R càng nhỏ thì sự gần
nhau giữa 2 khu hệ ve - rầy ở 2 sinh cảnh càng lớn và ngƣợc lại giá trị R càng lớn thì khu hệ ve - rầy giữa 2 sinh cảnh càng khác biệt.
R= 1 Rg Rs
Chƣơng 4
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
4.1. Tính đa dạng và đặc điểm thành phần lồi ve - rầy ở VQG Cúc Phƣơng
4.1.1. Tính đa dạng các loài thuộc phân bộ ve - rầy ở VQG Cúc Phương
Kết quả nghiên cứu đã thu thập đƣợc 899 mẫu thuộc phân bộ ve - rầy, lƣu giữ tại Bảo tàng ở VQG Cúc Phƣơng. Từ các mẫu thu thập đã định loại đƣợc 110
loài và dạng lồi thuộc 61 giống 14 họ, trong đó định loại hồn chỉnh đƣợc 83 loài (chiếm 75,5% tổng số loài), 27 loài mới xác định đƣợc tới giống (chiếm 24,5% tổng số loài), chi tiết ở Bảng sau:
Bảng 4.1. Kết quả điều tra các loài ve - rầy ở VQG Cúc Phƣơng
STT Tên họ/loài P%
Nguồn thông tin
Tác giả Nguồn khác I Họ Ve sầu bƣớm cánh tròn - Acanaloniidae 1 Acanalonia sp. 3,70 x II Họ Ve sầu bọt lƣng phẳng - Aphrophoridae
2 Aphrophora alni (Fallén, 1805) 11,11 x
3 Aphrophora corticea (Germar 1821) 11,11 x
4 Philaenus spumarius (Linnaeus, 1758) 7,41 x
5 Philagra albinotata Uhler 1896 7,41 x
6 Philagra fusiformis Walker, 1858 11,11 x
7 Neophilaenus lineatus (Linnaeus, 1758) 7,41 x
III Họ Ve sầu bọt - Cercopidae
8 Callitettix versicolor Fabr., 1794 29,63 x [24] 9 Cosmoscarta bispecularis (White, 1844) 11,11 x 10 Cosmoscarta dorsimacula (Walker, 1851) 22,22 x
11 Cosmoscarta fictilis (Butl, 1874) 7,41 x
12 Cosmoscarta heroina (Distant, 1907) 11,11 x
13 Cosmoscarta heros (Fabr., 1869) 22,22 x
14 Cosmoscarta herossa (Jacobi, 1921) 3,70 x
15 Cosmoscarta nagasana Distant, 1900 51,85 x
STT Tên họ/loài P%
Nguồn thông tin
Tác
giả
Nguồn
khác
17 Cosmoscarta septempunctata (Walker, 1851) 25,93 x 18 Cosmoscarta siamensis (Butl, 1874) 40,74 x
19 Cosmoscarta sp1. 4,41 x
20 Cosmoscarta sp2. 3,70 x
21 Cosmoscarta sp3. 3,70 x
22 Eoscarta borealis (Distant, 1878) 70,37 x
23 Eoscarta semirosea Walker, 1875 18,52 x
24 Phymatostetha pudica (Walker, 1858) 7,41 x 25 Phymatostetha rufolimbata Schmidt, 1910 3,70 x
IV Họ Rầy xanh - Cicadellidae
26 Acrulogonia sp. 14,81 x
27 Allygus mixtus (Fabricius, 1794) 25,93 x
28 Bothrogonia addita Walker, 1851 62,96 x [4]
29 Bothrogonia ferruginea Fabricius, 1787 22,22 x [4]
30 Bothrogonia sp1. 7,41 x
31 Bothrogonia sp2. 3,70 x
32 Brunotartessus fulvus (Walker, 1851) 7,41 x
33 Calodia satsumensis 11,11 x
34 Euscelidius variegatus (Kirschbaum 1858) 3,70 x
35 Graphocephala sp. 18,52 x
36 Jassus indicus (Walker) 3,70 x
37 Krisna sherwilli Distant, 1907 3,70 x
38 Krisna sp. 3,70 x
39 Oncopsis flavicollis (Linnaeus 1761) 3,70 x 40 Oncopsis tristis (Zetterstedt, 1840) 29,63 x
41 Oncopsis sp. 14,81 x
42 Pawiloma sp. 3,70 x
43 Petalocephala manchurica (Kato, 1932) 3,70 x
44 Petalocephala cultellifera Walker 3,70 x
STT Tên họ/loài P%
Nguồn thông tin
Tác giả Nguồn khác 46 Sibovia sp. 3,70 x V Họ Ve sầu - Cicadidae
47 Balinta tenebricosa (Distant, 1888) 3,70 x [77] 48 Cryptotympana holsti (Distant, 1904) 3,70 x 49 Cryptotympana mandarina (Distant, 1891) 44,44 x [79] 50 Dundubia hainanensis (Distant, 1901) 22,22 x [1]
51 Euterpnosia cucphuongensis (Pham et al., 2010) 3,70 x [1],[78]
52 Euterpnosia iwasakii Matsumura, 1913 18,52 x 53 Euterpnosia viridifrons Matsumura, 1917 18,52 x
54 Gaeana maculata (Drury, 1773) 18,52 x [1],[79]
55 Huechys beata (Distant, 1892) 7,41 x [1]
56 Huechys sanguinea (De Geer, 1773) 33,33 x [1],[82] 57 Katoa chlrotica Chou et Lu, 1997 7,41 x [1],[82]
58 Meimuna opalifera (Walker, 1850) 29,63 x
59 Mogannia cyanea (Walker, 1858) 18,52 x [84]
60 Neocicada hieroglyphica (Say, 1830) 7,41 x 61 Neotana yunnanensis Lei et Chou, 1997 3,70 x [77]
62 Platypleura hilpa Walker, 1850 14,81 x [1]
63 Platypleura kaempferi (Fabricus, 1794) 7,41 x [1] 64 Platypleura takasagona Matsumura, 1917. 7,41 x 65 Pomponia linearis (Walker, 1850) 37,04 x [1],[87]
66 Pomponia piceata (Distant, 1905) 7,41 x [1]
67 Pomponia sp1. 3,70 x
68 Pomponia sp2. 3,70 x
69 Salvazana mirabilis (Distant, 1913) 3,70 x [1]