CHƢƠNG 3 : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.4. KẾT QUẢ XỬ LÝ SẢN PHẨM PCR SỬ DỤNG CẶP MỒI 4977–
BẰNG ENZYME GIỚI HẠN
Theo những kết quả đã trính bày ở trên, chúng tôi đƣa ra nhận định: trong mtDNA của bệnh nhân ung thƣ đại trực tràng có chứa đột biến mất đoạn 4977 bp với các mức độ đột biến cao, thấp khác nhau tùy vào mẫu mô củ a tƣ̀ng bê ̣nh nhân . Tuy nhiên, để kiểm tra tình chình xác của sản phẩm PCR kìch thƣớc 381 bp (cặp
mồi 4977–2), chúng tôi tiến hành xử lý sản phẩm PCR với enzyme giới hạn HaeIII.
HaeIII là enzyme endonuclease nhận biết DNA tại trính tự:
Trong trƣờng hợp sản phẩm PCR thu đƣợc là chình xác sẽ chứa 2 vị trì nhận biết của HaeIII nên khi cắt sẽ tạo thành 3 đoạn có kìch thƣớc 141 bp, 183 bp và 57 bp. Sản phẩm của quá trính xử lý với enzyme cắt đƣợc điện di kiểm tra cùng với sản phẩm PCR trên gel agarose 1,7%, nhuộm ethidium và quan sát dƣới tia UV bƣớc sóng 245 nm (Hình 14).
Hình 14: Ảnh kết quả xử lý sản phẩm PCR sử dụng cặp mồi 4977–2 với enzyme giới hạn (điện di trên gel agarose 1,3%, nhuộm ethidium bromide).
Giếng 1: Sản phẩm PCR sử dụng cặp mồi 4977–2 trƣớc khi cắt bằng HaeIII của mô lân cận u.
Giếng 2: Sản phẩm PCR đƣợc cắt bằng HaeIII của m ẫu mô lân cận u (giếng 3).
Giếng 3 : Sản phẩm PCR sử dụng cặp mồi 4977–2 trƣớc khi cắt bằng HaeIII mô u Giếng 4: Sản phẩm PCR đƣợc cắt bằng HaeIII của mẫu mô u.
Từ kết quả thu đƣợc trong Hình 14 chúng tơi nhận thấy: sản phẩm PCR
trƣớc khi cắt bằng HaeIII chỉ xuất hiện trên bản điện di 1 băng duy nhất kìch thƣớc 381 bp, sản phẩm PCR sau khi cắt bằng HaeIII trên bản điện di xuất hiện 3 băng kìch thƣớc 141, 183 bp, 57 bp. Tiến hành xử lý sản phẩm PCR (cặp mồi 4977–2) trên tất cả các mẫu có đột biến mất đoạn chúng tơi đều thu đƣợc các kết quả tƣơng tự nhau. Nhƣ vậy, sản phẩm 381 bp thu đƣợc nhờ kỹ thuật PCR một lần nữa lại đƣợc khẳng định, khơng có sự khuếch đại nhầm và đạt độ tin cậy để tiến hành các phân tìch tiếp theo.
3.5. KẾT QUẢ GIẢI TRÌNH TỰ SẢN PHẨM PCR CỦA ĐỘT BIẾN MẤT ĐOẠN 4977 bp CỦA mtDNA