CHƢƠNG 3 : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.2. Đánh giá phƣơng pháp
3.2.1.1. Xây dựng đƣờng chuẩn
Tiến hành khảo sát sự phụ thuộc của độ hấp thụ quang vào nồng độ GA3 để lập đƣờng chuẩn. Từ dung dịch chuẩn gốc (stock) pha dãy dung dịch chuẩn làm việc có nồng độ GA3 là: 2, 4, 6, 8, 10, 15, 20, 25, 30 µg/ml.
Lấy 1ml dung dịch chuẩn vào bình định mức 10ml, thêm 1ml etanol, sau đó định mức bằng HCl 3,75M. Đem đo phổ trong khoảng 200-300nm. Tại mỗi nồng độ lặp lại 3 lần. Kết quả khảo sát sự phụ thuộc của độ hấp thụ quang vào nồng độ GA3 tƣơng ứng thể hiện trong bảng 3.7sau:
Bảng 3.7: Độ hấp thụ quang ở các nồng độ xây dựng đƣờng chuẩn
C(µg/ml) 2 4 6 8 10 15 20 30
Ā 0,067 0,130 0,201 0,268 0,331 0,502 0,656 0,997
Sử dụng phần mềm Minitab-14 ta thu đƣợc đƣờng chuẩn là đƣờng chuẩn bậc nhất:
Hình 3.2: Đƣờng chuẩn của GA3 trong khoảng tuyến tính
Kết quả phân tích cho thấy phƣơng trình hồi quy là bậc nhất có dạng: y = 0,00045 + 0,0331x
Trong đó: y là độ hấp thụ quang x là nồng độ GA3 (µg/ml) R2 là hệ số tƣơng quan ( = 0,999)
S = Sy là độ lệch chuẩn của phƣơng trình (= 0,00401185)
Kết quả phân tích phƣơng sai cho thấy giá trị Pvalue < 0,05 của hắng số a, b < 0,05 chứng tỏ nồng độ và độ hấp thụ quang có quan hệ tuyến tính. Trị số P trong
kết quả đánh giá của phƣơng trình hồi qui (chuẩn F) <0,05 cũng chứng tỏ phƣơng trình trên chỉ sự sai khác giữa lý thuyết.
Để kiểm tra sai số hệ thống của phƣơng pháp cần so sánh hẳng số a của phƣơng trình hồi quy với giá trị 0. Nếu a=0, phƣơng trình trở thành y=b‟x. Các giá trị b‟ đƣợc tính ở bảng 3.8 : Bảng 3.8. Bảng giá trị b‟ ở các nồng độ X (nồng độ - M) Y (độ hấp thụ quang) b‟ 2 0,067 0,0335 4 0,13 0,0325 6 0,201 0,0335 8 0,268 0,0335 10 0,331 0,0331 15 0,502 0,0335 20 0,656 0,0328 30 0,997 0,0332
Các giá trị liên quan đến hệ số nhƣ sau: (tính theo phân mềm Minitab 14)
Giá trị trung bình Độ sai chuẩn Độ lệch chuẩn Phƣơng sai mẫu Tổng %CV 0,0332 0,000134 0,000378 1,43.10-7 0,2656 1,14
Nếu a # 0 khơng có ý nghĩa thống kê ở mức độ tin cậy 95%, phƣơng trình hồi quy có dạng: Y = (b‟ + t.Sb‟)X
Ta có Y = (0,0332 ± 2,356.2,34.10-3)X
Áp dụng công thức: SS = (Yi– a – bXi)2 và S2 = SS/(n-2) Bảng 3.9. Giá trị SS và S2
Hàm Tổng các bình phƣơng Bậc tự do Phƣơng sai
Y = A + BX SS” = 0,00809632 6 S2 = 0,0013494 Y = B‟X SS” = 9,92.10-5
5 S2 = 1,65333.10-5
Ta có:
Tra bảng F(0,95; 5; 6) = 4,387 => Ftính < F(0,95; 5; 6) có nghĩa là sự sai khác giữa giá trị a và 0 khơng có ý nghĩa thống kê hay phƣơng pháp khơng mắc sai số hệ thống.