Cấy chủng nấm gây bệnh trong môi trƣờng Czapek thạch, xác định khả năng kháng nấm của các chủng lựa chọn theo phƣơng pháp nhỏ dịch. Nếu vi khuẩn kháng nấm sẽ xuất hiện vịng kháng.
* Hoạt tính kháng nấm xác định theo công thức
H = D – d ( mm)
H : Hoạt tính kháng nấm
D: Tổng đƣờng kính vịng phân giải và thỏi thạch d: Đƣờng kính lỗ thạch
2.2.6 Một số đặc tính sinh học của các chủng lựa chọn
* Hình thái khuẩn lạc
Lấy 1 ít sinh khối đã tinh sạch và pha lỗng, nhỏ vào giọt nƣớc cất trên lam kính. Cố định trên ngọn lửa đèn cồn, nhuộm Safranin trong 1 phút, quan sát dƣới vật kính dầu 100X.
* Hình dạng khuẩn lạc
Lấy 1 ít sinh khối đã tinh sạch, pha lỗng, cấy trang trên mơi trƣờng NA. Sau 24 giờ quan sát và mơ tả hình thái.
* Nhuộm Gram
- Chuẩn bị vết bơi: lấy 1 ít sinh khối chủng vi khuẩn hồ vào giọt nƣớc cất ở giữa phiến kính.
- Nhuộm bằng dung dịch tím kết tinh trong 1 phút. - Nhỏ 1 giọt Lugol trong 1 phút.
- Tẩy màu: rửa vết bôi bằng cồn 30 giây. - Rửa sạch bằng nƣớc cất, hong khô.
- Nhuộm Safranin trong 1 phút, rử nƣớc hong khô. - Quan sát vật kính dầu 100X.
=> Xác định kết quả: nếu Gram dƣơng thành tế bào bắt màu tím, Gram âm thành tế bào bắt màu hồng.
* Khả năng sinh bào tử
Pha loãng khuẩn lạc vào các ống nghiệm, đun cách thuỷ ở 800
C trong 10 phút. Hút 50 μl dịch cấy trang trên môi trƣờng NA, nuôi cấy ở 350
C. Sau 24 giờ nếu trên đĩa thạch khuẩn lạc mọc chứng tỏ chủng có khả năng hình thành nội bào tử.
Chƣơng 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 XÁC ĐỊNH KHẢ NĂNG SINH KITINAZA