3 5 1 Chọn lựa, tối ưu hóa điều kiện chiết xuất
nước: dược liệu = 10, tại 80 ºC trong
thời gian 4 giờ
3 5 2 Định lượng
polysaccharid toàn quy sang glucose bằng
phương phápđo quang với thuốc thử phenol sulfuric
- 13 -‐ ‐
Thực hiện phản ứng tạo dẫn xuất furan và tạo màu với phenol Đo quang ở 490 nm
Dữ liệu thẩm định cho thấy phương pháp đạt tất cả các yêu cầu
về tính đặc hiệu, tính tuyến tính, độ chính xác và độ đúng theo qui định của ICH
Bảng 3-5: Kết quả định lượng hàm lượng polysaccharid quy ra glucose
3 5 3 Tối ưu hóa phản ứng thủy phân
Điều kiện tối ưu là 120 °C trong 1 giờ và nồng độ TFA 2 M
3 5 4 Định tính và định lượng đồng thời 8 monosaccharid cấu thành polysaccharid
Pha động: Hệ 2 dung môi ACN: Amonium acetat 20 nM, gradient Pha tĩnh: cột Gemini NX C18 (250 x 4,6 mm); 5 ∝m
cột 25 ºC, tốc độ dòng 1 ml/phút,
detector 245 nm, thể tích tiêm 10 µl
Dữ liệu thẩm định cho thấy phương pháp đạt tất cả các yêu cầu
về tính đặc hiệu, tính tuyến tính, độ chính xác và độ đúng theo
qui định của ICH
Mẫu Độ hấp thụ Độ hấp thụ
trung bình (mg/ ml)Nồng độ nguyên trạngHàm lượng
ĐQ Đắk Nông 0,4934 0,4934 0,0394 82 08 %
0,4933 ĐQ Đơn
- 14 -‐ ‐ 3 5 5 Ứng dụng khảo sát định tính và định lượng monosaccharid cấu thành Hình 3-2: Thành phần và tỷ lệ monosaccharid trong các mẫu polysaccharid toàn phần
Hình 3-3: Thành phần
monosaccharid trong mẫu chưa thuỷ phân,
mẫu PĐ20 sau thuỷ phân và mẫu chuẩn
Hình 3-4: Thành phần
monosaccharid trong mẫu chưa thuỷ phân,
mẫu PĐ30 sau thuỷ phân và mẫu chuẩn