- Các nhân tố chỉ tiêu nghiên cứu phải chia thành các công thức khác nhau (03 công thức khử trùng; 03 công thức môi trƣờng).
- Số mẫu(bình nuôi cấy) của mỗi công thức thí nghiệm phải đủ lớn.
- Tuân thủ nguyên tắc lặp lại (mỗi công thức thí nghiệm đều lặp lại 3 lần).
2.2.3. Phương pháp bố trí thí nghiệm
- Thí nghiệm 1: Trong giai đoạn tạo vật liệu khởi đầu, xác định hóa chất
khử trùng tối ƣu nhất.
Vật liệu sử dụng: Quả lan Hải Yến
Công thức thí nghiệm:
CT1: EtOH 70o (30 giây) + NaOCl 3% (5 phút)
CT2: EtOH 70o (30 giây) + NaOCl 3% (10 phút)
CT3: EtOH 70o (30 giây) + HgCl20,1% (5 phút)
CT4: EtOH 70o (30 giây) + 10 mg/l hỗn hợp chất kháng sinh (Rifampicin, polymicin, vancomycin) (30 phút)
Chỉ tiêu đánh giá: Độ nhiễm mẫu
Thời gian đánh giá: Sau 30 ngày
- Thí nghiệm 2: Xác định môi trƣờng nuôi cấy tạo protocorm phù hợp nhất
với đối tƣợng cây lan Hải Yến.
Công thức thí nghiệm:
MT1: MS
MT2: MS bổ sung (2 mg/l BAP, 0,5 mg/l NAA)
MT3: ½ MS
MT4: ½ MS bổ sung (2 mg/l BAP, 0,5 mg/l NAA)
MT5: KC
MT6: KC bổ sung (2 mg/l BAP, 0,5 mg/l NAA)
Chỉ tiêu đánh giá: Sự nảy mầm của hạt. Màu sắc, hình thái, tỉ lệ phát sinh protocorm.
Thời gian thu thập: Sau 90 ngày.
Mỗi môi trƣờng đều bổ sung thêm: 100ml/l nƣớc dừa + 20g/l saccarozo + 6,5g/l agar + 100g/l khoai tây + 0,5g/l than hoạt tính.
- Thí nghiệm 3: Nghiên cứu môi trƣờng có bổ sung chất điều hòa sinh trƣởng với
nồng phù hợp nhất trong giai đoạn tạo chồi.
+ Vật liệu sử dụng: Protocorm lấy từ thí nghiệm 2 (có đặc điểm kích thƣớc to đều, màu xanh, hình thái đuôi cá, sức sống nhƣ nhau).
+ Công thức thí nghiệm:
MTa: KC+2mg/l BAP+1mg/l KN
MTb: KC+2mg/l BAP +2mg/l KN
MTc: KC +2mg/l BAP +3mg/l KN
+ Chỉ tiêu đánh giá: Chiều cao chồi/chồi, số lá/chồi, số rễ/chồi. + Thời gian thu thập: Sau 90 ngày.
2.2.4. Phương pháp phân tích và xử lí số liệu
Chỉ tiêu thu thập số liệu:
Số mẫu sạch
Tỷ lệ mẫu sạch (%) = x 100
Tổng số mẫu ban đầu Số mẫu nhiễm
Tỷ lệ mẫu nhiễm (%) = x 100
Tổng số mẫu ban đầu Số mẫu chết
Tỷ lệ mẫu chết (%) = x 100 Tổng số mẫu ban đầu
Số mẫu tạo protocorm
Tỷ lệ tạo protocorm (%) =x 100
Tổng số mẫu ban đầu
Đặc điểm protocorm phát sinh: màu sắc, hình thái.
Số mẫu tái sinh chồi
Tỷ lệ mẫu tái sinh (%) = x 100
Tổng số mẫu ban đầu
Đặc điểm chồi tái sinh: chiều cao, số rễ, số lá của chồi.
Các số liệu đƣợc tính toán theo phƣơng pháp phân tích thống kê sinh học. Quá trình xử lý số liệu đƣợc thực hiện trên máy tính với ứng dụng Data Analysis của chƣơng trình Excel. Dùng hàm thống kê để phân tích phƣơng sai số liệu với ba lần lặp.
Các phƣơng pháp thống kê sinh học Cho mẫu số liệu có kích thƣớc N là x1;x2;...;xN
+ Giá trị trung bình mẫu: ̅ = = ∑
+ Phƣơng sai (kí hiệu: 2
s ) của mẫu số liệu đƣợc tính bởi công thức:
N i i x x N s 1 2 2 1
+ Độ lệch chuẩn (kí hiệu:s) của mẫu số liệu là:
N i i x x N s 1 2 1