2.3.5.1. Xác định hàm lượng cao chiết tổng
Phương pháp chiết Soxhlet
Phương pháp chiết Soxhlet theo F. Soxhlet năm 1879 sau đó vào năm 1974, Edward Randall đã thực hiện một cải tiến lớn trong kỹ thuật chiết Soxhlet giúp rút ngắn thời gian chiết [80]. Theo Manal Ạ Hamed (2019), việc chiết xuất sử
dụng dung môi methanol là tối ưu nhất. Vì vậy, chúng tôi lựa chọn methanol là dung môi chiết. Để phù hợp trong quá trình chiết xuất bằng máy Ser148/3 Velp với dung môi chiết methanol, chúng tôi khảo sát các thông sốcài đặt cho máy bao gồm nhiệt độ chiết, thời gian ngâm mẫu (Immersion), thời gian chiết mẫu (Washing), thời gian cô đặc (Removing).
Sau quá trình khảo sát chúng tôi đưa ra quy trình tiền xử lí mẫu nghệ và chiết xuất thu cao tổng như sau:
Cân 5,00g bột nghệ gói bằng giấy lọc; Sử dụng 70ml dung môi methanol;
+ Nhiệt độ 170oC + Immersion 90 phút + Washing 360 phút + Removing 30 phút
Thu được m’cao chiết tổng.
Phương pháp chiết hỗ trợ siêu âm
Mẫu bột nghệ khô được ngâm chiết với methanol theo tỉ lệ 1:3 (g/ml) sau đó cho vào máy siêu âm, phân lập trong 1,5 giờ, nhiệt độ 35oC với công suất 200W. Mẫu sau khi phân lậpđược để nguội đến nhiệt độ phòng và lọc dịch chiết 1 qua giấy lọc. Thực hiện tương tự thêm 2 lần nữạ
Gom các dịch chiết đi cô quay thu được cao tổng. Hàm lượng cao tổng được tính bằng công thức:
𝑊𝑜= 𝑚′
𝑚𝑜× 100%
Trong đó:
mo là khối lượng mẫu khô ban đầu m’ là khối lượng mẫu cao tổng thu được
2.3.5.2. Thiết lập đường chuẩn định lượng curcuminoid bằng HPLC
Định lượng BDMC: Trên hệ thống LC, pic tín hiệu được lựa chọn của
BDMC được phát hiện một cách ổn định tại thời gian lưu Rt 18,2 – 19,4 phút đối với các mẫu chất chỉ thịdùng trong thang định lượng, đồng thời hệ thống MS phát hiện được pic ion phân tử của BDMC tại thời điểm 18,3–19,5 phútvới pic ion phân tử 309,0 [M+H]+. Đường chuẩn được tính toán xây dựng bằng phần mềm Chemstation dựa trên diện tích pic UV 425 nm tại thời gian lưu Rt 18,2–19,4 phút.
Định lượng DMC: Trên hệ thống LC, pic tín hiệu được lựa chọn của DMC
được phát hiện một cách ổn định tại thời gian lưu Rt 19,7–21,2 phút đối với các mẫu chất chỉ thị dùng trong thang định lượng, đồng thời hệ thống MS phát hiện
được pic ion phân tử của DMC tại thời điểm 19,8–21,3 phút với pic ion phân tử
339,0 [M+H]+. Đường chuẩn được tính toán xây dựng bằng phần mềm Chemstation dựa trên diện tích pic UV 425 nm tại thời gian lưu Rt 19,7–21,2 phút.
Hình 2.2. Sắc ký đồ của curcuminoid
Định lượng curcumin: Trên hệ thống LC, pic tín hiệu được lựa chọn của curcumin được phát hiện một cách ổn định tại thời gian lưu Rt 21,3 – 23,3 phút
đối với các mẫu chất chỉ thịdùng trong thang định lượng, đồng thời hệ thống MS phát hiện được pic ion phân tử của curcumin tại thời điểm 21,4 – 23,4 phút với pic ion phân tử 369 [M+H]+. Đường chuẩn được tính toán xây dựng bằng phần mềm Chemstation dựa trên diện tích pic UV 425 nm tại thời gian lưu Rt 21,3–
23,3 phút.