Đối tượng áp dụng:
Quy trình này áp dụng cho việc kiểm nghiệm vacxin nhược độc chế từ chủng vi khuẩn Salmonella choleraesuis đông khô.
Quy định về kỹ thuật:
• Lấy mẫu: Mẫu được lấy theo TCVN 160-2008 “ Quy trình
lấy mẫu thuốc thú y và vacxin thú y để kiểm tra chất lượng”.
• Kiểm tra thuần khiết: Theo tiêu chuẩn 161-2008 “ Vacxin thú y- quy trình kiểm tra thuần khiết” bao gồm:
o Kiểm tra sự tạp nhiễm vi khuẩn.
o Kiểm tra sự tạp nhiễm nấm mốc.
o Kiểm tra sự tạp nhiễm Mycoplasma.
o Vacxin được kiểm tra trên các môi trường đặc biệt
như:
o Môi trường MacConkey agar (màu đỏ) : đây là môi
trường thích hợp cho sự phát triển của vi khuẩn Gr (-) và cho nó lên men lactose.
Thành phần : - Pepton. - Lactose
- Mật muối( hỗn hợp acid steroid với ion natri) - Nacl
- Toluylene đỏ (thuốc nhuộm) - Agar
- Nước.
o Môi trường KIA: màu đỏ.
Thành phần : peptone, lactose/glucose = 10/1,dẫn xuất cuả lưu huỳnh, chất chỉ thị đỏ phenol, sắt (2) amoni citrate.
o Ngoài ra vacxin còn được kiểm tra sự ngưng kết với acriflavin ( hoạt chất kháng khuẩn) 1/500 ( phản ứng lên bông).
• Kiểm tra an toàn: dùng một trong những phương pháp sau đây:
o Tiêm vào dưới da cho 3 con lợn cai sữa khỏe
mạnh ( không có kháng thể chống Salmonella choleraesuis) ,(20-30kg /con), mỗi con 10 liều vacxin quy định. Tất cả lợn phải sống khỏe mạnh và phát triển bình thường sau 7 – 10 ngày theo dõi.
o Tiêm vào dưới da cho ít nhất 5 con chuột lang ( mỗi con 300- 350g), mỗi con 2 liều vacxin quy định. Tất cả các chuột phải sống khỏe mạnh và phát trển bình thường sau 7 – 10 ngày theo dõi.
• Kiểm tra hiệu lực: vacxin được kiểm tra hiệu lực bằng một trong hai cách sau:
• Phương pháp đếm số vi khuẩn:
Đếm số khuẩn lạc trên đĩa thạch ( Brain heart agar: BHA). Vacxin tiêu chuẩn khi có số khuẩn lạc không thấp hơn 2.5×109/1 liều vacxin.
• Phương pháp tiêm chuột:
Cho 5 chuột lang, trọng lượng 300 – 350 kg/con, mỗi con tiêm 1/5 liều vacxin ghi trên nhãn ( 0.5× 109
CFU), 5 chuột sau khi tiêm trở thành 5 chuột chú chuột miễn dịch. 21 ngày sau khi tiêm 5 chuột miễn dịch, ta tiêm một lượng chủng thương hàn lợn cường độc với liều MLD cho cả hai : 5 chuột miễn dịch và 2 chuột đối chứng. Trong 3 tuần theo dõi, chuột đối chứng phải chết hết trong khi chuột miễn dịch phải sống ít nhất 3 con.
Ghi chú : MLD : liều nhỏ nhất gây chết hết động vật thí nghiệm.( Minimum Lethal Dose). CFU : đơn vị khuẩn lạc ( Colony Forming Unit). (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Một số vacxin đã thương mại hóa: