Trong quâ trình nuôi cấy in vitro, mẫu cấy vô trùng lă điều kiện bắt buộc, quyết định thănh công của thí nghiệm. Việc khử trùng phải đảm bảo tỷ lệ nhiễm thấp, đồng thời tỷ lệ mẫu tâi sinh cao, mô tồn tại được vă phât triển tốt. Hầu hết câc nghiín cứu nhđn giống in vitro lay ơn trín thế giới, hóa chất khử trùng được lựa chọn lă HgCl2 0,08 - 0,1% trong thời gian 10 phút (Priyakumari & Sheela, 2005; Kabir & cs., 2014; Kumar & cs., 2018; Devi & cs., 2019) hiệu quả mẫu sạch đạt cao, tuy nhiín loại hóa chất năy không an toăn cho người vă môi trường. Ở thí nghiệm năy, câc loại hóa chất được lựa chọn lă H2O2, Javen vă NADCC lă những chất khử trùng có mức độ an toăn cao. Kết quả thí nghiệm thu được qua bảng 4.43.
Tỷ lệ mẫu bị nhiễm ở tất cả câc công thức tương đối thấp từ 6,67 - 23,33%. Sử dụng hoạt chất NADCC 1% có tỷ lệ mẫu bị nhiễm ở mức thấp nhất, tiếp đến lă sử dụng H2O2 10% khử trung kĩp trong thời gian 15 phút.
Đối với cùng một hoạt chất khử trùng H2O2 10%, khi tăng thời gian khử trùng thì tỷ lệ mẫu nhiễm vă tỷ lệ mẫu hóa nđu giảm xuống đâng kể. Cụ thể tỷ lệ hóa nđu ở CT2 chiếm 33,33%, trong khi đó CT1 vă CT3 chỉ có 20%.
Bảng 4.36. Ảnh hƣởng của hóa chất khử trùng mẫu cấy đến khảnăng tâi sinh chồi của dòng lai J11 (sau 4 tuần nuôi cấy)
CTTN Tỷ lệ mẫu nhiễm
(%) Tỷ lệ mẫu hóa
nđu (%) Tỷ lệ mẫu không
phản ứng (%) Tỷ lệ mẫu tâi sinh (%)
CT1 10,00 20,00 6,67 63,33
CT2 23,33 33,33 10,00 33,33
CT3 16,67 20,00 16,67 46,67
CT4 13,33 10,00 26,67 50,00
CT5 6,67 13,33 3,33 76,67
Ghi chú: Môi trường nền MS + 3% Sucrose + 1 mg/l BAP. CT1: H2O2 10% lần 1 trong 10 phút, lần 2 trong 5 phút, CT2: H2O2 10% trong thời gian 10 phút, CT3: H2O2 10% trong thời gian 15 phút, CT4:
Javen 5,7% trong thời gian 15 phút, CT5: NaDCC 1% trong thời gian 15 phút
Đối với CT1 vă CT3 ở cùng một thời gian xử lý 15 phút, hiệu quả lăm sạch mẫu của CT1 (khử trùng kĩp) tốt hơn với tỷ lệ mẫu không phản ứng thấp 6,67%.
Trong khi đó ở CT3 thời gian mẫu ngđm liín tục kĩo dăi lăm cho hóa chất khử trùng thẩm thấu văo trong mô, gđy chết mẫu đạt 16,67%.
Sử dụng Javen 5,7% trong 15 phút có tâc dụng khử trùng bề mặt khâ tốt, tỷ lệ mẫu nhiễm vă hóa nđu tương ứng lă 13,33% vă 10%. Tuy nhiín số mẫu không có khả năng tâi sinh lại cao nhất 26,67%.
Như vậy, khử trùng mẫu cấy với NADCC1% trong 15 phút cho tỷ lệ mẫu tâi sinh cao nhất 76,67%, tỷ lệ mẫu nhiễm thấp 6,67%.