- Ở vi khuẩn: hydromycin, methotrexat, trimethoprim
Binary vectors (vector nhị thể)
Vector chuyển gen ở thực vật thông qua Agrobacterium
Binary plasmid còn được gọi là “shuttle vector” do nó có thể tái bản ở các loại tế bào chủ khác nhau (vd như E. coli và
Agrobacterium).
Plasmid hỗ trợ mang trình tự gen vir mã hóa các protein liên quan đến quá trình chuyển T-DNA vào tế bào thực vật.
Hệ thống vector nhị thể gồm 2 plasmid: binary plasmid và
plasmid hỗ trợ (helper plasmid).
Vector đồng cài nhập
Vector đồng cài nhập (tt)
DNA có thể được chuyển ở dạng
plasmid,
các đoạn được phân lập hay các sản phẩm PCR,
binary vector mang gen cần chuyển.
Bằng phương pháp chuyển gen trực tiếp thì có thể sử dụng DNA ở bất kì hình thức nào.
Trong quá trình bắn gen, DNA được kết tủa trên các vi đạn bằng vàng hay tungsteng (0,4 – 1,2 μm). Các vi đạn di chuyển với tốc độ cao về phía tế bào thực vật và đi qua thành tế bào, có thể vào vị trí nhân hay cận nhân.
Các yếu tố ảnh hưởng hiệu quả chuyển gen
• Sự toàn vẹn của tế bào. Phải đảm bảo sự toàn vẹn của tế bào khi chuyển DNA kích thước lớn. Nếu các vi đan kết dính thành cụm và đi vào cùng 1 tế bào sẽ gây tổn thương cho mô.
• Sự chuyển gen có thể được theo dõi bằng các biểu hiện gen tạm thời ở các tế bào sống (các tế bào chết hay bị tổn thương nặng không có biểu hiện này).
• Các yếu tố cần quan tâm khi tối ưu hóa việc chuyển DNA thông qua phân tích biểu hiện gen tạm thời: nồng độ DNA, khoảng cách từ vi đạn đến mô mục tiêu, điều kiện kết tủa DNA và kích thước vi đạn.
Promoters
Promoter là vùng DNA nằm trước gen mã hóa (vùng upstream) mang các trình tự chuyên biệt được nhận biết bởi các protein tham gia vào quá trình khởi đầu phiên mã.
• Promoter thường trực (constitutive promoter)
CaMV35S là loại promoter phổ biến nhất có nguồn gốc từ virus khảm súp lơ (cauliflower mosaic virus)
• Promoter đặc hiệu cho mô/giai đoạn phát triển (tissue- specific/development – stage-specific promoter)
RbcS promoter (ribulose small subunit) promoter đặc hiệu cho biểu hiện gen ở lục lạp
• Promoter cảm ứng (inducible promoter) được kích hoạt bởi các yếu môi trường
• Promoter tổng hợp (synthetic promoter) gồm các trình tự chính có nguồn gốc khác nhau