2 3 2 1 Các hợp chất từ cao CHCl3 – NA C
Cao NA C (25,0 g) tiến hành CC-SC pha thường, rửa giải với hệ dung môi tăng dần độ phân cực n-hexane-EtOAc tỉ lệ thay đổi từ 50/1→0/1, thu được 6 phân đoạn C 1-C 6
Phân đoạn C 2 (2,8 g) tiến hành CC-SC pha thường với hệ dung môi tăng dần độ phân cực n-hexane-EtOAc tỉ lệ thay đổi từ 30/1→0/1, thu được 3 phân đoạn C 2 1-C 2 3 Phân đoạn C 2 2 ( g) được CC-SC rửa giải bằng hệ dung môi tăng dần độ phân cực n- hexane-EtOAc tỉ lệ thay đổi từ 20/1→0/1, thu được 4 phân đoạn C 2 2 1-C 2 2 4 Tinh chế phân đoạn C 2 2 2 bằng CC-SC thu được NA 07 (12 mg) Phần C 2 2 3 được tinh chế bằng CC-SC sử dụng chất rửa giải là n-hexane-EtOAc (5/1) thu được hai hợp chất NA 04 (26,0 mg) và NA 06 (17,0 mg)
Phân đoạn C 3 (3,4 g) được CC-SC pha thường, rửa giải bằng hệ dung môi n-hexane- acetone (20/1, 10/1, 5/1, 1/1) thu được 4 phân đoạn C 3 1-C 3 4 Hợp chất NA 05 (12,0 mg) và NA 09 (15,0 mg) thu được từ C 3 2 bằng CC-SC pha thường Phân đoạn C 3 3 tiếp tục được CC-SC và rửa giải bằng hệ dung môi n-hexane-acetone (15/1, 10/1, 5/1, 1/1) thu được
2 phân đoạn C 3 3 1-C 3 3 2 Hợp chất NA 08 (8,0 mg) và NA 10 (14,0 mg) được tinh chế từ phân đoạn C 3 3 2
Phân đoạn C 5 (6,2 g) được điều chế bằng CC-SC pha thường, rửa giải bằng hệ dung môi của CHCl3-MeOH (20/1, 10/1, 5/1, 1/1) thu được 3 phân đoạn C 5 1-C 5 3 Phân đoạn C 5 2 được CC-SC nhiều lần sử dụng hệ dung môi CHCl3-MeOH (10/1) thu được NA 11
(10,0 mg) Hợp chất NA 03 (6,0 mg) được tinh chế từ phân đoạn C 5 3 bằng CC-SC pha thường, rửa giải bằng hệ dung môi CHCl3-MeOH (7/1)
Sơ đồ 2 2 Sơ đồ phân lập các hợp chất từ cao NA C
2 3 2 2 Các hợp chất từ cao EtOAc – NA E
Cao NA E (90,0 g) tiến hành CC-SC pha thường rửa giải với hệ dung môi tăng dần độ phân cực CHCl3-MeOH (50/1, 20/1, 15/1, 10/1, 5/1, 1/1, 0/100), thu được 7 phân đoạn lần lượt là E 1 (4,5 g), E 2 (10,0 g), E 3 (15,0 g), E 4 (12,0 g), E 5 (20,0 g), E 6 (15,0 g), E 7 (8,5 g)
Phân đoạn E 2 (10,0 g) tiến hành CC-SC pha thường rửa giải ly với hệ dung môi CHCl3-MeOH (20/1, 15/1, 10/1, 5/1, 1/1, 0/100) thu được 5 phân đoạn E 2 1-E 2 5 Ở phân đoạn E 2 2 (2,0 g) được CC-SC lặp lại nhiều lần với hệ dung môi giải ly CHCl3-MeOH (20/1) thu được hợp chất NA 12 (20,0 mg) Tương tự phân đoạn E 2 3 (1,8 g) CC-SC lặp lại nhiều lần với hệ dung môi CHCl3-MeOH (15/1) thu được hợp chất NA 16 (17,0 mg)
Phân đoạn E 4 (12,0 g) tiến hành CC-SC pha thường rửa giải ly với hệ dung môi CHCl3-MeOH (15/1, 10/1, 5/1, 1/1, 0/100) thu được 5 phân đoạn E 4 1-E 4 5 Ở phân đoạn E 4 1 (1,5 g) được CC-SC lặp lại nhiều lần với hệ dung môi giải ly CHCl3-MeOH (20/1) thu được 3 phân đoạn E 4 1 1-E 4 1 3 Ở phân đoạn E 4 1 2 (0,9 g) tiến hành CC-SC lặp lại nhiều lần với hệ dung môi giải ly CHCl3-MeOH (15/1) thu được hợp chất NA 15 (32,0 mg) và hợp chất NA 19 (10,0 mg) Phân đoạn E 4 3 (3,1 g) tiếp tục CC-SC lặp lại nhiều lần với hệ dung môi giải ly CHCl3-MeOH (10/1) thu được 3 phân đoạn E 4 3 1-E 4 3 3 Ở phân đoạn E 4 3 2 (1,2 g) được CC-SC lặp lại nhiều lần với hệ dung môi giải ly CHCl3-MeOH- H2O (10/1/0,1) thu được hợp chất NA 24 (14,0 mg) và hợp chất NA 25 (26,0 mg) Tương tự phân đoạn E 4 5 (3,8 g) CC-SC lặp lại nhiều lần với hệ dung môi giải ly CHCl3-MeOH (10/1) thu được 3 phân đoạn E 4 5 1-E 4 5 3 Ở phân đoạn E 4 5 2 (1,6 g) CC-SC lặp lại nhiều lần với hệ dung môi giải ly CHCl3-MeOH-H2O (10/1/0,1) thu được hợp chất NA 20
(23,0 mg) và hợp chất NA 21 (14,0 mg) Ở phân đoạn E 4 5 3 (1,1 g) CC-SC lặp lại nhiều lần với hệ dung môi giải ly CHCl3-MeOH-H2O (10/1/0,1) thu được hợp chất hợp chất
NA 22 (17,0 mg)
Phân đoạn E 5 (20,0 g) tiến hành CC-SC pha thường giải ly lần lượt với hệ dung môi CHCl3-MeOH (15/1, 10/1, 7/1, 5/1, 1/1, 0/100) Dựa trên kết quả TLC với thuốc thử H2SO4 10%/EtOH để hiện hình, gom các vết giống nhau thu được 5 phân đoạn ký hiệu là E 5 1-E 5 5 Từ phân đoạn E 5 1 (3,2 g) tiến hành CC-SC pha thường giải ly nhiều lần với hệ dung môi CHCl3-MeOH-H2O (10/1/0,1) thu được hợp chất NA 01 (10,0 mg) và NA 02
(14,0 mg) Từ phân đoạn E 5 2 (4,5 g) tiến hành CC-SC với hệ dung môi giải ly CHCl3- MeOH-H2O (10/1/0,1), kết quả thu được các hợp chất NA 14 (18,0 mg) và NA 23 (8,0 mg) Từ phân đoạn E 5 4 (2,2 g) tiến hành CC-SC pha thường với hệ dung môi giải ly CHCl3- MeOH-H2O (7/1/0,1→3/1/0,1) dựa trên kết quả TLC gom các vết giống nhau thu được 3 phân đoạn ký hiệu là E 5 4 1-E 5 4 3 Phân đoạn E 5 4 2 được CC-SC pha đảo RP-18 với hệ dung môi giải ly MeOH-H2O (1/1) thu được hợp chất NA 13 (8,0 mg)
Phân đoạn E 6 (15,0 g) được tiến hành CC-SC pha thường giải ly lần lượt với hệ dung môi CHCl3-MeOH (10/1, 7/1, 5/1, 3/1, 1/1, 0/100) Dựa trên kết quả TLC gom các vết giống nhau thu được 5 phân đoạn ký hiệu là E 6 1-E 6 5 Từ phân đoạn E 6 3 (2,8 g) tiến hành CC-SC nhiều lần với hệ dung môi giải ly CHCl3-MeOH-H2O (5/1/0,1) kết quả thu được hợp chất NA 18 (15,0 mg) Từ phân đoạn E 6 4 (2,2 g) tiến hành CC-SC nhiều lần với hệ dung môi giải ly CHCl3-MeOH-H2O (7/1/0,1→3/1/0,1) kết quả thu được 3 phân đoạn ký hiệu E 6 4 1-E 6 4 3 Từ phân đoạn E 6 4 2 (0,5 g) CC-SC nhiều lần với hệ dung môi giải ly CHCl3-MeOH-H2O (5/1/0,1), tiếp tục tiến hành CC-SC pha đảo RP-18 với hệ dung môi giải ly MeOH-H2O (1/2) thu được hợp chất NA 17 (11,0 mg)