Những hướng chuyển DNA vào nấm men, nấm mốc, động- thực vật cũng rất cần thiết nếu những sinh vật này cũng được sử dụng như vật chủ cho gen cloning. Mặc dù tế bào được ngâm muối thường xử lý với lithium chloride hay lithium acetate làm tăng sự hấp thu DNA bởi tế bào nấm men, thường dùng chuyển vào
Saccharomyces cerecisiae nhưng nó chỉ có tác dụng đối với một vài loài vi khuẩn.
Tuy nhiên đối với hấu hết sinh vật bậc cao thì dùng những phương pháp tinh vi hơn.
5.5.1 Biến nạp từng tế bào riêng biệt
Hầu hết vách tế bào cản trở hấp thụ tế bào. Đối với nuôi cấy tế bào động vật thiếu vách tế bào thì dễ dàng chuyển DNA, đặc biệt khi DNA được đẩy lại gấn vách tế bào bằng cách xử lý calcium phosphate (Hình 5.14a). Đối với những loại vách tế bào khác thì phải loại bỏ vách tế bào. Những enzyme phân hủy vách tế bào nấm men, nấm mốc và tế bào thực vật thì có sẵn và với điều kiện thích hợp thì nguyên sinh chất (protoplast) có thể được giữ nguyên (Hình 5.14b). Protoplast hấp thụ hoàn toàn DNA một cách dễ dàng, phương pháp chuyển DNA khác có thể được kích thích bằng kỹ thuạt đặc biệt như xung điện. Trong suốt quá trình những tế bào phải chịu tác động của những xung điện ngắn để tạo những lỗ hổng trên màng, qua đó phân tử DNA sẽ được xâm nhập vào tế bào. Sau khi chuyển DNA, protoplast được rửa để loại bỏ enzyme phân hủy và vách tế bào sẽ tự tái tạo lại.
Ngược với những kỹ thuật mô tả trước đó, có 2 phương pháp vật lý chuyển DNA vào tế bào. Đầu tiên là phương pháp vi tiêm, phương pháp này cần 1 pipette đặc biệt để tiêm DNA vào tế bào một cách trực tiếp (Hình 5.15a). Kỹ thuạt này được ứng dụng đầu tiên trên tế bào động vật nhưng ngay sau đó lại thành công trong tế bào động vật. Phương pháp thứ hai liên quan đến sự phá tế báo bằng vi đạn có vận tốc cao được làm bằng vàng hay tungsten có phủ DNA. Những vi đạn này được đưa vào tế bào bằng súng. Kỹ thuật này còn được gọi là biolistics và đã được sử dụng để nuôi nhiều loại tế bào khác nhau.