+ Máy HPLC phải được kiểm chứng theo định kỳ để bảo đảm máy họat động tốt cho kết quả phân tích cĩ độ đúng,độ lặp
lại,tuyến tính,tỷ lệ dung mơi ,tốc đơ
dịng,năng lượng đèn ü ....đúng theo yêu cầu thơng số của máy do nhà sản xuất đặt ra .
+ Đặc biệt cột sắc ký phải được kiểm tra về số đĩa lý thuyết theo định kỳ hay khi cĩ nghi ngờ về khả năng tách ,và rửa đúng qui
định sau mỗi lần chạy sắc ký :
vd : Với sắc ký pha thuận NP-HPLC : rửa bằng MeOH Khơng rưẳ bằng Nước
Với sắc ký pha đảo RP-HPLC : Khi
chạy pha động cĩ các loại muối thì phải rửa nước trước cho sạch muối ,sau đĩ rửa
-Tỷ lệ ACN hay MeOH : Nước ( 50 : 50 ) cho sạch hết các chất cịn đọng lại trong cột
đồng thời để bảo vệ cột khơng bị Mốc khi để lâu . Tuyệt đối tình trạng chỉ rửa bằng nước 100% sau đoú để cột một thời gian khơng sử dụng chắc chắn cột sẽ bị mốc ,hỏng khơng thể dùng được . Xin lưu ý nếu rưẳ cột khơng tốt thì kết quả chạy sắc ký sẽ khơng thể đáp ứng được các yêu cầu
phân tích .
4.2 - Chuẩn bị dung mơi pha động :
Các dung mơi dùng cho sắc ký là loại tinh khiết HPLC
Các hĩa chất dùng phải là loạûi PA
Pha dung mơi đúng ,chính xác theo đúng tỷ lệ đã nêu ,để ổn định dung mơi đúng thời gian theo chuyên luận đã yêu cầu .Lọc dung mơi qua màng lọc 0.2 - 0.45 m ,Siêu âm đuổi bọt khí
-4.3 Chuẩn bị mẫu đo HPLC :
+ Mẫu Thử : Sử lý mẫu thử theo đúng chuyên luận ,qui trình theo nguyên tắc :
- Dung mơi hịa tan hoạt chất phải hịa tan trong pha động ,trong nhiều trường hợp dùng dung mơi pha động để hịa tan mẫu - Phải loại bỏ các chất khơng tan trong pha
động hoặc khơng rưẳ giải được bằng cách lọc hay chiết ..
-Phải lọc và ly tâm ,lọc mẫu qua màng lọc 0.2 - 0.45 m
- Nồng độ mẫu ở mức vừa phải,khơng vượt quá khả năng tách của cột.Cĩ thể gây ra nghẽn cột.
-Mẫu chuẩn :
Pha dung dịch chuẩn cĩ thành phần
giống như mẫu thử trong cùng dung mơi ,riêng về nồng độ các thành phần giợng như mẫu thử là tốt nhất ,ngồi ra cĩ thể dùng nồng độ khác nhưng phải nằm trong khoảng tuyến tính đã khảo sát của từng thành phần.
4.4 Cách đo HPLC :
Mỗi máy cĩ cách vận hành khác nhau
tùy thuơcü vào hãng sản xuất ,phần mền sắc ký . Tuy nhiên cách vận hành luơn phải theo
nguyên tăïc sau :
+ chạy máy với dung mơi pha động để đuỏi hết bọt khí cĩ trong hệ thống ống dẫn trước khi cho vào cột.
+ Đặt đầy đủ các điều kiện sắc ký như : sắc ký như :
* Cấu hình máy
* Tỷ lệ các dung mơi pha động động
* Bước sĩng,thành phần
mẫu, các thơng số của quá trình phân tích yêu cầu . phân tích yêu cầu .
Phần V
Hệ thống sắc ký Merck - Hitachi
vă phần mềm điều khiển
D7000 – Multi HSM manager
(Sẽ bổ sung sau)
Người viết
KS Phan Hiền Lương Mail :