Chỉ thị kháng sinh
Chỉ thị kháng sinh
Đơn giản, dễ sử dụng
Trong môi trường có chất kháng sinh, tế bào chứa vector tái tổ hợp có gen kháng chất kháng sinh phát triển được
Tuy nhiên:
Một số tế bào xuất hiện các đột biến kháng chất kháng sinh vẫn có thể phát triển được
Hoặc plasmid không mang gen tái tổ hợp
Chỉ thị màu
Chỉ thị màu
Gen LacZ mã hóa enzyme β–galactosidase.
Khi có chất cảm ứng IPTG (isopropyl thiogalactoside – chất đồng đẳng của lactose) enzyme β–galactosidase được tổng hợp.
Enzyme β – galactosidase có khả năng thủy phân X-gal (5-bromo-4-cloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside) từ hợp chất không màu thành màu xanh.
Kết quả
Kết quả
Tế bào chứa LacZ nguyên vẹn (không tạo vector tái tổ hợp) tổng hợp enzyme β–galactosidase thủy phân X- gal
khuẩn lạc màu xanh
Đoạn DNA chèn vào giữa gen LacZ (tạo vector tái tổ hợp) LacZ mất hoạt tính không tổng hợp enzyme β– galactosidase không thủy phân X-gal
4
4. Phương pháp lai phân tử:. Phương pháp lai phân tử:
Chính xác cao
Thực hiện phức tạp, tốn kém, cần thiết bị chuyên dụng
Các bước thực hiện chủ yếu
Đặt 1 màng lai (nitrocellulose), để các khuẩn lạc in dấu ở vị trí tương ứng
Lấy màng lai đem lai với mẫu dò đánh dấu phóng xạ (hoặc huỳnh quang), mẫu dò phải
tương ứng với đoạn đặc hiệu của gen tái tổ hợp
Xử lý màng lai bằng NaOH để làm vỡ tế bào và biến tính DNA
Cố định DNA trên màng lai
ủ để tạo phản ứng lai rửa màng loại mẫu dò không lai
Thực hiện kỹ thuật phóng xạ tự ghi Kết quả
Kết quả
Những vị trí có lai sẽ có chấm đen trên phim nhạy phóng xạ, hoặc vết màu khi hiện huỳnh quang