Phần 4 Kết quả và thảo luận
4.2. Kết quả thử nghiệm điều trị bệnh do vi khuẩn Aeromonas Veronii quy mô
AEROMONAS VERONII QUY MÔ PHÒNG THÍ NGHIỆM
4.2.1. Biến động các yếu tố môi trường
Các yếu tố môi trườngảnh hưởng khá lớn đến sự sinh trưởng phát triển và miễn dịch của cá. Trong quá trình thí nghiệm các thông số môi trường được đo bằng máy và được thể hiện cụ thể trong bảng 4.2:
Bảng 4.2. Các yếu tố môi trường trong thời gian thí nghiệm Chỉ tiêu Nhiệt độ Chỉ tiêu Nhiệt độ (0C) pH DO (mg/l) NH4+/NH3- (mg/l) Sáng 27,8 – 28,3 6,7 – 7,2 6,1 – 6,5 0,0 - 0,5 Chiều 29 – 29,8 7,2 - 7,8 6,2 – 6,8
Nhiệt độ ảnh hưởng khá lớn đến sự phát triển và miễn dịch của cá. Theo Rowland (1986) nhiệt độ thích hợp đối với động vật thủy sản ở vùng nhiệt đới từ 25 – 30oC. Nhiệt độ thích hợp nhất cho sự sinh trưởng của cá là 20- 28oC, nhiệt độ phù hợp sẽ giúp quá trình trao đổi chất, tiêu hóa thức ăn và tốc độ tăng trưởng của cá được ổn định. Giá trị nhiệt độ trong thời gian thí nghiệm là 27,8 – 29,8oC trong thời gian thí nghiệm thì nhiệt độ trung bình giữa các nghiệm thức dao động không lớn trong và nhiệt độ chênh lệch giữa sáng chiều khoảng ±10oC, cùng với việc bố trí thí nghiệm ở nơi tương đối kín nên sự chênh lệch nhiệt độ giữa sáng và chiều không cao.
Trong quá trình thí nghiệm pH dao động từ 6,7 – 7,8. Theo Swingler (1969) pH = 7 - 8 là môi trường thích hợp cho đa số các loài tôm cá nuôi, khoảng pH thích hợp nhất cho cá phát triển nằm trong khoảng từ 6,5 – 8,5, môi trường không được quá kiềm hoặc quá acid. Do bố trí thí nghiệm sử dụng nước máy đã được sục khí liên tục trong 24 giờ trước khi sử dụng nên hạn chế thay đổi pH và sự chênh lệch pH trung bình giữa các nghiệm thức cũng không lớn. Vì vậy trong thí nghiệm này, giá trị pH là phù hợp cho sự phát triển của cá.
Hệ thống nuôi luôn đảm bảo sục khí 24/24, sục khí ổn định đảm bảo cung cấp đủ oxy cho các bể nuôi. DO luôn dao động trong khoảng từ 6,1 – 6,8 mg/l hoàn toàn phù hợp với ngưỡng DO trong NTTS (Mai Đình Yên, 1979).
Trong quá trình thí nghiệm thì nguồn nước sử dụng cho các nghiệm thức là nước máy, thời gian thí nghiệm ngắn và hàm lượng NH3 ở các nghiệm thức không cao, thấp nhất là 0,0 ppm và cao nhất là 0,5 ppm. Nồng độ này không gây ảnh hưởng đến sinh trưởng của cá. Kết quả này tương đối ổn định và phù hợp trong mức cho phép.
Như vậy, các yếu tố môi trường được kiểm tra nhìn chung luôn nằm trong ngưỡng thích hợp đối với cá Nheo Mỹ.
4.2.2. Kết quả xác định nồng độ vi khuẩn gốc
Sau 24h cấy trang vi khuẩn Aeromonas veronii với độ pha loãng 10-6 từ dung dịch gốc ban đầu (pha loãng 1000000 lần) thì tiến hành đếm khuẩn lạc, số
khuẩn lạc trên đĩa thạch xác định được là 4 khuẩn lạc, áp dụng công thức tính nồng độ vi khuẩn có thể xác định được mật độ vi khuẩn gốc là 0,26×109 CFU/ml.
4.2.3. Kết quả xác định liều LD50
Cá Nheo mỹ sau quá trình cảm nhiễm vi khuẩn A. veronii ở các độ pha loãng từ 100 – 10-5 CFU/ml và theo dõi trong 7 ngày ta thu được kết quả sau: Không có cá chết ở nghiệm thức đối chứng tiêm nước muối sinh lý, cá ở trạng thái sinh lý bình thường trong suốt thời gian thí nghiệm (tỉ lệ sống của cá là 100%).
Ở các nghiệm thức cảm nhiễm vi khuẩn chủng Aeromonas veronii, cá chết với tỉ lệ tăng dần theo mật độ vi khuẩn cảm nhiễm. Cá chết ở các nghiệm thức cảm nhiễm có dấu hiệu bệnh lý là mất nhớt, khô ráp, da bị xuất huyết, xuất hiện các đốm xuất huyết trên thân, gốc vây, quanh miệng, hậu môn. Mắt lồi đục, bụng chướng to, các vây xơ rách.
Hình 4.2. Bệnh tích của cá sau khi cảm nhiễm vi khuẩn
Thời gian sau khi cá được cảm nhiễm và bắt đầu chết là 2 ngày ở nghiệm thức tiêm vi khuẩn với độ pha loãng 100 CFU/ml. Tỉ lệ cá chết là 100% sau 3 ngày. Ở nghiệm
thức tiêm vi khuẩn với độ pha loãng 10-1 CFU/ml thì các bắt đầu chết sau 2 ngày cảm nhiễm và đạt 100 % sau 5 ngày. Cuối thí nghiệm tỉ lệ cá chết 13,33% ở nghiệm thức tiêm vi khuẩn với độ pha loãng là 10-2 và 26,67% ở nghiệm thức tiêm 10-3. Các nghiệm thức tiêm vi khuẩn với độ pha loãng 10-4 và 10-5 cá bắt đầu chết sau 3 ngày cảm nhiễm. Sau 7 ngày, tỉ lệ cá chết ở các nghiệm thức này lần lượt là 53,33%, 76,67%. Cá ngừng chết từ ngày thứ 7 sau cảm nhiễm đến khi kết thúc thí nghiệm.
Tỷ lệ chết của cá trong thí nghiệm và xác định liều LD50 của vi khuẩn
Aeromonas veronii được biểu thị trong bảng 4.1 và hình 4.3.
Bảng 4.3. Tỷ lệ cá chết thí nghiệm thăm dò LD50
Độ pha loãng
(CFU/ml) nghiệm mỗi Số cá thí lần lặp (con) Số cá chết cộng dồn 3 lần lặp (con) Số cá sống cộng dồn 3 lần lặp (con) Tỷ lệ chết cộng dồn 3 lần lặp (%) 100 10 30 0 100 10-1 10 30 0 100 10-2 10 26 4 86,7 10-3 10 22 8 73,3 10-4 10 14 16 46,7 10-5 10 7 23 23,3 ĐC 10 0 30 0
Từ kết quả tỷ lệ cá chết tương ứng với các độ pha loãng vi khuẩn, ta có phương trình Hình 4.3. Phương trình LD50 y = 2.5189ln(x) - 15 0 5 10 15 20 25 30 35 0 50000000 100000000 150000000 Số c á c h ế t Nồng độ vi khuẩn
Từ kết quả thí nghiệm gây cảm nhiễm xác định được giá trị LD50 của chủng vi khuẩn Aeromonas veronii ở cá Nheo mỹ là 1,48x105 CFU/ml.