1. QUY TRÌNH PHÂN TÍCH
* Dung dịch A, dung dịch B, dung môi pha mẫu, điều kiện sắc ký, dung dịch chuẩn gốc, dung dịch thử gốc: Như phần định lượng
* Chuẩn bị mẫu:
- Dung dịch chuẩn tạp: Hòa tan chuẩn tạp A của Fexofenadin trong dung môi pha mẫu để được dung dịch có nồng độ khoảng 0,05 mg/ml.
- Dung dịch phân giải: Hút chính xác 3,0 dung dịch chuẩn gốc, 4,5 ml dung dịch chuẩn tạp vào bình định mức 50 ml, thêm pha động đến vạch, lắc đều. (Dung dịch phân giải có nồng độ của Fexofenadin hydroclorid là 0,015 mg/ml và của tạp A của Fexofenadin là 0,0045 mg/ml) - Dung dịch thử: Sử dụng dung dịch thử gốc ở phần định lượng.
- Dung dịch đối chiếu: Pha loãng 1,0 ml dung dịch thử thành 100,0 ml với pha động, lắc đều. Pha loãng 5,0 ml dung dịch thu được thành 50,0 ml với pha động, lắc đều.
* Tiến hành:
26
Tiêm dung dịch phân giải vào hệ thống sắc ký. Độ phân giải giữa Fexofenadin hydroclorid và tạp A của Fexofenadin không dưới 7,0; hệ số kéo đuôi của pic Fexofenadin hydroclorid không được quá 2,0; độ lệch chuẩn tương đối của diện tích píc giữa 6 lần tiêm lặp lại của Fexofenadin hydroclorid không được quá 2,0 % và của tạp A không được quá 3,0 %.
Tiêm dung dịch đối chiếu vào hệ thống sắc ký: Độ lêch chuẩn tương đối giữa 6 lần tiêm lặp lại của pic chính không được quá 6 %.
- Tiêm dung dịch thử vào hệ thống sắc ký. * Yêu cầu:
Trên sắc ký đồ dung dịch thử:
- Tạp chất A (có thời gian lưu tương đối so với Fexofenadin hydroclorid khoảng 1,6) không được có diện tích lớn hơn 4 lần diện tích của píc chính trên sắc ký đồ thu được của dung dịch đối chiếu (0,4 %)
- Tạp chất phân hủy decarboxylat hóa (có thời gian lưu tương đối so với Fexofenadin hydroclorid khoảng 6,7): Diện tích của píc tương ứng với tạp chất phân hủy decarboxylat nhân với 1,1 không được lớn hơn 1,5 lần diện tích của píc chính trên sắc ký đồ thu được của dung dịch đối chiếu (0,15 %)
- Từng tạp chất khác không được có diện tích lớn hơn 2 lần diện tích của píc chính trên sắc ký đồ thu được của dung dịch đối chiếu (0,2 %)
- Tổng diện tích của tất cả các píc tạp không được lớn hơn 5 lần diện tích của píc chính trên sắc ký đồ thu được của dung dịch đối chiếu (0,5 %)
- Bỏ qua các píc có diện tích nhỏ hơn 0,5 lần diện tích của píc chính trên sắc ký đồ thu được của dung dịch đối chiếu (0,05 %)
2. ĐỀ CƯƠNG 2.1. Độ đặc hiệu 2.1. Độ đặc hiệu
* Thực nghiệm:
- Tiến hành sắc ký các loại mẫu sau đây theo quy trình phân tích: Dung môi pha mẫu.
Pha động.
Dung dịch mẫu placebo: Chuẩn bị theo qui trình, thay mẫu thử bằng mẫu placebo. Dung dịch phân giải: Chuẩn bị theo qui trình.
Dung dịch đối chiếu: Chuẩn bị theo qui trình. Dung dịch thử: Chuẩn bị theo qui trình.
- Ghi lại các sắc ký đồ. Xác định thời gian lưu của hoạt chất cần phân tích.
* Yêu cầu:
- Sắc ký đồ của dung môi pha mẫu, pha động, mẫu placebo phải không xuất hiện píc ở trong khoảng thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu của Fexofenadin hydroclorid, píc tạp A và
27
píc tương ứng với tạp chất phân hủy decarboxylat hóa (có thời gian lưu tương đối so với Fexofenadin hydroclorid khoảng 6,7).
- Độ phân giải giữa píc Fexofenadin hydroclorid và tạp A trên sắc ký đồ dung dịch phân giải không nhỏ hơn 7,0.
- Sắc ký đồ dung dịch thử phải cho píc có thời gian lưu tương ứng với thời gian lưu của pic Fexofenadin hydroclorid trong sắc ký đồ dung dịch phân giải.
- Píc của Fexofenadin hydroclorid trong sắc ký đồ dung dịch thử phải tinh khiết (putiry factor ≥ threshold).
2.2. Độ thích hợp của hệ thống * Thực nghiệm: * Thực nghiệm:
Dung dịch phân giải, dung dịch đối chiếu: sử dụng dung dịch từ phần thẩm định độ đặc hiệu.
Tiến hành sắc ký mỗi dung dịch 6 lần, ghi lại các sắc ký đồ và xác định giá trị thời gian lưu, diện tích píc trung bình, RSD.
* Yêu cầu:
- Trên sắc ký đồ dung dịch phân giải: Độ phân giải giữa Fexofenadin hydroclorid và tạp A của Fexofenadin không dưới 7,0; hệ số kéo đuôi của pic Fexofenadin hydroclorid không được quá 2,0; độ lệch chuẩn tương đối của diện tích píc giữa 6 lần tiêm lặp lại của Fexofenadin hydroclorid không được quá 2,0 % và của tạp A không được quá 3,0 %.
- Trên sắc ký đồ dung dịch đối chiếu: Độ lêch chuẩn tương đối của diện tích píc giữa 6 lần tiêm lặp lại của pic chính không quá 6%.
2.3. Giới hạn phát hiện
* Thực nghiệm:
Dung dịch giới hạn phát hiện: Pha loãng từ dung dịch chuẩn gốc với pha động đến khi đáp ứng của píc chính gấp khoảng 3 lần độ nhiễu đường nền.
Tiến hành sắc ký 6 lần, ghi lại các sắc ký đồ và xác định giá trị thời gian lưu, diện tích píc trung bình, RSD.
* Yêu cầu:
Độ lệch chuẩn tương đối của diện tích píc Fexofenadin hydroclorid giữa 6 lần tiêm lặp lại không quá 10,0 %.
3. BÁO CÁO KẾT QUẢ THẨM ĐỊNH
3.1. Nguyên, vật liệu – thiết bị và dụng cụ phân tích sử dụng trong quá trình thẩm định * Chất chuẩn: * Chất chuẩn: