2. Probiotics
3.2.1.4. Kết quả so sánh khả năng ức chế vi sinh vật chỉ thị của dịch
acidophilus trong mơi trƣờng MRS và dịch chiết dứa.
1. Kết quả xác định khả năng ức chế tổng quát của nuơi cấy:
E. coli ủ cùng với dịch li tâm của mơi trường MRS và dịch chiết dứa thích hợp sau lên men (khơng chỉnh pH), nhiệt độ 370C, hiếu khí và được đo OD sau 21 giờ. Kết quả trình bày hình 4.10. E. coli hầu như khơng phát triển. Sinh khối E. coli giảm 99.5% và 99.1% khi nuơi với dịch mơi trường MRS và dịch chiết dứa li tâm. Kết luận vi khuẩn L. acidophilus cĩ hoạt tính probiotics.
2. Kết quả xác định khả năng ức chế của bacteriocins.
Kết quả định lƣợng H2O2: Dịch lên men trong mơi trường MRS và dịch chiết dứa thích hợp được thu tại thời điểm 16 giờ và 18 giờ để xác định hàm lượng H2O2.
Kết quả: dịch lên men sau khi bổ sung các hĩa chất như trên, cuối cùng bổ sung
chỉ thị hồ tinh bột thì khơng thấy xuất hiện màu xanh đậm (kết hợp giữa hồ tinh bột và iode). Kết luận vi khuẩn L. acidophilus khơng sinh H2O2. L. acidophilus khơng sinh H- 2O2 trong điều kiện nuơi cấy tĩnh. Mẫu đối chứng thay dịch mơi trường sau lên men bằng nước cất bổ sung 3 giọt H2O2.
Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Hình 3.8: Mơi trường dịch chiết dứa thích hợp khơng sinh H2O2
Kết quả định lƣợng acid: khơng định lượng được hàm lượng acid, do chỉ thị
màu khơng thể phân biệt được bước chuyển màu.
Kết quả xác định khả năng ức chế của bacteriocins :
L. acidophilus khơng sinh H2O2 trong quá trình lên men trong cả hai mơi trường MRS và dịch chiết dứa thích hợp, do đĩ yếu tố ức chế sinh trưởng cịn lại đối với E. Coli cĩ thể là acid hữu cơ và bacteriocins. Kết quả định lượng acid khơng thành cơng nên tơi xác định khả năng ức chế của bacteriocins bằng cách điều chỉnh pH dịch lên men về 6.0 để loại bỏ tác động của acid.
Dịch lên men cả hai mơi trường MRS và dịch chiết dứa sau khi lên men được chỉnh pH 6.0 bằng NaOH 1N, kết quả sinh khối E.coli giảm được biểu diễn trên hình 3.9: 99.5 27.5 99.1 13.3 0 20 40 60 80 100 120 khơng chỉnh pH chỉnh pH % ứ c ch ế tă ng t rư ở ng E .c o li MRS Dứa
Hình 3.9 : Đồ thị biểu diễn khả năng ức chế vi sinh vật chỉ thị (E.coli) của dịch nuơi cấy L. acidophilus trên mơi trường MRS và dịch chiết dứa
Kết quả trên hình 3.9 cho thấy khi khơng chỉnh pH thì gần như 100% vi khuẩn
E.coli bị ức chế tăng trưởng khi ủ chúng với dịch nuơi cấy L. acidophillus trong cả MRS lẫn nước chiết dứa sau li tâm. Trái lại, khi loại bỏ tác động của acid hữu cơ bằng
Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
cách chỉnh pH về 6,0, E.coli ủ với dịch ly tâm L. acidophilus nuơi trong mơi trường MRS bị ức chế 27,5%; trong khi giá trị này chỉ là 13,3 % nếu nuơi cấy L. acidophilus
trong mơi trường dịch chiết dứa thích hợp. Điều đĩ cho thấy vi khuẩn L. acidophilus
tổng hợp bacteriocins trong cả hai mơi trường, nhưng trong mơi trường dịch chiết dứa thì lượng bacteriocin thấp hơn so với mơi trường MRS. Gần đây, người ta khám phá ra rằng chất cảm ứng Bacteriocin là một số peptide [30]. Cĩ thể rằng trong mơi trường MRS nguồn nitơ phong phú hơn (ngồi cao nấm men cịn cĩ peptone, cao thịt) cung cấp nhiều dạng peptide trong đĩ cĩ chất cảm ứng bacteriocins. Chất cảm ứng này cĩ lẽ khơng nhiều trong mơi trường dịch chiết dứa (chỉ chứa cao nấm men là nguồn nitơ hữu cơ duy nhất).
Như vậy, khả năng kháng vi sinh vật chỉ thị E. coli của dịch nuơi cấy L. acidophilus li tâm chủ yếu là do tác động của acid hữu cơ.
2. Tính tốn kinh tế cho mơi trƣờng dịch chiết dứa
Giá thành sản phẩm tính cho 1 lít mơi trường dịch chiết dứa thích hợp:
Bảng 3.6: Tính tốn giá thành cho 1 lít mơi trường dịch chiết dứa thích hợp (2009)
Thành phần mơi trường Khối lượng Giá cả (VND)
Dứa 1 kg 17500 Triamonium hydrogen citrate 7 g 1190 K2HPO4 1.8g 180 Cao nấm men 20g 20000 Tween 80 1ml 160 Tổng cộng thành tiền: 39000
Trong 1 lít mơi trường MRS lượng sinh khối thu được là 6.8 x 1011
cfu, trong khi đĩ sinh khối thu được ở mơi trường dịch chiết dứa là 6.3. x 1011
cfu. Xét về mặt kinh tế một lít mơi trường MRS khoảng 314000 (VND) và mơi trưởng dịch chiết dứa thích hợp là 39000 (VND).Như vậy khi sử dụng mơi trường dịch chiết dứa thì chi phí giảm
Số hĩa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
88% so với giá thành khi sử dụng mơi trường MRS, lượng sinh khối thu được của hai mơi trường là tương đương nhau.
Để giảm giá thành và tận dụng lượng đường cịn lại sau khi thu sinh khối thì dịch chiết dứa cần được pha lỗng ½ để hàm lượng đường đạt 25 mg/ml, mơi trường chỉ cịn 30000 (VND)/l mơi trường. Giá thành giảm 90 % so với mơi trường MRS.