Chúng tôi tiến hành ủ dịch chứa enzyme (cùng điều kiện thí nghiệm, pH 8) trong tủ ấm ở các nhiệt độ khác nhau, kết quả kiểm tra hoạt tính với cơ chất casein nhƣ sau:
Bảng 3.16. Ảnh hưởng của nhiệt độ lên hoạt tính của enzyme
Chúng tôi tiến hành khảo sát ảnh hƣởng của nhiệt độ đến hoạt tính của enzyme kết hợp với việc điều chỉnh pH thu đƣợc những kết quả nhƣ sau:
Bảng 3.17. Ảnh hưởng của nhiệt độ và pH lên hoạt tính của enzyme
Nhiệt độ 0 C pH 4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 37 2,19 2.05 1.91 1.86 1.05 1.32 45 3.96 3.76 3.83 3.54 3.99 3.68 55 4.39 4.6 4.27 4.45 4.82 4.76 65 5.92 6.01 6.23 6.25 6.13 5.98 75 5.96 5.16 5.09 4.98 5.02 3.36 80 4.25 4.51 4.21 4.72 3.91 2.94 Nhiệt độ 370C 450C 550C 650C 750C 800C Vdịch chiết (ml) 0 0.025 0.050 0.075 0.10 0.15 Vcasein (ml) 2 2 2 2 2 2
61
Số hóa bởi Trung tâm Học Liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
Bằng phƣơng pháp xử lý thống kê phân tích phƣơng sai 2 yếu tố, kết quả nhƣ sau:
Ft = 71,56 > F0,05 = 3,86 FpH = 2,34 < F0,05 = 3,86
Kết luận: trong khoảng khảo sát (nhiệt độ : 37-80°C, pH : 4-9) chỉ có nhiệt độ ảnh hƣởng đến hoạt độ của enzyme một cách có ý nghĩa.
Hình 3.6.Ảnh hưởng của nhiệt độ và pH lên hoạt tính của enzyme
Qua đồ thị biểu diễn chúng ta thấy rõ hơn các vùng biểu diễn hoạt tính enzyme kéo dài theo trục pH, chứng tỏ pH ít ảnh hƣởng đến hoạt tính của enzyme trong khoảng khảo sát (pH 4-9). Điều này cho thấy khả năng ứng dụng cao trong thực tế, do vấn đề điều chỉnh pH trong thực tế là không dễ dàng nhƣ trong phòng thí nghiệm, khó tạo đƣợc độ đồng đều của dịch cơ chất đem thuỷ phân. Nhiệt độ ảnh hƣởng nhiều đến hoạt động xúc tác của enzyme (p>0,05). Nhiệt độ 65°C cho thấy có hoạt tính cao nhất (dao động trong
Ho ạt t ính đ ặc hi ệu (U/m g) Nhiệt độ (0C) pH 6 4 3 2 5
62
Số hóa bởi Trung tâm Học Liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn
khoảng 5.92- 6.25 U/mg protein). Đây là nhiệt độ khá cao khi áp dụng trong thực tế, việc gia nhiệt cho cơ chất trong khi phản ứng phải có trang thiết bị thích hợp để duy trì nhiệt độ tối ƣu cho enzyme, nhƣng đây cũng là ƣu điểm của chế phẩm enzyme thu đƣợc, vì ở nhiệt độ cao này, dịch thuỷ phân không cần bổ sung chất bảo quản tránh hƣ hỏng gây ra do các tác động gia nhiệt.
Ở nhiệt độ thấp (37°C) hoạt tính giảm ở pH cao (≥ 8). Ở nhiệt độ cao cũng vậy nhƣng ít rõ hơn. Ở nhiệt độ 65°C, hoạt tính của enzyme mạnh nhất, yếu tố pH ít tác động, tuy vậy ở pH 7, hoạt tính của enzyme là cao nhất.