3.1. ƯƠN 3. ẢÀ ẢN KT QUẢ XC ĐỊNH CC CHỈ SH LÝ
3.1.2. Hm lượn tro
2.3.1. đồ ết t 5. Sơ ồ chi t tách 2.3.2. địn t ôn s lý a. * ắ
Dùn sứ n n l m ay ết nướ tron m u. C n trọn lượn m u trướ v sau k sấy k t đ tín ra p ần tr m nướ tron m u.
* C h
- C u n ị 2 ố sạ sấy ố tron tủ sấy ở n ệt độ 105oC đến tron lượn k n đ ùn n p n tí n x địn trọn lư n ố mo ( ). C o m u ột tua s n v o ố k oản 15 gam đ m n p n tí lạ k ố
X l s ộ: làm sạ p khô, nghiền mịn
Định danh b ng GC-MS
C ết lần lượt vớ un m k nhau: n-hexane, benzene, chloroform, ethyl acetate, methanol, ethanol. Tua sen Dị ết ủa t n loạ dung môi Bã ết Bột tua s n X địn m lượn tro độ m m lượng kim loại AAS
lượn k đ t n lượn ố v m u l m1(g).
- Đặt ố v o tủ sấy đan ở n ệt độ 105oC sấy k oản 4 ờ t lấy ố m u ra để n uộ 15 p út tron n út m s ll a n. C n ố m u đã sấy.
- C o ố m u v o sấy t ếp k oản 2 ờ t n lạ lần nữa o đến k trọn lượn ố m u ữa lần sấy k n t ay đ . G n n k ố lượn m2 (gam) [10].
* í ả : (W)
Tron đ :
mo : k ố lượn ố sau k sấy đến k ố lượn k n đ (gam). m1: k ố lượn ố v m u trướ k sấy (gam).
m2 : k ố lượn ố v m u sau k sấy đến k ố lượn k n đ (gam).
b. ư o
* ắ : Để x địn m lượn ữu t n v n uy n tố v tron t ể độn – t ự v t n ườ ta ùn p ư n p p tro a m u. M u đượ x l s ộ sau đ đ m nun ở n ệt độ 450-500oC tron én sứ ịu n ệt. C ất ữu ị đốt y tron tro òn lạ ất v k ay . K ố lượn ất ữu t n đượ tín l t n ất ữu ị đốt y và là ệu số ữa k ố lượn m u an đầu v k ố lượn tro sau k nun [11].
* C h:
C n 15 am m u vớ độ ín x 0 001 am tron ố nun đã u n ị. Sấy tron tủ sấy ở n ệt độ 105oC đến k .
Nun n t n tr n ếp đ ện đến t an a. C o v o lò nun ở n ệt độ k oản 450-500o
C c o đến k t u đượ tro m u tr n n ( mặt s t s m u đ ạ mặt đồn v man an m u xan n ạt).
- L m n uộ tron n út m. Qu tr n nun đượ lặp lạ o đến k ố nun k ố lượn k n đ .
* í ả: í :
Tron đ m: lượn m u (gam)
m1: k ố lượn ố nun v m u ( am) m2: k ố lượn ố nun v tro ( am)
c. ư
* ắ : M u đượ v a v đo tr n m y quan p ấp t ụ n uy n t S.
* C :
- C n k oản 15 am tua s n o v o én nun . Đặt én m u v o lò nun ở n ệt độ <100oC n n t t n ệt độ l n đến 450oC ữ n ệt độ n y tron k oản 6-8 ờ.
- Lấy én nun ra k lò nun l m n uộ đến n ệt độ p òn nếu tro ưa tr n t t m 1-2ml un ị HNO3 0 1M đưa v o lò nun t ếp tụ nun đến tro tr n .
- Hòa tan ặn n 25ml HNO3 v 75ml HCl tron n đ n mứ 100ml. Dun ị n y ùn để đo tr n m y S [1].
* í ả
Tron đ : X: m lượn k m loạ tron m u (m /k ) ( /k ) C: m lượn k m loạ đo tr n t ết ị (m /l) ( /l) V: t ể tí địn mứ (ml)
2.3.3 ân tí địn l ợn t n n
G ớ t ệu p ư n p p Low nt al: p ư n p p ox a tan n n dung dịch KMnO4.
* ắ : tron m trườn H2SO4 ợp ất polyp nol (tan n) ễ ị ox a ở KMnO4 vớ ất ỉ t ị l n o arrm n. Sau k ox a ết polyphenol, KMnO4 s t ếp tụ ox a ất m u ỉ t ị.
* C :
- P a ỉ t ị sun o n o arm n: n 1 am n o arm n o v o ố t ủy t n o t m 25ml H2SO4 đ m đặ ( = 1,84g/ml). Đ y n p để v o ỗ tố qua đ m oặ ít n ất 4 ờ để òa tan ết n o arm n. C uyển to n ộ san n địn mứ 1000ml đã sẵn một ít nướ ất. Dùn nướ ất tr n n ều lần ố đựn n o arm n v t m nướ ất đến 1000ml. L đều uyển san lọ m u n u ùn ần [9].
- Địn lượn tan n: C n 2 am ột n uy n l ệu đã qua x l v 150ml nướ đun t ủy ở 100oC v a đun v a k uấy tron 60 p út. Sau đ để l n v lọ t u ị lần 1. T ếp tụ o 70ml nướ v o đun ở 100oC tron 30 p út sau đ lấy 1 ít ị ra t vớ F Cl3 o đến k k n xuất ện kết tủa m u xan t n . Sau đ lọ v o ị t u đượ v o n địn mứ 500ml t m nướ ất v a đủ đến vạ . Lấy 10ml m u 10ml un ị ax t sun o n o arm n rồ địn lượn n KMnO4 1N v a n v a l đều o đến k xuất ện m u v n k m t n u n độ.
Son son ùn t ến n địn lượn một m u tr n đố ứn vớ 10ml ax t sun o n o arm n u n n KMnO4.
* ả:
H m lượn tan n t o tín ất k tron m u phân tí đượ tín t o n t ứ Tron đ : X: m lượn tan n t o % ất k a: t ể tí un ị KMnO4 đ m u n m u p n tí (ml) : t ể tí un ị KMnO4 đ m u n m u tr n (ml) V1: t ể tí m u đ m p n tí (10ml) V2: t ể tí n địn mứ (500ml)
0 00582: k ố lượn tan n ứn vớ 1ml un ị KMnO4
G: k ố lượn n uy n l ệu k (2 am)
2.3.4. địn t àn p ần ọ tron ị ết
C u n ị 6 túi o ột tua s n v o vớ k ố lượn v a p ả sau đ o lần lượt 6 un m xan nz n loro orm t yl a tat m t anol ethanol.
T ến n ở n ệt độ 80oC ết đến k un ị tron n ứa m u ủa sox l t k n òn m u nữa t n lạ .
K ểm tra sự ết k ệt n t t m y để n uộ v mở ệ t ốn rút lấy một ọt un m v t tr n m ến kín nếu t ấy k n òn vết tr n kín l đã ết k ệt.
Đ m lọ t u đượ ị ết xan nz n loro orm t yl a tat m t anol t anol. Sau đ lấy một p ần ị ết đo p GC-MS tạ
Trun t m Kỹ t u t T u u n Đo lườn C ất lượn II số 2- N Quyền- Đ Nẵn . P ần òn lạ đ m ạn t u đượ ao ết ủa un m đ m n ta đượ kết quả. b. ươ -MS Đo GC – MS x địn t n p ần a ọ tron mỗ ị ết vớ ư n tr n ạy n ư sau:
- M u dịch chiết được làm khan b ng Na2SO4, chạy trên hệ thống s c ký khí khối ph .
- Hệ thống s c ký khí khối ph : GC/MS 7890A/5975C, Agilent technology, Mỹ. -Cột s c ký mao quản: HP-5 : 30 m x 250 µm x 0.25 µm - C ư n tr n n ệt độ lò cột 50 °C(0‟) 120°C 165 °C 300 °C (10‟) - Buồng tiêm m u
+ Nhiệt độ buồng tiêm m u: 280 °C + Áp suất : 7.6522 psi + Tỷ lệ chia dòng : 10 :1 + Thể tích tiêm : 1µl - Khối ph + Khoảng ph quét: 28 – 600 m/z + Nhiệt độ nguồn: 230oC 2.3.5 ảo s t ếu t ản ởn đến qu tr n ết t a. ờ C u n ị 6 m u o lần lượt v o 6 n tam mỗ m u n một lượn m( ) sau đ o t ếp một lượn un m x địn V(ml) n ư n au
ủa ùn một un m v o. T ến n ết ưn n n ở n ệt độ n ư n au tron k oản t ờ an t ay đ t 30÷180 phút. Đ m lọ v ạn ị ết t u đượ ao ết ở t ờ an ết k n au đ m n. C ọn t ờ an ết tốt n ất. b. C u n ị 5 m u o lần lượt v o 5 n tam mỗ m u n một lượn m( ) sau đ o t ếp một lượn un m x địn V(ml) n ư n au ủa ùn một un m v o. T ến n ết ưn n n ở n ệt độ t ay đ t 70 ÷ 90o C, trong k oản t ờ an tốt n ất đã ọn. Đ m lọ v ạn ị ết t u đượ ao ết ở n ệt độ ết k n au đ m n. C ọn n ệt độ ết tốt n ất. c. ư ủ ỉ - C u n ị 5 m u o lần lượt v o 5 n tam mỗ m u n một lượn m( ) sau đ o t ếp t ể tí k n au (V1, V2, V3,...ml) của ùn một un m v o. T ến n ết ưn n n tron k oản t ờ an v n ệt độ tốt n ất đã ọn. Đ m lọ v ạn ị ết t u đượ ao ết ở tỉ lệ r n-l n k n au đ m n. X địn tỉ lệ r n-l n tốt n ất.
d. t
C n một lượn m( ) m u o v o n ầu 500ml sau đ o t ếp một lượn un m x địn V(ml) v o. T ến n ết ưn n n tron k oản t ờ an v n ệt độ tốt n ất đã ọn. Đ m lọ t u đượ ị ết lần 1 òn ã sau k lọ ta o v o n ầu sau đ o t ếp V(ml) un m tr n v o t ếp tụ đun tron t ờ an v n ệt độ tr n. Tư n tự ta ị ết lần 2 v lần 3.
Đ m ạn t u đượ ao ết ủa ị ết lần 1 lần 2 v lần 3 sau đ đ m n ta đượ kết quả.
2.3.6. đồ đ ều ế o dichloromethane
.7 Sơ ồ ề cao dichloromethane
C n k oản 350 gam m u tua s n đã đượ x l . N m m u tron 2 lít m t anol tron 7 n y t ến n n m 3 lần l n tụ . Dị ết sau 3 lần ộp lạ đ t ến n quay n k n t u đượ ao m t anol l p ần ặn tư n đố sệt.
Hòa tan ao m t anol tron nướ o v o p ễu ết 1 lít. T ến n ết l n – l n l n tụ vớ lorom t an . Dị cloromethane t ến n quay n k n t u đượ cao dichloromethane.
C ết n un m methanol
Bã ặn ết Dị ết m t anol C ạn Cao methanol
Hòa vớ nướ v lom tan rồ ết l n - l n Dị ết lom t ane Bã ặn ết Chạy s k ột kết ợp s k ản m n để t ất kmkkkkhhhj N uy n l ệu: tua s n n ền ột
2.3.7. C ạ s ý bản m n cao dichloromethane
C u n ị ản m n : ản m n đượ mua tr n t ị trườn đã đượ tr n s l a n kí t ướ 20x20 m. C t ản m n ra t n n ữn ản n kí t ướ 1x5 m. Dùn út vút n ọn vạ mứ xuất p t mép ướ ản m n 0 5 m mứ t ền t ền tuyến un m mép tr n ản m n 0,5cm.
Lựa ọn un m : t ọn un m n-hexan để n địn ột v ệ dung môi n-hexan: ethyl ax tat đượ tr n y ở ản sau:
Bả 2. ỉ d ạ ắ ý ả ỏ
Dun mô ổn địn ột ệ un mô ỉ lệ
n- hexane
n-hexane: EtOAc 9:1 n-hexane: EtOAc 8:2 n-hexane: EtOAc 7:3 - T uố t ện m u: un ị van ll n 1% tron ax t sun ur . - Dun ị t : ị ết lom tan ủa tua s n.
- C ấm un ị t l n ản m n n ốn mao quản 2 l.
- Tr ển k a s k tron n s k đã ão òa un m đến k un m đ đượ k oản 9 m tr n ản m n .
- Lấy ản m n ra sấy k v quan s t tron uồn so UV ướ n s n t n oạ ướ s n 254nm v 365nm oặ p un un ị van ll n 1% tron ax t sun ur v sấy ở 105oC tron 5 p út.
- N n xét về m u s trị Rf ủa vết t u đượ tr n s k đồ ủa un ị t l ị ết lom tan tua s n. C ọn ệ un m k a tr ển l ệ un m o vết t r n ệt v rõ r n .
2.3.8. C ạ s ý ột p ần o dichloromethane
Phần cao CH2Cl2 được hoà tan hoàn toàn vào dung môi CH2Cl2 trong bình cầu, sau khi chấm bản m n để tìm hệ dung môi thích hợp để chạy cột
được thêm silicagel vào quay cất ưới áp suất thấp đến khô hoàn to n để chất g n đều l n s l a l. L m t mịn phần s l a l đã n m u b ng cối và chày sứ để nạp vào cột s c kí.
a.Chu n b c t s c kí
Cho hệ dung môi n–hexan : EtOAc = 95 : 5 vào ca nhựa (lựa chọn dựa vào s c kí lớp m ng).
Lượng silicagel (Merck, 0,04 – 0,063 mm) lấy khoảng 140 gam cho vào ca nhựa trên và khuấy đều để đu i hết bọt khí.
Cho m u bông nh v o đ y ột (để tránh silicagel lọt xuống bình hứng). S l a l được cho vào cột ở dạng sệt.
b. N p mẫu vào c t
M u được nạp vào cột t o p ư n p p k .
M u k đã đượ l m t mịn được cho vào cột s c kí t t thông qua phễu sau k đã k o ột. Chú ý khi cho m u vào cột t o p ư n p p k t lượng dung môi phải v a đủ, không nhiều qu ; lượng m u phải dàn trải đều một lớp m ng trên bề mặt silicagel trong cột; m u phải thấm ướt đều dung môi, không có bọt khí.
c.Ch y c t
Silicagel với hệ dung môi n–hexan – EtO t n ần độ phân cực (hệ un m an đầu n– xan : EtO = 95:5) t u được 40 p n đoạn kí hiệu t
TSD1 đến TSD40.
P n đoạn TSD21 đến TSD24 xuất hiện chất kết tinh với tinh thể hình kim, màu vàng. Tiếp tục hoà tan p n đoạn tạo tinh thể b ng dung môi n- hexan để kết tinh lại ở nhiệt độ phòng. Tiến n ạy GC-MS để x địn ất tron p n đoạn kết t n . C p n đoạn òn lạ ấm ản m n ưa đượ k ả t l m n n ưa đượ n n ứu.
C ƯƠN 3
Ả À Ả N 3.1 Ả C ĐỊN C C C Ỉ Ý
3.1 1 àm l ợn ẩm
B n p ư n p p trọn lượn độ m ủa tua s n k đượ x định v t n ợp ở ản 3.1. Bả 1 ả x ị STT m1 (gam) m2 (gam) W (%) 1 49,785 47,009 5,580 2 48,831 46,292 5,200 Độ m trun n 5,390%
K n ượ l ệu n o đạt độ k tuyệt đố n ưn mỗ ượ l ệu đều đượ quy địn một độ m an to n. Vớ trị độ m trun n ủa tua s n l m 5,390%, m u tua s n k k ả n n ảo quản tron t ờ an m k n ị ư n ữ đượ ất lượn tron qu tr n l m t í n ệm. Độ m t ay đ tùy t uộ v o đ ều k ện k í u t n ưỡn n tua s n s n trưởn v mùa t u oạ .
3.1 2 àm l ợn tro
B n p ư n p p trọn lượn m lượn tro ủa n uy n l ệu đượ x địn v t n ợp ở ản 3.2.
Bả g 3.2 ả x ị
STT m1 (gam) m2 (gam) H (%)
1 47,009 39,015 17,002% 2 46,292 38,288 17,290% H m lượn tro trun n Htb (%) 17,146%
H m lượn tro trun n ủa tua s n l 17 146%. C o t ấy tron tua s n chứa một lượn ất v tron đ t ể mặt một số muố ủa k m loạ n ưn m lượn k m loạ ứa tron tua s n k n lớn.
3.1 3 àm l ợn m loạ
H m lượn một số k m loạ tron tua s n đượ x địn n p ư n p p đo S. Kết quả đượ t n ợp ở ản 3.3.
Bả 3 ả ạ STT m loạ Kết quả (mg/l) àm l ợn o p p (mg/l) 1 As 0,045 1 2 Pb 0,034 2 3 Cd 0,006 1 4 Hg < 0,002 1 C n ứ v o t u u n V ệt Nam (TCVN) o t ự p m (t o quyết địn ủa ộ y tế số 505/BHT – QĐ n y 13 t n 4 n m 1992) về m lượn k m loạ nặn tố đa o p ép tron rau quả sấy k t n n t ấy m lượn k m loạ nặn tron tua s n t ấp n n ều so vớ m lượn tố đa o p ép. Do v y t ể ụn an to n tua s n tron ượ l ệu k n ản ưởn đến sứ k on n ườ .
3.2 Ả ĐỊN Ư N N N
Địn lượn Tan n n p ư n p p Low nt al ta t u đượ kết quả ở ản 3.4.
Bả 4 ả ị ẫ
ần a (ml) b (ml) V1 (ml) V2 (ml) G (gam) X (%)
1 1,2 0,6 10 500 2 8,730 2 1,2 0,6 10 500 2 8,730 3 1,25 0,6 10 500 2 9,458 H m lượn tan n trun n 8,973%
3 3 Ả Đ C – C ĐỊN ÀN ẦN ỌC N C C DỊC C C N C EN
3.3.1. Thành p ần ọ ủ dị ết n-hexane
S k đồ GC ủa ị ết n-hexan t tua s n đượ t ể ện ở n