Từ những quy trình có sẵn và các điều kiện đã tối ưu hóa được ở trên, tôi xây dựng được quy trình sản xuất cao từ quả mướp đắng rừng như sau:
Hình 4.11. Sơ đồ quy trình sản xuất cao từ quả mướp đắng rừng
Quả mướp đắng rừng tươi - Sơ chế - Cân Sấy
- Sấy khô trong 48 giờ
- Nhiệt độ: 45oC
Bột quả khô
Dịch ethanol Quả mướp đắng khô
- Xay nghiền thành bột mịn
-Ngâm dầm trong ethanol 70% trong 35 giờ.
-Lọc (ly tâm)
- Cô quay thu hồi dung môi Cao ethanol
Sản phẩm
Thuyết minh quy trình:
Nguyên liệu:
Quả mướp đắng rừng tươi đem về được sơ chế rửa sạch bằng nước, cho vào chậu nước to ngâm khoảng 15 – 20 phút để làm giảm lực liên kết giữa các tạp chất bám ở trên quả. Để cho ráo nước rồi dùng máy thái thành các lát tròn dày khoảng 1cm.
Nguyên liệu sau khi được chặt thái thành miếng nhỏ cân khoảng 1kg đem đi sấy khô trong 48 giờ, điều kiện nhiệt độ là 45oC. Sau khi sấy xong đem nghiền nhỏ thành dạng bột rồi đem ngâm với ethanol 70% trong 35 giờ.
Chiết xuất:
Sau khi ngâm với ethanol 70% theo tỷ lệ 1/10, đem lọc thu được dịch chiết đầu. Lọc bỏ bã sau đó mang đi ly tâm 12000 vòng/phút. Loại cặn thu hồi dịch chiết. Dịch chiết này được đem đi cô quay thu hồi dung môi ethanol bằng máy cô quay chân không, ở điều kiện 40oC, với áp suất 175 mmHg, trong thời gian 30 phút ta được dịch cao.
Cô đặc:
Dịch cao này được đưa đi cô đặc ở nhiệt độ 65ºC cho đến khi đạt được hàm lượng charantin yêu cầu.
Sản phẩm:
Sản phẩm cao lỏng được cho vào đóng gói trong lọ thủy tinh 100ml (màu nâu đục đóng nắp siu và đã được thanh trùng ở 121ºC trong vòng 15 – 20 phút). Dán nhãn mác sản phẩm. Sau đó bảo quản ở điều kiện nhiệt độ tối ưu (20-30oC).
Cao mướp đắng rừng là sản phẩm có dược tính cao, tốt cho sức khỏe con người, cao có màu nâu đỏ, dạng lỏng hơi sánh, khả năng hòa tan tốt, khi tan trong dung môi cao có màu nâu đỏ.
PHẦN 5
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1. Kết luận
Trong nghiên cứu này, tôi tiến hành tối ưu hóa quá trình chiết xuất charantin từ quả mướp đắng rừng. Quy trình chiết xuất charantin tối ưu như sau:
Mướp đắng sau khi được xử lí làm sạch, thái mỏng (dày khoảng 1cm) rồi đem sấy ở nhiệt độ 45oC trong 48 giờ, độ ẩm đạt từ 7-9% sau khi sấy.
Xay nghiền thành bột sau đó đem ngâm với dung môi ethanol sau một thời gian nhất định đem đi lọc và ly tâm 12000 vòng/phút để có được dung dịch cần.
Điều kiện chiết xuất thích hợp bao gồm:
• Nguyên liệu sử dụng: giống mướp đắng Momordica charantia L. var.
abbreviata Ser được thu hái ở huyện Bắc Mê, Hà Giang; trái nhỏ (đường kính < 5cm), màu xanh đậm, gai nhọn, vị rất đắng làm nguyên liệu cho các thí nghiệm.
• Phương pháp xử lý :
Sử dụng ethanol 70% làm dung môi chiết xuất charantin từ bột quả mướp đắng rừng khô với các điều kiện chiết xuất sau:
– Thời gian chiết 35 giờ.
– Tỷ lệ dung môi/nguyên liệu là 1:10. – Nhiệt chiết là nhiệt độ phòng
Quy trình trên cho ra hàm lượng charantin là 1,69058mg /100ml dịch chiết, cao hơn so với các thí nghiệm nghiên cứu trước.
Xác định được hoạt tính sinh học của dịch chiết xuất từ quả mướp đắng rừng là: Không có hoạt tính kháng khuẩn trên chủng vi sinh vật E.coli.
Bước đầu xây dựng được quy trình sản xuất cao từ quả mướp đắng rừng với hàm lượng charantin trong 100ml cao là: 1,69058mg. Thiết kế sơ bộ được bao bì, nhãn mác (đánh dấu sản phẩm sử nghiệm) cho sản phẩm cao mướp đắng rừng.
Xác định được thành phần các chất có trong dịch cao mướp đắng rừng bằng phương pháp sắc ký khí – khối phổ (GC-MS).
5.2. Kiến nghị
Do thời gian thực hiện đề tài có hạn, nên còn thiếu sót rất nhiều vấn đề, cần nghiên cứu thêm:
Khảo sát thêm các yếu tố đã nghiên cứu và các yếu tố khác ảnh hưởng đến quy trình tách chiết các hợp chất có hoạt tính sinh học.
Nghiên cứu khả năng ứng dụng của charantin trên các sản phẩm thực phẩm dựa trên khả năng làm giảm lượng đường trong máu của chế phẩm trong các điều kiện khác nhau.
Khảo sát thêm các điều kiện trong quy trình sản xuất cao thô và cao tinh mướp đắng rừng.
Khảo sát thêm về tính kháng khuẩn của dịch chiết mướp đắng với các chủng vi khuẩn khác.
Nghiên cứu thêm về quy trình ứng dụng sản xuất các sản phẩm trà hòa tan và cao từ quả mướp đắng rừng.
Sản xuất thành thuốc dạng viên nhộng có hàm lượng charantin phù hợp dành cho người điều trị bệnh tiểu đường type 2 thay thế cho insulin.
TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng việt
1. Bùi Chí Hiếu (1999), Dược lý trị liệu thuốc nam, trang 212.
2. Võ Văn Chi (1999), Từ Điển Cây Thuốc Việt Nam, Nhà xuất bản Y học, trang 795. 3. Hải Ân (2002), Món ăn vị thuốc, Nhà xuất bản Thuận Hóa, trang 161 – 162.
4. Vương Thừa Ân (2002), Phòng và chữa bệnh bằng món ăn hằng ngày, Nhà xuất bản Thuận Hóa, trang 35.
5. Trần Nam Hưng (1998), Y học dân gian trị bệnh tại nhà, Nhà xuất bản Tổng hợp Đồng Tháp, trang 104 – 105.
6. Nguyễn Minh Đức, Trần Thị Vy Cầm (2002), “Khảo sát hóa học các chất có tác dụng sinh học từ hạt mướp đắng Momordica charantia L.”, Tạp chí Y Học TP. Hồ Chí Minh, tập 6, Phụ bản của số 1.
7. Tạ Duy Chân (1999), Những phương thuốc hay “rau cỏ trị bệnh”, Nhà xuất bản Nghệ An, trang 293 – 297.
8. Tạ Duy Chân (1999), Những phương thuốc hay “chữa bệnh bằng hoa”, Nhà xuất bản Nghệ An, trang 161 – 255.
9. Trần Bá Cừ (1999), Rau-hoa-quả-củ làm thuốc, Nhà xuất bản Khoa Học và Kỹ Thuật, Hà Nội, trang 447.
10. Đỗ Huy Ích, Đặng Quang Chung, Bùi Xuân Chương, Nguyễn Thượng Dong, Đỗ Trung Đàm, Phạm Văn Hiền, Vũ Ngọc Lộ, Phạm Duy Mai, Phạm Kim Mãn, Đoàn Thị Thu, Nguyễn Tập (2003), Viện Dược Liệu, Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam, tập II, Nhà xuất bản Khoa Học và Kĩ Thuật, trang 335.
11. Đỗ Tất Lợi (2004), Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam, Nhà xuất bản Khoa Học và Kĩ Thuật, Hà Nội, trang 335 – 337.
12. Thi Xuân Mi (2002), Thảo dược chữa bệnh (Nguyễn Thanh Tùng dịch, BS Ngọc Tám hiệu đính), Nhà xuất bản Thanh Hóa, trang 62.
13. Nguyễn Kim Phi Phụng (2007), Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, Nhà xuất bản Đại Học Quốc Gia TP. Hồ Chí Minh.
14. Phùng Văn Trung, Nguyễn Ngọc Hạnh, Võ Hồng Thái (2004), “Phân lập và nhận dạng cấu trúc các hợp chất cucurbitacin glycoside từ hạt Mướp đắng Momordica charantia L.”, Tạp chí Dược học, số 12, trang 6 – 9.
15. Đỗ Huy Bích, Đặng Xuân Chung (2004), Cây thuốc và động vật làm thuốc ở Việt Nam, NXB KHKT, tập 1, 734- 735.
16. Phạm Hoàng Lộ (1999), Cây cỏ Việt Nam, quyển I, Nhà xuất bản trẻ, trang 568.
17. Phạm Văn Thanh, Phạm Xuân Mãn, Đoàn Thị Nhu, Nguyễn Thượng Dong (2001), “Nghiên cứu thành phần hóa học của cây mướp đắng và chứng minh tác dụng hạ đường máu của nhóm glycosid trên thỏ gây đái tháo đường”, Tạp chí Dược liệu, tập 6, số 2+3, trang 48 – 54.
18. Phùng Đan Thùy (2014), “Khảo sát về mặt thực vật học, hoạt tính ức chế enzym α- amylase và α-glucosidase in vitro của cao chiết toàn phần từ mướp đắng rừng
(momordica charantia L. var. abbreviata Ser.), tầm bóp (physalis angulata l.), lô hội (aloe vera l.) (burm.f). Trang 32, 53-56, 60.
19.Trần Anh Vũ, Huỳnh Thanh Hậu (2017), “Nghiên cứu điều chế cao giàu hợp chất saponin từ quả mướp đắng (Momordica charantia L. var. abbreviata Ser.)”. Tạp chí Dược học, tập 57, số 7
Tiếng Anh
20. Mayumi Yasuda, Masayo Iwamoto, Hikaru Okabe And Tasuo Yamauchi (1984), “Structures of Momordicines I, II, III, the Bitter Principles in the Leaves and Vines of
Momordica charantia L.”, Chem. Pharm. Bull., Vol 32. No 5, pp 2044 – 2047.
21. Francesca Cateni, Jelena Zilic, Marina Zacchaigna (2008), “Isolation and Structure Elucidation of Cerebrosides from Euphorbia Platyphyllos L.”, Sci Pharm.; 76: 451–469. 22. Ekramulv Haque M., BardrulvAlam M. and Sarowar Hossain M. (2011), “The
efficacy of cucurbitane type triterpenoids, glycosides, and phenolic compounds ioslated from Momordica charantia: a review”, International Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, 2(5), 1135-1146.
23. Chi-I Chang, Chiy-Rong Chen, Yun-Wen Liao, Wen-Ling Shih (2010), “Octanorcucurbitane triterpenoids protect against tert-butyl hydroperoxide-induce hepatotoxicity from the Stems of Momordica charantia”, Chem. Pharm. Bull.58(2), 225-229.
24. Jie- Quing-Liu, Jian-Chao-Chen, Cui-Fang Wang and Ming-hua Qiu (2009) “New cucurbitane triterpenoids and steroidal glycoside form Momordica charantia”, Molecules, 14, 4804- 4813.
25. Majekodunmi. O. Fatope, Yoshio Takeda, Hyroyasu Yamashita (1990), “New Cucurbitane Triterpenoids from Momordica charantia”, Journal of Natural Products, Vol 53, No. 6, pp 1491 – 1497.
26. Hikaru Okabe, Yumi Miyahara, Tasuo Yamauchi, Kazumoto Miyahara And Toshio Kawasaki (1982), “Studies on the constituents of Momordica charantia L. III. Characterization of New Cucurbitacin Glycosides of the Immature Fruits. Structures of Momordicosides G, F1, F2 and I”, Chem. Pharm. Bull. Vol 30 (11), pp 3977 – 3986. 27. Toshiyuki Murakami, Seikou Nakamura (2006), “Structures of new cucurbitane-type
triterpenes and glycosides, karavilagenins and karavilosides, from the dried fruit of
Momordica charantia L. in Sri Lanka”, Chem. Pharm. Bull., 54(11), 1545-1550.
28. M. M. Lotlikar, M. R. Rajarama Rao (1966), “Pharmacology of a Hypoglycaemic Principles Isolated from the Fruits of Momordica charantia Linn”, The Indian Journal of Pharmacy, Vol 28, No. 5, pp 129 – 133.
29. Hikaru Okabe, Yumi Miyahara, Tasuo Yamauchi, Kazumoto Miyahara And Toshio Kawasaki (1980), “Studies on the constituents of Momordica charantia L. I. Isolation and characterization of Momordicosides A and B, Glycosides of a Pentahydroxy-cucurbitane triterpene”, Chem. Pharm. Bull. Vol 28 (9), pp 2753 –2762.
30. Hikaru Okabe, Yumi Miyahara, Tasuo Yamauchi, Kazumoto Miyahara And Toshio Kawasaki (1982), “Studies on the constituents of Momordica charantia L. IV. Characterization of New Cucurbitacin Glycosides of the Immature Fruits. Structures of the Bitter Glycosides, Momordicosides K and L”, Chem. Pharm. Bull. Vol 30 (12), pp 4334 – 4340.
31. Nguyen Xuan Nhiem, Pham Van Kiem, Chau Van Minh, Ninh Khac Ban, Nguyen Xuan Cuong, Nguyen Huu Tung, Le Minh Ha, Đo Thi Ha, Bui Huu Tai, Tran Hong Quang, Tran Minh Ngoc, Young-In Kwon, Hae-Dong Jang, and Young Ho Kim (2010), “α-Glycosidase inhibition properties of cucurbitane-type triterpene glycosides from the fruit of Momordica charantia”, Chem. Pharm. Bull., 58(5), 720- 724.
32. Phuong Mai Mai, Ngoc Hanh Nguyen, Thi Hanh Nguyen (2003), “Hypoglycemic activity of Momordica charantia L. fruit extracts in streptozotoxin – induce diabetic mice”. Proceedings of the thirth Indochina Conference on Pharmaceutical Sciences, pp 20 – 23.
33. Toshiyuki Murakami, Akihito Emoto, Hisashi Mastsuda, and Masayuki Yoshikawa (2001), “Medicinal foodstuffs XXI. Structures of new cucurbitane-type triterpen glycoside, Goyaglycosides-a, -b, -c, -d, -e, -f, -g, and –h, and New oleanane-type triterpene saponins, Goyasaponins I, II, and III, from the Fresh Fruit of Japanese
Momordica charantia L.”, Chem Pharm Bull., Vol 49(1), pp 54-63.
34. Kavishankar GB, Lakshmidevi N, Mahadeva SM, Prakash HS, Niranjana SR.
Diabetes and medicinal plants-A review(2011). International Journal of Pharmacy and Biomedical Sciences; 2(3):65-80.
35. Miura T., Itoh C., Iwamoto N., Kato M., Kawai M., Park SR., Suzuki I. (2001), “Hypoglycemic activity of the fruit of the Momordica charantia in type 2 diabetic mice”, J. Nutr. Sci. Vitaminol(Tokyo), 47(5), pp. 340-344.
36. Baby Joseph, D Jini (2013), “Antidiabetic effects of Momordica charantia (bitter melon) and its medicinal potency”, Asian Pac J Trop Dis, 3(2), pp. 93-102.
37. Xiao-Quing Yuan, Xiao-Hong Gu, Jian Tang (2008), “Optimization of the production of Momordica charantia L. var. abbreviate Ser. protein hydrolysates with hypoglycemic effect Alcalase”, Food Chemistry, 111(2), pp. 340-344.
38. Xiao-qing Yuan, Xiao-Hong gu, Jian Tang, Joseph Wasswa (2008), “Hypoglycemic effect of semipurified peptides from Momordica charantia L.var. abbreviata Ser. in alloxan-induced diabetic mice”, Journal of Food Biochemistry, 32(1), pp. 107-121
39. Celia Garau, Cummings E, David A. Phoenix, Jaipaul Singh (2003), “Beneficial effect and mechanism of action of Momordica charantia in the treatment of diabetes mellitus: a mini review”. Int J Diabetes & Metabolism, 11, pp. 46-55.
40. Tan M., Ye Ji., Turner N. (2008), “Antidiabetic activities of triterpeneoids isolated from bitter melon associated with activation of the AMPK pathway”, Chemistry & Biology, 15(3), pp. 263-273
PHỤ LỤC