dược liệu và sản phẩm từ dược liệu khi nguồn cung cấp CĐC chưa đầy đủ.
4.5 Tiêu chuẩn kiểm nghiệm TNHC
- Chỉ tiêu định tính hai nhóm hoạt chất chính alcaloid hoặc flavonoid bằng phương pháp dấu vân tay được.
- Chỉ tiêu định lượng hai nhóm hoạt chất chính alcaloid hoặc flavonoid bằng hương pháp HPLC đã được xây dựng và thẩm định đạt các yêu cầu của một quy trình phân tích định lượng.
Đây là ưu điểm của tiêu chuẩn kiểm nghiệm vì HPLC là phương pháp có độ chính xác cao, được khuyến khích ứng phương pháp có độ chính xác cao, được khuyến khích ứng dụng vào kiểm nghiệm các mẫu đa thành phần như mẫu sinh học hay mẫu từ dược liệu. Phương pháp dấu vân tay với các chi tiết đặc trưng cho thành phần hoạt chất của TNHC sẽ góp phần đánh giá chặt chẽ hơn chất lượng của dược liệu này.
Luận án đã hoàn thành các nội dung nghiên cứu và đạt tất cả các mục tiêu đề ra ban đầu, tóm tắt các kết quả đạt được như sau:
1. Chiết xuất hoạt chất từ TNHC: xây dựng được 2 quy trình chiết xuất cao toàn phần từ TNHC. xuất cao toàn phần từ TNHC.
- Quy trình 1 là quy trình chiết cao cồn, PĐ alcaloid hoặc flavonoid bằng phương pháp ngấm kiệt với cồn 70%.
- Quy trình 2 có sự kết hợp 2 phương pháp SFE và ngấm kiệt để chiết cao ban đầu với mục đích phân lập CĐC hoặc khảo sát thành phần hóa học.
2. Phân lập hợp chất tinh khiết: 17 hợp chất đã được phân lập.- Trong số này có: 1 alcaloid 6-ethoxyundulatin là hợp chất mới. Và - Trong số này có: 1 alcaloid 6-ethoxyundulatin là hợp chất mới. Và có 7 chất lần đầu tiên được phân lập từ TNHC: 6-ethoxybuphanidrin, 6-hydroxypowellin, flazin, kaempferol, isoquercitrin, esuletin, p- hydroxybenzoic.
Các hợp chất còn lại đã được công bố trước đây trong các bộ phận khác nhau của TNHC.
3. Thiết lập chất đối chiếu:
- 6 hợp chất có nguồn gốc từ cây TNHC đạt yêu cầu CĐC hóa học thứ cấp với bộ dữ liệu gồm điểm chảy, phổ UV, IR, MS, NMR. - Gồm 4 alcaloid: crinamidin, 6-hydroxycrinamidin, lycorin, hippadin và 2 flavonoid: astragalin và isoquercitrin.
4. Quy trình định tính - định lượng alcaloid hoặc flavonoid:
- Luận án đã xây dựng 4 quy trình định lượng alcaloid hoặc flavonoid trong lá TNHC. Trong đó:
- 2 quy trình phân tích đồng thời 6 alcaloid bằng HPLC/ CE - 2 quy trình phân tích đồng thời 2 flavonoid bằng HPLC/ CE.
- Phương pháp DVT–SKLM và DVT–HPLC: có thể sử dụng đề phân biệt chống nhầm lẫn dược liệu khi nguồn cung CĐC chưa ổn định.
5. Các chỉ tiêu cần thiết để xây dựng tiêu chuẩn kiểm bột lá TNHC: TNHC:
- Hai chỉ tiêu cần thiết của một tiêu chuẩn kiểm nghiệm dược liệu là chỉ tiêu định tính bằng phương pháp dấu vân tay và chỉ tiêu định lượng bằng phương pháp HPLC với các CĐC đánh dấu đặc trưng cho TNHC.
KIẾN NGHỊ
Các kết quả nghiên cứu đạt được là cơ sở khoa học để thực hiện các nội dung nghiên cứu sâu hơn cho dược liệu TNHC:
1. Từ kết quả các chất đối chiếu đã được thiết lập, các quy trình phân tích đã được thẩm định và các tiêu chuẩn kiểm nghiệm đã được báo cáo trong nội dung của luận án là những cơ sở khoa học để tiến hành xây dựng “Chuyên luận dược liệu TNHC” cho Dược điển Việt Nam trong lần xuất bản sắp tới.
2. Khảo sát các yếu tố ảnh hưởng lên hiệu quả chiết xuất bằng phương pháp SFE trên mẫu bột lá TNHC. Từ đó tiến hành các thử nghiệm tối ưu hóa các điều kiện chiết để cho hiệu quả chiết xuất cao nhất.
3. Khảo sát tác dụng sinh học in vitro và in vivo các hợp chất tinh khiết đã được phân lập để khẳng định thêm công dụng của TNHC ngoài các công dụng kháng khối u, tăng cường miễn dịch v.v… đã được công bố trước đây.