Các nhóm gen kháng kháng sinh có trong trình tự de novo của bốn chủng nghiên cứuđược xác định từ kết quả chú giải hệ genvà các chương trình thuật toán Kmer-
Search, BLAT trong hệ thống phân tích PATRIC. Kết quả tóm tắt các gen kháng và kiểu hìnhkháng kháng sinh được trình bày trong Bảng 3.23. Trong tổng số 44 kiểu hình được tạo ra từ kết quả kháng sinh đồ. Có 38 kiểu hình kháng có biểu hiện của các gen kháng. Có 06 kiểu hình nhạy với kháng sinh nhưng đều có biểu hiện của gen kháng. Như vậy, sự phù hợp giữa kiểu gen và kiểu hình là 86,36% (38/44) và không
phù hợp là 13,64% (06/44).Tỷ lệ kiểu hình kháng trùng khớp với kiểu gen của chúng tôi có phần cao hơn so với kết quả của Nguyễn Thanh Việt và ctv (2018), cho biết tỷ lệ phù hợp giữa kiểu gen với kiểu hình ở các chủng Salmonella là 71,4%. Kết quả
nghiên cứu của chúng tôi thấp hơn so với các kết quả của một số tác giả khác như
McDermott và ctv (2016) (99%) và Zankari và ctv (2013) (99,74%). Mặc dù có sự
phù hợp cao giữa kiểu gen và kiểu hình, tuy nhiên còn một tỷ lệ lớn (13,64%) kiểu gen và kiểu hình không phùhợp nhau. Trong đó, đáng chú ýchủng SA11/19 3497 có
88
hiện diện kiểu gen kháng SXT (sul1, sul2, folA, dhfr14) nhưng kiểu hình lạinhạy với kháng sinh này. Tiếp theo GN thuộc nhóm aminoglycoside có kiểu hình nhạy nhưng lại có biểu hiện các gen (aac(6')-Iaa, aac6-Iaa, aph(6)-Id, aph(3'')-Ib) kháng kháng
sinh nhóm này. Sự không phù hợp giữa kiểu gen và kiểu hình trong luận án này có
thể là do có nhiều cơ chế cùng tham gia kháng một loại kháng sinh. Điều này làm vi khuẩn vẫn còn khả năng nhạy với một vài kháng sinh (Andres và ctv, 2013). Tuy
nhiên, để giải thích vấn đề này, nhận định của chúng tôi thiên về hiện tượng ức chế gen sau phiên mã dẫn đến các gen kháng rơi vào trạng thái “câm lặng”. Cho đến ngày nay, các nhà khoa vẫn tiếp tục tìm hiểu về hiện tượng câm gen trên nhiều đối tượng khác nhau nhằm tìm hiểu và làm sáng tỏ một cách chi tiết cơ chế của RNAi. Kết quả nghiên này cung cấp thêm thông tin để hiểu rõ bản chất của cơ chế này nhằm ứng dụng kỹ thuật câm gen vào việcxác định chức năng kháng của các gen trong các bộ di truyền của sinh vật.
Các gen kháng kháng sinh có thể được truyền ngang giữa các vi khuẩn thông qua biến nạp, tải nạp và tiếp hợp. Một số lượng lớn các gen còn liên quan đến điều hòa biểu hiện gen. Trong một số trường hợp, sự biểu hiện của gen kháng có thể không
liên quan đến kiểu hình kháng (Zou và ctv, 2009). Mặt khác, sự không phùhợp giữa kiểu gen và kiểu hình có thể là do các cơ chế kháng mớichưa được phát hiện. Việc tìm ra cơ chế kháng mới ở vi khuẩn còn nhiều hạn chế vì hầu hết các nghiên cứu đều tập trung vàonuôi cấy vi khuẩn và tìm các gen kháng đã biết trước thông qua các kỹ thuật sinh học phân tử như PCR. Cách tiếp cận này làm cho chúng ta hiểu biết chưa đầy đủ về hệ gen kháng kháng sinh ở vi khuẩn (Martiny và ctv, 2011).
Kết quả của chúng tôi cho thấysự phùhợp giữa kiểu gen và kiểu hình của các kháng sinh thuộc nhóm phenicol, aminoglycoside và tetracycline có tỷ lệ cao nhất. Đối với CAZ thuộc nhóm cephalosporin thế hệ thứ 3 thường được chỉ định dùng trong những bệnh nhiễm khuẩn nặng mà kháng sinh thôngthường không tác dụng thì chỉ có SA11/19 3497 còn nhạy với chúng và có kiểu hình khớp với kiểu gen. Tuy nhiên, ba serovar còn lại SA12/19 1600, SA07/20 1066, SA07/20 1067 đều kháng kháng sinh này và có kiểu gen tương ứng khi giải trình tự. Điều này cho thấy việc
89
giám sát tình hình sử dụng loại kháng sinh này là rất cần thiết và tuy cùng một serovar nhưng nguồn phân lập khác nhau có thể dẫn đến tính kháng về số lượng cũng như chủng loại kháng sinh là khác nhau. Hơn thế nữa, kết quả giải trình tự hệ gen cũng có sự hiện diện hầu hết các gen có khả năng mã hóa kháng lại các loại kháng sinh của các nhóm này với tỷ lệ tương đồng cao. Tuy nhiên, sự có mặt của gen kháng không
có nghĩa là chúng sẽ biểu hiện, hoặc biểu hiện đủ mạnh đểtạo ra kiểu hình kháng. Sự biểu hiện của các gen kháng ở kiểu hình nhạy kháng sinh từ kết quảnày là một minh chứng. Giải trình tự thế hệ mới còn có một ưu điểm: đây là phương pháp khả thi cho mục đích giám sát các gen kháng kháng sinh ở vi khuẩn (Zankari và ctv, 2013).
90
Bảng 3.23. Số lượng các gen và kiểu hình kháng kháng sinh của Salmonella
Nhóm Kháng sinh
Ký hiệu (Kiểu hình/nhóm gen kháng kháng sinh)
SA11/19 3497 SA12/19 1600 SA07/20 1066 SA07/20 1067
β-lactam
AMC (R)
blaTEM-1
blaTEM family
(S) blaCTX-M-55 blaCTX-M family (S) blaCTX-M-55 blaCTX-M family (S) blaCTX-M-55 blaCTX-M family AMP (R) blaTEM-1
blaTEM family
(R) blaCTX-M-55 blaCTX-M family (R) blaCTX-M-55 blaCTX-M family (R) blaCTX-M-55 blaCTX-M family CAZ (S) blaTEM-1
blaTEM family
(R) blaCTX-M-55 blaCTX-M family (R) blaCTX-M-55 blaCTX-M family (R) blaCTX-M-55 blaCTX-M family Phenicol C (R) floR family (R)
cmlA family; floR family
(R)
cmlA family; floR family
(R)
cmlA family; floR family
Quinolone NA
(R)
gyrA; gyrB; parC; parE
(R)
gyrA; gyrB; parC; parE; mdtK/norM (MATE family)
(R)
gyrA; gyrB; parC; parE; mdtK/norM (MATE family)
(R)
gyrA; gyrB; parC; parE; mdtK/norM (MATE family)
91
gyrA, gyrB, parC, parE gyrA, gyrB, parC, parE; mdtK/norM (MATE family)
gyrA, gyrB, parC, parE; mdtK/norM (MATE family)
gyrA, gyrB, parC, parE; mdtK/norM (MATE family)
OFX (R)
gyrA, gyrB, parC, parE
(R)
gyrA, gyrB, parC, parE; mdtK/norM (MATE family)
(R)
gyrA, gyrB, parC, parE; mdtK/norM (MATE family)
(R)
gyrA, gyrB, parC, parE; mdtK/norM (MATE family) Aminoglycoside GM (S) aac(3)-I; aac(3)-Id; aac(6')-Iaa; aac(6')- Ic,f,g,h,j,k,l,r-z; aph(3'')-I; aph(3'')-Ib; aph(6)-Id; aph(6)-Ic/aph(6)-Id; aph(3'')-Ib; aadA7 (aadA family); kdpE; acrD (AcrAD-TolC) (RND type) (R) aac(3)-I; aac(3)-Id; ac(3)-IIa; aac(3)- II,III,IV,VI,VIII,IX,X; aac(6')-Iaa; aac(6')- Ic,f,g,h,j,k,l,r-z; aph(3')- I; aph(3'')-I; aph(3'')-Ia; aadA7 (aadA family); acrD (AcrAD-TolC) (RND type) (R) aac(3)-I; aac(3)-Id; aac(3)-IIa; AAC(3)- II,III,IV,VI,VIII,IX,X; aac(6')-Iaa; aac(6')- Ic,f,g,h,j,k,l,r-z; aph(3')- I; aph(3')-Ia; aadA7 (aadA family); acrD (AcrAD-TolC) (RND type) (R) aac(3)-I; aac(3)-Id; aac(3)-IIa; aac(3)- II,III,IV,VI,VIII,IX,X; aac(6')-Iaa; aac(6')- Ic,f,g,h,j,k,l,r-z; aph(3')- I; aph(3')-Ia; aadA7 (aadA family); acrD (AcrAD-TolC) (RND type)
92 aac(3)-I; aac(3)-Id; aac(6')-Iaa; aac(6')- Ic,f,g,h,j,k,l,r-z; aph(3'')-I; aph(3'')-Ib; aph(6)-Id; aph(6)-Ic/aph(6)-Id; aph(3'')-Ib; aadA7 (aadA family); kdpE; acrD (AcrAD-TolC (RND type) aac(3)-I; aac(3)-Id; ac(3)-IIa; aac(3)- II,III,IV,VI,VIII,IX,X; aac(6')-Iaa; aac(6')- Ic,f,g,h,j,k,l,r-z; aph(3')- I; aph(3'')-I; aph(3'')-Ia; aadA7 (aadA family); acrD (AcrAD-TolC) (RND type) aac(3)-I; aac(3)-Id; aac(3)-IIa; AAC(3)- II,III,IV,VI,VIII,IX,X; aac(6')-Iaa; aac(6')- Ic,f,g,h,j,k,l,r-z; aph(3')- I; aph(3')-Ia; aadA7 (aadA family); acrD (AcrAD-TolC) (RND type) aac(3)-I; aac(3)-Id; aac(3)-IIa; aac(3)- II,III,IV,VI,VIII,IX,X; aac(6')-Iaa; aac(6')- Ic,f,g,h,j,k,l,r-z; aph(3')- I; aph(3')-Ia; aadA7 (aadA family); acrD (AcrAD-TolC) (RND type) Tetracycline TE (R) tetC, tetA (R) tetC, tetA (R)
tetC, tetA, tetR
(R)
tetC, tetA, tetR
Sulfonamide/
trimethoprim SXT (S)
sul1, sul2, folA, dhfr14
(R)
sul1, sul2, folA, dhfrA14
(R)
sul1, sul2, folA, dhfrA14
(R)
sul1, sul2, folA, dhfrA14
Khác mph(A) family; mrx; arr-2; uhpT; glpT; lnu(F)/lnu(G); linG; pmrF; bacA; SugE, BcrC, MarB; MarR;
93