bổ sung với mạch DNA khuôn
dNTP: dTTP, dATP, dGTP và dCTP
Dung dịch ñệm chứa phần muối và pH thích hợp
GV. TS. Voõ Minh Trí Taq polymerase - - - - 5’-ATCGGCTACGGCCATGAGACTCCC///TTCCAAATCATAGCACTAGCTA-3’ 3’-TAGCCGATGCCGGTACTCTGAGGG///AAGGTTTAGTATCGTGATCGAT-5’ 5’-ATCGGCTACGGCCATGAGACTCCC///TTCCAAATCATAGCACTAGCTA-3’ 3’-TAGCCGATGCCGGTACTCTGAGGG///AAGGTTTAGTATCGTGATCGAT-5’ 5’-ATCGGC-3’ 3’-TGATCGAT-5’ 161 3’-TAGCCGATGCCGGTACTCTGAGGG///AAGGTTTAGTATCGTGATCGAT-5’ - - - - 5’-ATCGGCTACGGCCATGAGACTCCC///TTCCAAATCATAGCACTAGCTAA-3’ 3’-ATAGCCGATGCCGGTACTCTGAGGG///AAGGTTTAGTATCGTGATCGAT-5’ - - - - 5’-ATCGGCTACGGCCATGAGACTCCC///TTCCAAATCATAGCACTAGCTAA-3’ 3’-ATAGCCGATGCCGGTACTCTGAGGG///AAGGTTTAGTATCGTGATCGAT-5’
Pfu polymerase
Là DNA polymerase chịu nhiệt, nhiệt ñộ hoạt ñộng thích hợp ở 70-80oC
Chiết tách từ vi khuẩn cổ Pyrococcus furiosus sống ở
suối nước nóng (nhiệt ñộ thích hợp 100oC )
Tốc ñộ tổng hợp chuỗi oligonucleotide khoảng 500-1000nu/phút
162
ðược sử dụng ñể tổng hợp ñoạn DNA in vitro
Pfu polymerase sẽ gắn các dNTP vào ñầu 3’OH
của nucleotide nằm trong oligonucleotide dựa theo mạch khuôn
GV. TS. Voõ Minh Trí
Pfu polymerase
Phản ứng ñược xúc tác bởi Pfu polymerase phải có
ñầy ñủ các thành phần sau (cũng tương tự
Taq polymerase):
Pfu polymerase không gắn nucleotide vào ñầu 3’OH
ðộ chính xác cao (10-6 errors/bp)
163
Taq polymerase):