3.5.1. Ảnh hưởng của loại giá thể
Cây con hoàn chỉnh có chiều cao 4 - 5 cm, rễ mập, 5 - 6 rễ/cây huấn luyện dƣới ánh sáng tán xạ khoảng 1 - 2 tuần trƣớc khi cấy cây ra vƣờn ƣơm. Sau đó cây con đƣợc rửa sạch thạch bám ở rễ và cấy ra các loại giá thể khác nhau. Các giá thể đƣợc ngâm trong nƣớc 2 ngày. Kết quả thu đƣợc sau 8 tuần ra ngôi đƣợc thể hiện ở bảng 3.8.
Bảng 3.8. Ảnh hƣởng của loại giá thể trồng đến khả năng sống và sinh trƣởng của cây mô giai đoạn vƣờn ƣơm (sau 8 tuần ra ngôi)
Tên CT Loại giá thể Số mẫu cấy (cây) Tỷ lệ cây sống (%) Chất lƣợng cây
CT1 100% Xơ dừa 90 76,67 Cây yếu, rễ mới bám giá thể
CT2 50% Xơ dừa +
50% vỏ thông 90 90,00
Cây khỏe, thân cứng, rễ bám giá thể tốt
CT3 100% Dớn
trắng 90 93,33
Cây khỏe, thân cứng, xuất hiện lá mới, rễ bám giá thể tốt
Sig 0,0001
Qua bảng số liệu cho thấy, giá thể ra ngôi cây mô lan Trầm tím có ảnh hƣởng rõ rệt đến tỉ lệ sống của cây con ở giai đoạn vƣờn ƣơm. Giá thể xơ dừa cho tỷ lệ cây sống thấp nhất (chỉ đạt 76,67 %), cây yếu, rễ mới bám vào giá thể. Giá thể trộn 50% Xơ dừa + 50% vỏ thông và 100% Dớn trắng cho hiệu quả tốt hơn với trên 90% cây sống. Tuy nhiên, trên giá thể dớn trắng cây khỏe, thân cứng, rễ bám tốt vào giá thể và đặc biệt xuất hiện lá mới. Nhƣ vậy, với giá thể là dớn trắng đủ mềm và đủ xốp để cây có thể giữ ẩm tốt, phù hợp trong việc ra ngôi cây mô Lan Trầm tím. Kết quả này cũng tƣơng đƣơng với kết quả Phan Xuân Huyên và cộng sự (2015) sử dụng giá thể dớn trắng để ra cây mô loài Miltonia sp. với 86% cây sống, 5,60 rễ/cây và chiều dài rễ đạt 2,70 cm.
Theo kết quả nghiên cứu của một số loài cây khác: Stefanello và cộng sự (2009) trồng cây mô loài Miltonia flavescens trên giá thể dớn, vụn xơ dừa, vỏ thông sau 30 ngày chăm sóc tỉ lệ sống của cây đạt 80 - 100%. Yamamoto
và và cộng sự (2009), Yamakami và cộng sự (2009) sử dụng giá thể dớn, vụn xơ dừa, vỏ thông, trấu, than củi, rêu nƣớc, vụn bã mía đƣờng khi chuyển cây con loài Miltonia sp. ra giai đoạn vƣờn ƣơm. Các sợi dớn rất bền chắc, khó bị
phân hủy nên khi sử dụng rất ít khi phải thay giá thể trồng, dớn có khả năng giữ nƣớc và đủ độ thông thoáng, giúp cây giữ ẩm tốt và hấp thụ tối đa dinh dƣỡng trồng cây.
Vỏ thông giữ chất muối có sẵn trong nƣớc và phân bón dễ bị mục nát sau một thời gian trồng, gây úng nƣớc, thối rễ và cũng là môi trƣờng thích hợp cho vi khuẩn và nấm gây bệnh. Hiện nay, chƣa có công trình nào nghiên cứu về lan Trầm tím, thí nghiệm trên chúng tôi đã nghiên cứu và cho kết quả khá cao, do đó chúng tôi chọn giá thể tốt nhất là dớn trắng để cho cây ra vƣờn ƣơm.
(a) (b) (c)
Hình 3.8. Cây mô lan Trầm tím trên các giá thể ra cây khác nhau
100% xơ dừa (a); 50% xơ dừa+ 50% vỏ thông(b); 100% dớn trắng (c)
3.5.2. Ảnh hưởng của loại phân bón
Phân bón là một yếu tố có ảnh hƣởng rất lớn tới sự sinh trƣởng và phát triển của Lan Trầm tím. Khi cây đủ dinh dƣỡng cây sẽ tƣơi tốt, ra nhiều hoa, hoa đẹp, hoa to, bền và ngƣợc lại khi thiếu chất dinh dƣỡng, lan sẽ còi cọc, kém phát triển và ít hoa. Đặc biệt ở giai đoạn đầu chuyển tiếp từ môi trƣờng nhân tạo trong phòng thí nghiệm ra bên ngoài môi trƣờng nhà lƣới, để cây con có thể dễ dàng thích nghi thì phân bón đóng một vai trò rất quan trọng, nó không chỉ giúp cây quen dần môi trƣờng mới mà nó còn là tiền đề giúp cây sinh trƣởng và phát triển tốt hơn ở những giai đoạn tiếp theo.
Hiện nay, cùng với sự phát triển của ngành lan thì trên thị trƣờng cũng có rất nhiều các loại phân bón chuyên dụng cho những loài cây này nhƣ Phân bón NPK 501, Vitamin B1, Orchid 1.... Tuy nhiên mỗi loại phân bón này có loại và hàm lƣợng các chất dinh dƣỡng chứa trong đó là khác nhau. Do đó, tùy loài lan ở các giai đoạn sinh trƣởng và phát triển khác nhau có thể có yêu cầu về phân bón là không giống nhau.
Đối với lan Trầm tím invitro, phân bón phải đủ các chất dinh dƣỡng đa lƣợng, trung lƣợng,vi lƣợng với thành phần và tỷ lệ phù hợp. Để tìm ra loại phân bón giúp cây phát triển tốt hơn,thí nghiệm tiến hành 4 công thức: Công thức đối chứng không bón phân, chế độ tƣới nƣớc 1 –2 lần/tuần, tùy theo mùa để điều chỉnh lƣợng nƣớc. Phân NPK đầu trâu 501và phân hữu cơ sinh học Orichid 1 dùng 0,5 – 1g/l nƣớc vitamin B1 bổ sung ở nồng độ 1 - 2m/l nƣớc, bón luân phiên 1 - 2 lần/tuần. Kết quả đƣợc thể hiện ở bảng 3.9.
Bảng 3.9. Ảnh hƣởng của loại phân bón đến khả năng sống và sinh trƣởng của cây con trong giai đoạn vƣờn ƣơm (sau 8 tuần bón phân)
CT TN Loại phân bón Tổng số mẫu (cây) Mẫu ra lá Mẫu ra rễ Chiều dài rễ (cm)
Đặc điểm của cây con Số mẫu ra lá mới (lá) Tỷ lệ mẫu ra lá mới (%) Số mẫu ra rễ mới (cây) Tỷ lệ mẫu ra rễ mới (%) ĐC Không bón 90 67 74,44 70 77,78 3,47
Thân cây gầy, lá bé, rễ ngắn K1 NPK đầu trâu 501 90 85 94,44 87 96,67 4,56 Thân cây mập, lá xanh và to, rễ phát triển dài K2 Vitamin B1 90 80 88,89 83 92,22 4,32 Thân cây mập, lá xanh, bé, rễ phát triển bình thừơng K3 Orchid 1 90 76 85,56 79 87,78 4,15 Thân cây mập, lá xanh bé, rễ phát triển bình thƣờng
Biểu đồ 3.11. Ảnh hƣởng của loại phân bón đến tỉ lệ cây ra lá mới và rễ mới trong giai đoạn vƣờn ƣơm.
Qua kết quả phân tích phƣơng sai một nhân tố cho thấy (sig<0,05) loại phân bón khác nhau thì tỷ lệ mẫu ra lá và tỷ lệ mẫu ra rễ cũng khác nhau. Công thức đối chứng không bón phân thì tỷ lệ mẫu ra lá và ra rễ khá thấp và chất lƣợng cây kém, tỷ lệ chồi ra lá và ra rễ chỉ đạt 74,44% và 38%, chiều dài rễ chỉ 3,47 cm, cây mảnh, bé, rễ ngắn, kém phát triển.
Khi sử dụng phân bón NPK đầu trâu 501 thì cho tỷ lệ mẫu ra lá và tỷ lệ mẫu ra rễ cao nhất là 94,44 % và 96,67%, chiều dài rễ đạt 4,56 cm chất lƣợng cây tốt, thân mập, lá cây xanh đậm và to, rễ phát triển dài và cứng. Ở công thức K2 và K3 cho kết quả tỷ lệ cây ra lá và ra rễ đều giảm, thân cây mập, lá xanh, bé, rễ phát triển kém. Qua kết quả trên cho ta thấy, Lan Trầm tím sử dụng phân bón NPK đầu trâu 501 cho chất lƣợng cây tốt nhất.
(a) (b) (c) (d)
Hình 3.9. Cây lan Trầm tím in vitro ngoài vƣờn ƣơm với các loại phân bón khác nhau (sau 8 tuần chăm sóc)
74,44 94,44 88,89 85,56 77,78 96,67 92,22 87,78 0 20 40 60 80 100 120 ĐC K1 K2 K3 Tỷ lệ ( % ) Công thức
KẾT LUẬN - KIẾN NGHỊ VÀ TỒN TẠI 1. Kết luận
Xây dựng đƣợc quy trình nhân giống lan Trầm tím (Dendrobium nestor) bằng phƣơng pháp invitro.
Công thức khử trùng phù hợp nhất cho quả lan Trầm tím là: sử dụng cồn 96°để thực hiện khử trùng (với số lần đốt cồn 3 lần) cho kết quả tỷ lệ tái sinh cao 93,33%.
Công thức môi trƣờng nhân nhanh thể chồi tốt nhất là MS + 0,4mg/l BAP + 0,2mg/l kinetin + 0,2 mg/l NAA + 5,5 g/l agar + 30g/l sucrose cho kết quả hệ số nhân thể chồi 6,33 (lần). Ánh sáng đèn huỳnh quang tốt nhất khi nhân nhanh thể chồi.
Môi trƣờng kích thích tăng trƣởng chồi tốt nhất là MS + 0,4mg/l BAP + 0,2mg/l kinetin + 0,2 mg/l NAA + 5,5 g/l agar + 30g/l sucroso + 100g/l khoai tây; kết quả hệ số nhân chồi 4,12 (lần), chiều cao chồi 4,23 cm. Ánh sáng xanh là tốt nhất cho kích thích tăng trƣởng chồi.
Môi trƣờng ra rễ tốt nhất là MS + 0,5mg/lBAP + 0,1 mg/lNAA + 6,5 g/lAgar + 20g/l sucroso cho kết quả số rễ TB/ chồi 5,45 (rễ); Chiều dài TB rễ/ chồi 3,85cm. Ánh sáng huỳnh quang tốt nhất cho chồi ra rễ.
Giá thể dớn trắng thích hợp để ra cây mô cho Trầm tím với tỷ lệ sống 93,33%;
Sử dụng phân NPK 501 là tốt nhất để chăm sóc cây ngoài vƣờn ƣơm. Trồng đƣợc 300 cây cho ra ngoài trồng thực địa.
2. Tồn tại: Do thời gian thực hiện còn hạn chế nên chƣa có điều kiện để bố trí nhiều thí nghiệm phục vụ cho các nội dung nghiên cứu để quy trình nhân giống lan Trầm tím hoàn thiện hơn.
Tiếp tục các nghiên cứu ảnh hƣởng của loại môi trƣờng dinh dƣỡng, các chất điều hòa sinh trƣởng và ảnh hƣởng của tổ hợp các loại ánh sáng LED đơn sắc khác nhau đến khả năng nhân nhanh và ra rễ lan Trầm tím.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
1. Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Thị Phƣơng Thảo (2005). “Giáo trình công nghệ sinh học nông nghiệp”, NXB Nông nghiệp.
2. Vũ Kim Dung, Nguyễn Văn Việt, Bùi Văn Thắng (2016). Nhân giống lan Hoàng Thảo ý ba màu (Dendrobium gratiossimum Reichenb.f) bằng kỹ thuật nuôi cấy in vitro.Tạp chí khoa học và công nghệ số 6- 2016, tr.156 – 161.
3. Nguyễn Thị Mỹ Duyên (2009). “Nhân giống lan Dendrobium anosmum, Dendrobium mini bằng phương pháp nuôi cấy mô”; Nghiên cứu các loại giá thể trồng lan Dendrobium mini thích hợp và cho hiệu quả cao, đề tài nghiên cứu, Trƣờng ĐH An Giang.
4. Đỗ Thị Gấm, Phan Hồng Khôi, Chu Hoàng Hà, Phạm Bích Ngọc, Nguyễn Khắc Hƣng, Hà Thị Thanh Bình, Nguyễn Nhƣ Chƣơng, Lƣờng Tú Nam, Nguyễn Thị Thúy Bình (2016). Ảnh hƣởng của ánh sáng LED đến sự sinhtrƣởng, phát triển của cây lan Kim Tuyến (Anoectochilus roxburghii) in vitro.Tạp chí Công nghệ sinh học (2016).
5. Lê Văn Hoàng (2008). Giáo trình nuôi cấy mô tế bào thực vật. Đại học Đà Nẵng
6. Trần Quang Hoàng (2005). Ảnh hƣởng của chất điều hòa sinh trƣởng đến quá trình nuôi cấy in vitro của hai giống lan Dendrobium và
Cymbidium. Đại học Nông Lâm TP. HCM.
7. Trần Hợp (1998, 2000). Phong lan Việt Nam. Nhà xuất bản nông nghiệp TPHCM.
8. Phan Húc Huân (1989), “Hoa lan cây cảnh và vấn đề phát triển sản xuất kinh doanh xuất khẩu”, NXB Nông nghiệp thành phố Hồ Chí Minh, tr 12 – 14 – 3
9. Trần Văn Huân, Văn Tích Lƣợm (1998). “Kỹ Thuật nuôi trồng cây lan”, NXB Nông nghiệp thành phố Hồ Chí Minh, tr 23.
10. Dƣơng Đức Huyến (2007). “Thực vật chí Việt Nam, họ lan –
Orchidaceae, chi hoàng thảo Dendrobium Sw”. NXB Khoa học và kĩ thuật.
11. Vũ Ngọc Lan, Nguyễn Thị Lý Anh (2013). “Nghiên cứu nhân giống in vitro lan thạch hộc (Dendrobium nobile Lindl) nhằm mục đích bảo tồn và phát triển loài lan quý chi Hoàng thảo, có giá trị thẩm mỹ và dƣợc liệu cao, đang có nguy cơ tuyệt chủng”.
12. Trần Văn Minh, Nguyễn Văn Uyển (2001). “Vi nhân giống phong lan nhóm Dendrobium trên quy mô công nghiệp”, Tạp chí khoa học công nghệ,1: 1.
13. Phan Xuân Bình Minh, Bùi Thị Thanh Phƣơng, Phạm Hƣơng Sơn, Trần Minh Hợi, Nguyễn Thị Phƣơng Lan, Vũ Thị Thảo, (2018). Ảnh hƣởng của chế độ chiếu sáng bằng đèn led lên khả năng sinh trƣởng và phát triển của chồi hai loài kim tuyến (Anoectochilus annamensis Aver. Và
Anoectochilus roxburghii (Wall.). Tạp chí khoa học và công nghệ . 40(1). 32 – 38.
14. Nguyễn Bá Nam, Lê Thị Thanh, Lê Thị Thanh Trà, Vũ Quốc Luận, Nguyễn Đình Lâm, Dƣơng Tấn Nhựt (2014). “Ảnh hƣởng của ánh sáng đèn LED bổ sung vào ban đêm sự sinh trƣởng và phát triển trên ban giống Cúc (đóa vàng, sapphire và kim cƣơng) đƣợc trồng trong nhà kính”, Tạp chí Khoa học và Công nghệ 52(3): 311-328.
15. Dƣơng Tuấn Nhựt (2007), Hội nghị khoa học Công nghệ sinh học thực vật trong công tác nhân và tạo giống hoa, NXB Nông nghiệp TP.HCM. 16. Dƣơng Tấn Nhựt, Nguyễn Bá Nam (2009). Ảnh hƣởng của hệ thống chiếu
(Chrysanthemum morifolium) nuôi cấy in vitro, tạp chí Công nghệ sinh học, số 7(1): 93- 100.
17. Dƣơng Tấn Nhựt, Nguyễn Bá Nam (2014). Đèn LED (Light- emitinhdiode) – nguồn sáng nhân tạo trong nuôi cấy mô tế bào thực vật.
Tạp chí Công nghệ Sinhhọc 12(3): 393-407.
18. Dƣơng Tấn Nhựt,Vũ Quốc Luận, Trịnh Thị Hƣơng, Nguyễn Phúc Huy, Đỗ Khắc Thịnh, (2014). “Ảnh hƣởng của các chất bổ sung hữu cơ lên quá trình sinh trƣởng và phát triển của chồi lan Vân hài (paphiopedilum callosum) nuôi cấy in vitro“.Tạp chí Khoa học và Công nghệ 52 (1). 19. Nguyễn Công Nghiệp (2014). Trồng hoa lan. In lần 3. Tp. HCM, NXB trẻ 20. Phùng Văn Phê, Nguyễn Thị Hồng Gấm, Nguyễn Trung Thành (2010).
“Nghiên cứu kỹ thuật nhân nhanh chồi In vitro loài Lan kim tuyến
Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl.”, Tạp chí khoa học ĐHQGHN, Khoa học tự nhiên và Công nghệ 26.
21. Nguyễn Thanh Phƣơng, Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Hồng Thắm (2014). “Ảnh hƣởng của một số loại đèn chiếu sáng và bình nuôi cấy đến sự sinh trƣởng, phát triển của giống Cẩm chƣớng Hồng Hạc cấy mô”, Tạp chí khoa học và phát triển 12(7): 1015-1022.
22. Nguyễn Thanh Sang, Nguyễn Bá Nam, Hoàng Thanh Tùng, Nguyễn PhúcHuy, Nguyễn Thị Kim Loan, Nguyễn Ngọc Thảo, Vũ Đức Trung, Nguyễn Văn An, Trần Thị Minh Loan, Nguyễn Văn Kết, Dƣơng Tấn Nhựt (2014). Sinh trƣởng phát triển và hàm lƣợng chlorophyll trong chồi cây cúc (ChrysanthemumMorifolium Ramat. CV. Jimba) nuôi cấy
in vitro dƣới ánh sáng LED. Tạp chí Công nghệ Sinh học 12(2): 339- 347
23. Nguyễn Thị Sơn, Nguyễn Thị Lý Anh, Vũ Ngọc Lan, Trần thế Mai (2011). “Nhân giống in vitro loài lan Dendrobium fimbriatum Hook”,
Tạp chí khoa học và phát triển 2012, tập (2):263-271.
24. Nguyễn Văn Song, Trƣơng Thị Bích Phƣợng (2011). “Nhân nhanh in vitro lan kim điệp (Dendrobium chrysotoxum) – một loại lan rừng có nguy cơ tuyệt chủng”, tạp chí khoa học Đại học Huế.
25. Lê Thị Thúy, Trần Thị Anh Thoa (2017). “Ảnh hƣởng cuả đèn Led lên sinh trƣởng của Dendrobium lituiflorum Lindl. và Dendrobium Shavin White”. Tạp chí Khoa học công nghệ và Thực phẩm, 13 (1) 68-73. 26. Nguyễn Thiện Tịch (1996), Kỹ thuật nuôi trồng hoa lan, Nhà xuất bản
Nông nghiệp Thành Phố Hồ Chí Minh.
27. Nguyễn Đức Thành (2000), Nuôi cấy mô tế bào thực vật – nghiên cứu và ứng dụng, Nhà xuất bản nông nghiệp.
28. Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Hồng Gấm (2007). “Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống lan Ngọc điểm Đai Châu (Rhychostylis gigantiea) bằng phƣơng pháp nuôi cấy in vitro”.Báo cáo khoa học, trƣờng Đại học Lâm Nghiệp.
29. Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, Hoàng Thị Nga, Nguyễn Xuân Trƣờng, Đỗ năng Vịnh (2003). “Nghiên cứu xây dựng quy trình nhân giống và nuôi trồng lan Hồ điệp (Phalaenopsis)”, báo cáo Khoa học hội nghị CNSH toàn quốc Hà Nội, NXB Khoa học và kỹ thuật, tr.850-855.
30. Nguyễn Quỳnh Trang, Vũ Thị Huệ, Khuất Thị Hải Ninh, Nguyễn Thị Thơ (2013). Nhân giống invitro Lan Phi Điệp Tím (Dendrobium anosmum),
31. Nguyễn Thanh Tùng và cộng sự (2010) “ Phương pháp nuôi cấy lát mỏng tế bào trong nhân giống in vitro cây lan hoàng thảo thân gãy (Dendrobium aduncum)”, đề tài nghiên cứu.
32. Nguyễn Văn Việt (2017). “Ứng dụng kĩ thuật nuôi cấy in vitro trong nhân giống lan hoàng thảo kèn (Dendrobium lituiflorum Lindley). Tạp chí khoa học công nghệ Lâm nghiệp số 4.
33. Ngô Quang Vũ (2002). “ Những con số hấp dẫn về thị trƣờng lan cắt cành thế giới”, Hoa cảnh, tr 10.
34. Đào Thị Thanh Vân, Đặng Thị Tố Nga (2008). Giáo trình hoa lan. NXB Nông nghiệp, Hà Nội.
Tài liệu tiếng anh
35. Ajchara – Boonrote (1987). Efect of glucose, hydroquinoline sulfate, silve nitrat, silve thiosuffate on vase life of Dendrobium Padeewan cut flowers in Thai Land, Bangkok”
36. Edy Setiti Wida Utami, Sucipto Hariyanto,Yosephine Sri Wulan Manuhara, (2017). In vitro propagation of the endangered medicinal orchid, Dendrobium lasianthera J.J.Sm through mature seed culture.
Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine, 7 (5), Pages 406-410. 37. Huimin Li, Canming Tang, Zhigang Xu, Xiaoying Liu, Xuelin Han
(2012). Effects of Different Light Sources on the Growth of Non- heading Chinese Cabbage (Brassica campestris L.). Journal of Agricultural Science Vol 4: 262
38. Nhut D.T., Hong L.T.A., Watanabe H., Goi M., Tanaka M, (2000). Growthof banana plantlets cultured in vitro under red and blue light emitting diode (LED) irradiation source, In: R.A. Drew (Ed.), Proceedings of the International Symposium on Tropical and