* Nguyên tắc:
Dựa vào tính chất hĩa sinh của coli: Chịu được nhiệt độ cao, chúng cĩ thể phát triển tốt ở nhiệt độ 420C; sống và phát triển được trong mơi trường axít; cĩ khả năng lên men đường lactoza, sinh hơi nhiều và nhanh; cĩ khả năng sinh indol.
http://www.ebook.edu.vn
* Tiến hành:
- Đun chảy mơi trường endol (đã khử trùng) trên nồi cách thủy.
- Đun chảy mơi trường Endol đã khử trùng, đĩng bình cầu, mỗi bình 100 ml.
- Pha lỗng nước kiểm nghiệm ở các đậm độ khác nhau tùy theo độ bẩn của nước
(1/10, 1/100, 1/1000, ...)
- Đánh số 3 hộp lồng theo độ pha lỗng của mẫu nước.
- Cho vào hộp lồng mỗi hộp 1 ml nước cĩ nồng độ tương ứng.
- Đợi thạch nguội đến 40 - 450C, đổ vào hộp lồng, mỗi hộp khoảng 15 ml.
- Để nghiêng hộp thạch trên bàn phẳng, xoay nhẹ hộp theo 2 chiều để trộn đều thạch và nước thử.
- Để yên cho thạch đơng, úp ngược, để kênh, cho vào tủ sấy đang cĩ nhiệt độ 600C rồi tắt tủ sấy, đợi đến khi nhiệt độ trong tủ bằng nhiệt độ phịng thí nghiệm thì lấy ra,
úp ngược, nuơi cấy trong tủ ấm 420C/48h.
* Kết quả:
- Đếm số khuẩn lạc mọc trên thạch.
- Khuẩn lạc cĩ hình trịn, màu hồng, cĩ bờ rõ. Khuẩn lạc E.coli cĩ ánh kim. - Chỉ số coli:
X = / lít nướcA + 10B +100C
S
Trong đĩ:
A - Số khuẩn lạc cĩ trong hộp cấy 1ml nước nguyên mẫu.
B - Số khuẩn lạc cĩ trong hộp cấy 1ml nước kiểm nghiệm pha lỗng 1/10. C - Số khuẩn lạc cĩ trong hộp cấy 1ml nước kiểm nghiệm pha lỗng 1/100. S - Số trung bình mẫu, tính bằng số nồng độ pha lỗng dùng trong xét nghiệm, ở
đây S = 3.
Để nâng cao hiệu quả của quy trình định lượng bằng phương pháp đếm khuẩn lạc, các điều kiện cần phải điều chỉnh sao cho chỉ cĩ các thành viên vi sinh vật cần xác định theo định nghĩa được đếm.