Eosin
1. Phiến mẫu sau khi loại paraffin sẽ làm ngậm nước theo các bước:
Nhúng phiến mẫu vào xylen 2-3 phút
Chuyển sang xylen sạch 1-2 phút
Chuyển lần lượt sang các dung dịch cồn 95%, 70% và 50%. 1 phút cho mỗi dung dịch
2. Chuẩn bị phẩm nhuộm
Hematoxylin: Hòa tan 1g
hematoxylin trong 750ml. Thêm vào 0.2g Sodium iodate; 1g acid
citric và 50g chloral hydrate. Thêm nước vào cho đủ 1L
Dung dịch chuẩn 1% eosin: 1g eosin, 20ml nước cất, 80ml cồn
95%. Dung dịch nhuộm eosin được chuẩn bị như sau: 1 V dung dịch
chuẩn+3V cồn 80%. Trước khi sử dụng thêm 0.5ml acid acetic/100ml thuốc nhuộm
Nhúng phiến mẫu trong Hematoxylin 15 phút
Rửa phiến mẫu dưới vòi nước 20 phút
Nhúng phiến mẫu vào dung dịch
nhuộm eosin từ 15 giây đến 2 phút tùy vào mức độ bắt màu của mẫu
3. Chuyển phiến mẫu sang 2 lần cồn 95% (chuyển sang dung dịch mới cho mỗi lần lập lại), mỗi lần 2 phút để rửa hết eosin thừa.
4. Quan sát phiến mẫu bằng kính
hiển vi, mẫu đạt yêu cầu khi mẫu trong và tế bào chất bắt màu từ hồng nhạt đến cam
5. Rửa phiến mẫu lại trong cồn 95% sau đó chuyển phiến mẫu sang 2 lần cồn tuyệt đối, mỗi lần 2 phút.
Làm trong mẫu bằng xylen 2 lần mỗi lần 2 phút. Sau khi nhuộm, dán phiến kính mỏng lên
6. Với phương pháp nhuộm này, nhân tế bào sẽ có màu xanh dương.
Vùng tế bào chất với lưới nội chất có màu xanh nhạt hay tím. Phần tế bào chất còn lại sẽ có màu hồng