Phần 4 Kết quả và thảo luận
4.3.1.Kết quả hiệu lực ức chế nấm Neoscytalidium dimidiatum bằng nấm
4.3. Kết quả thử nghiệm hiệu lực đối kháng của nấm đối kháng
4.3.1.Kết quả hiệu lực ức chế nấm Neoscytalidium dimidiatum bằng nấm
Trichoderma harzianum trong phịng thí nghiệm
Bảng 4.10. Hiệu lực ức chế của nấm Trichoderma harzianum đối với nấm
Neoscytalidium dimidiatum trên môi trƣờng PDA
Công thức
Đƣờng kính tản nấm (mm) sau các
ngày cấy HLUC (%) 1 2 3 CT1 T. harzianum 17,83 69,83 90,00 N. dimidiatum 5,33 68,83 90,00 CT2 T. harzianum 18,33 52,33 62,67 69,63 N. dimidiatum 0 10,33 27,33 CT3 T. harzianum 0 30,00 43,33 48,14 N. dimidiatum 6,67 52,00 46,67 CT4 T. harzianum 18,67 38,33 51,33 57,03 N. dimidiatum 6,33 43,33 38,67
Ghi chú: Đường kính đĩa petri Ø 90mm
CT1: Cấy riêng nấm Trichoderma harzianum và Neoscytalidium dimidiatum CT2: Cấy nấm Trichoderma harzianum trước Neoscytalidium dimidiatum 24 giờ CT3: Cấy nấm Trichoderma harzianum sau Neoscytalidium dimidiatum 24 giờ CT4: Cấy nấm Trichoderma harzianum và Neoscytalidium dimidiatum đồng thời.
Qua bảng 4.10 ta thấy nấm đối kháng Trichoderma harzianum và nấm N. dimidiatum ở công thức đối chứng tốc độ phát triển tương tự nhau. Ở công thức cấy
nấm Neoscytalidium dimidiatum trước, nấm Neoscytalidium dimidiatum lấn át sự phát triển của nấm đối kháng ở ngày thứ 2 nhưng sự phát triển của 2 nấm là gần như tương đương ở ngày thứ 3. Ở công thức cấy cùng cả 2 loại nấm và cấy nấm đối kháng trước thì sau ngày thứ 2 và thứ 3 nấm Trichoderma harzianum phát triển nhanh hơn và lấn át nấm Neoscytalidium dimidiatum, lấn át mạnh hơn ở công thức
cấy nấm đối kháng trước. Sau 5 ngày nuôi cấy nấm Trichoderma harzianum mọc
lấn át và ức chế nấm Neoscytalidium dimidiatum ở tất cả các cơng thức (Hình 4.14).
Hiệu lực ức chế của nấm Trichoderma harzianum đối với nấm
Neoscytalidium dimidiatum sau 3 ngày ở công thức cấy nấm gây bệnh trước là
48,18% thấp nhất, ở công thức xử lý đồng thời 2 nấm hiệu lực ức chế đạt 57,03%. Hiệu quả cao nhất là xử lý phòng trừ nấm đối kháng trước, hiệu lực đạt 69,63%.
Từ kết quả nghiên cứu trên ta thấy nấm đối kháng Trichoderma harzianum có tác dụng ức chế tốt sự sinh trưởng phát triển của nấm Neoscytalidium dimidiatum và hiệu quả cao nhất là khi được xử lý nấm đối kháng phịng bệnh trước.
Hình 4.14. Hiệu lực ức chế của nấm Trichoderma harzianum với sự sinh trƣởng phát triển của nấm Neoscytalidium dimidiatum sau 5 ngày
- Cấy riêng nấm Trichoderma harzianum - Cấy riêng nấm Neoscytalidium dimidiatum
- Cấy nấm Trichoderma harzianum và Neoscytalidium dimidiatum đồng thời. - Cấy nấm Trichoderma harzianum trước Neoscytalidium dimidiatum 24 giờ - Cấy nấm Trichoderma harzianum sau Neoscytalidium dimidiatum 24 giờ
4.3.2. Kết quả hiệu lực ức chế nấm Neoscytalidium dimidiatum bằng nấm Trichoderma asperellum trong phịng thí nghiệm
Bảng 4.11. Hiệu lực ức chế của nấm Trichoderma asperellum đối với nấm Neoscytalidium dimidiatum trên môi trƣờng PDA
Công thức
Đƣờng kính tản nấm (mm) sau các
ngày cấy HLUC (%) 1 2 3 CT1 T. asperellum 41,83 80,00 80,00 N. dimidiatum 12,83 63,17 80,00 CT2 T. asperellum 37,67 54,00 58,33 72,91 N. dimidiatum 0 9,67 21,67 CT3 T. asperellum 0 24,33 32,33 40,41 N. dimidiatum 10,33 46,00 47,67 CT4 T. asperellum 25,00 49,67 52,33 65,41 N. dimidiatum 9,33 30,33 27,67
Ghi chú: Đường kính đĩa petri Ø 80mm
CT1: Cấy riêng nấm Trichoderma asperellum và Neoscytalidium dimidiatum CT2: Cấy nấm Trichoderma asperellum trước Neoscytalidium dimidiatum 24 giờ CT3: Cấy nấm Trichoderma asperellum sau Neoscytalidium dimidiatum 24 giờ CT4: Cấy nấm Trichoderma asperellum và Neoscytalidium dimidiatum đồng thời
Hình 4.15. Hiệu lực ức chế của nấm Trichoderma asperellum với sự sinh trƣởng phát triển của nấm Neoscytalidium dimidiatum sau 5 ngày
– Cấy riêng nấm Trichoderma asperellum – Cấy riêng nấm Neoscytalidium dimidiatum
– Cấy nấm Trichoderma asperellum và Neoscytalidium dimidiatum đồng thời - Cấy nấm Trichoderma asperellum trước Neoscytalidium dimidiatum 24 giờ
Qua bảng 4.11 ta thấy nấm đối kháng Trichoderma asperellum phát triển nhanh hơn nấm Neoscytalidium dimidiatum ở công thức đối chứng. Ở các cơng thức thí nghiệm khác nấm được ni cấy trước sẽ lấn át sự phát triển của nấm cấy sau. Ở cơng thức cấy cùng cả 2 loại nấm thì sau ngày thứ 2 và thứ 3 nấm
Trichoderma asperellum phát triển nhanh hơn và lấn át nấm Neoscytalidium dimidiatum , đường kính tản nấm của Trichoderma asperellum là 52,33 mm, nấm
Neoscytalidium dimidiatum là 27,67 mm ở ngày thứ 3. Sau 5 ngày nuôi cấy nấm Trichoderma asperellum mọc lấn át và ức chế nấm Neoscytalidium dimidiatum ở
tất cả các cơng thức (Hình 4.15).
Hiệu lực ức chế của nấm Trichoderma asperellum đối với nấm
Neoscytalidium dimidiatum sau 3 ngày ở công thức cấy nấm gây bệnh trước là
40,41% thấp nhất, ở công thức xử lý đồng thời 2 nấm hiệu lực ức chế đạt 65,41%. Hiệu quả cao nhất là xử lý phòng trừ nấm đối kháng trước, hiệu lực đạt 72,91%.
Từ kết quả nghiên cứu trên ta thấy nấm đối kháng Trichoderma asperellum có tác dụng ức chế tốt sự sinh trưởng phát triển của nấm Neoscytalidium dimidiatum và hiệu quả cao nhất là khi được xử lý nấm đối kháng phòng bệnh trước.
4.3.3. Khảo sát hiệu lực ức chế của các hoạt chất sinh học đƣợc tiết ra trong quá trình sinh trƣởng và phát triển của nấm Trichoderma asperellum đối với
nấm Neoscytalidium dimidiatum
Thí nghiệm 1 :
Dịch nuôi nấm Trichoderma asperellum đƣợc lọc qua giấy lọc, cho vào môi trƣờng PDA theo tỷ lệ từng cơng thức thí nghiệm, khơng hấp khử trùng
dịch nấm đối kháng sau lọc. Mỗi đĩa petri chứa tổng 10ml hỗn hợp môi trƣờng và dịch nuôi nấm đối kháng.
CT1: Đối chứng - Cấy nấm Neoscytalidium dimidiatum trên môi trường PDA
CT2: Cấy nấm Neoscytalidium dimidiatum trên môi trường chứa 90%
PDA + 10% dd nấm Trichoderma asperellum
CT3: Cấy nấm Neoscytalidium dimidiatum trên môi trường chứa 70%
PDA + 30% dd nấm Trichoderma asperellum
CT4: Cấy nấm Neoscytalidium dimidiatum trên môi trường chứa 50%
PDA + 50% dd nấm Trichoderma asperellum Ngày thứ 5 xuất hiện nấm đối
kháng mọc trên môi trường đĩa. Kết quả thu được ở bảng 4.12 và biểu thị trên đồ thị hình 4.16.
Bảng 4.12. Kết quả hiệu lực ức chế của các hoạt chất sinh học đƣợc tiết ra trong quá trình sinh trƣởng và phát triển của nấm Trichoderma asperellum
đối với nấm Neoscytalidium dimidiatum
Ngày sau cấy Đƣờng kính tản nấm
CT1 CT2 CT3 CT4 1 6,33 0 0 0 2 19,17 5,50 0 0 3 31,50 8,33 5,83 5,67 4 57,33 12,50 6,50 6,00 5 80,00 17,17 6,50 6,00
Ghi chú: Đường kính đĩa petri Ø 80mm
Hình 4.16. Đƣờng kính tản nấm của nấm Neoscytalidium dimidiatum ở các cơng thức thí nghiệm với các nồng độ hoạt chất sinh học của nấm đối kháng
Trichoderma asperellum khác nhau 5 ngày sau cấy
Từ kết quả thí nghiệm 1 thể hiện trong bảng 4.12, dịch nấm đối kháng
Trichoderma asperellum được lọc nhưng không hấp khử trùng, sau 5 ngày nuôi cấy
nghiệm. Như vậy, dịch nấm đối kháng Trichoderma asperellum không được hấp
khử trùng ức chế nấm gây bệnh Neoscytalidium dimidiatum bằng cả cơ chế cạnh
tranh dinh dưỡng và hoạt chất sinh học do nấm đối kháng tiết ra trong quá trình phát triển. Sau 5 ngày nuôi cấy, cơng thức 4 - thí nghiệm chứa 50% dịch nấm đối kháng
Trichoderma asperellum tản nấm bệnh đạt đường kính 6,0 mm; chậm hơn nhiều so
với đường kính 80 mm ở cơng thức đối chứng cấy nấm bệnh trên môi trường PDA. Hiệu quả ức chế nấm bệnh tăng khi tăng nồng độ dịch nấm đối kháng.
Thí nghiệm 2 :
Dịch ni nấm Trichoderma asperellum đƣợc lọc qua giấy lọc, cho vào mơi trƣờng PDA theo tỷ lệ từng cơng thức thí nghiệm, hấp khử trùng dịch nấm đối kháng sau lọc. Mỗi đĩa petri chứa tổng 10ml hỗn hợp môi trƣờng và dịch
nuôi nấm đối kháng.
CT1: Đối chứng - Cấy nấm Neoscytalidium dimidiatum trên môi trường PDA
CT2: Cấy nấm Neoscytalidium dimidiatum trên môi trường chứa 90%
PDA + 10% dd nấm Trichoderma asperellum
CT3: Cấy nấm Neoscytalidium dimidiatum trên môi trường chứa 70%
PDA + 30% dd nấm Trichoderma asperellum
CT4: Cấy nấm Neoscytalidium dimidiatum trên môi trường chứa 50% PDA + 50% dd nấm Trichoderma asperellum
Kết quả thể hiện ở bàng 4.13, đồ thị 4.17 và hình 4.18.
Bảng 4.13. Kết quả hiệu lực ức chế của các hoạt chất sinh học đƣợc tiết ra trong quá trình sinh trƣởng và phát triển của nấm Trichoderma asperellum
đối với nấm Neoscytalidium dimidiatum
Ngày sau cấy Đƣờng kính tản nấm
CT1 CT2 CT3 CT4 1 13,17 8,33 7,00 6,67 2 27,50 13,50 10,17 8,00 3 62,33 19,67 12,83 10,67 4 80,00 26,17 20,33 17,17 5 80,00 35,67 31,00 26,33 6 80,00 39,50 33,67 29,83
Hình 4.17. Đƣờng kính tản nấm của nấm Neoscytalidium dimidiatum ở các cơng thức thí nghiệm với các nồng độ hoạt chất sinh học của nấm đối kháng
Trichoderma asperellum khác nhau 4 ngày sau cấy
(a) (b)
(c) (d)
Hình 4.18. Kết quả hiệu lực ức chế của dịch nuôi nấm Trichoderma
asperellum đƣợc lọc qua giấy lọc, hấp khử trùng dịch nấm đối kháng sau lọc
(a) – CT1 ; (b) – CT2 ; (c) – CT3 ;
Từ bảng 4.13, dịch nấm đối kháng Trichoderma asperellum được lọc và
hấp khử trùng nên chỉ ức chế nấm gây bệnh Neoscytalidium dimidiatum bằng hoạt chất sinh học tiết ra trong quá trình phát triển. Sau 4 ngày ni cấy, ở cơng
thức 4 - thí nghiệm chứa 50% dịch nấm đối kháng Trichoderma asperellum tản
nấm bệnh đạt đường kính 17,17 mm; chậm hơn nhiều so với đường kính 80 mm ở cơng thức đối chứng cấy nấm bệnh trên môi trường PDA. Hiệu quả ức chế nấm bệnh tăng khi tăng nồng độ dịch nấm đối kháng.
Hiệu quả ức chế nấm gây bệnh Neoscytalidium dimidiatum của nấm đối
kháng Trichoderma asperellum ở thí nghiệm 1 (không hấp khử trùng dịch nấm
đối kháng) mạnh hơn thí nghiệm 2 (hấp khử trùng dịch nấm đối kháng) do tồn tại bào tử nấm đối kháng Trichoderma asperellum phát triển và ức chế nấm bệnh
bằng cơ chế cạnh tranh dinh dưỡng.
Qua kết quả bảng 4.12 và bảng 4.13 có thể kết luận : Hoạt chất sinh học do nấm đối kháng Trichoderma asperellum tiết ra trong quá trình sinh trưởng và
phát triển có tác dụng ức chế sự phát triển của nấm Neoscytalidium dimidiatum
gây bệnh đốm nâu thanh long.
4.3.4. Khảo sát hiệu lực ức chế của các hoạt chất sinh học đƣợc tiết ra trong quá trình sinh trƣởng và phát triển của nấm Chaetomium đối với nấm Neoscytalidium dimidiatum
Thí nghiệm 1 :
Dịch nuôi nấm Chaetomium sp. được lọc qua giấy lọc, cho vào mơi
trường PDA theo tỷ lệ từng cơng thức thí nghiệm, khơng hấp khử trùng dịch nấm đối kháng sau lọc. Mỗi đĩa petri chứa tổng 10ml hỗn hợp môi trường và dịch nuôi nấm đối kháng.
CT1: Đối chứng - Cấy nấm Neoscytalidium dimidiatum trên môi
trường PDA
CT2: Cấy nấm Neoscytalidium dimidiatum trên môi trường chứa 90%
PDA + 10% dd nấm Chaetomium sp.
CT3: Cấy nấm Neoscytalidium dimidiatum trên môi trường chứa 70%
PDA + 30% dd nấm Chaetomium sp.
CT4: Cấy nấm Neoscytalidium dimidiatum trên môi trường chứa 50%
Ngày thứ 5 xuất hiện nấm đối kháng mọc trên mơi trường đĩa. Kết quả thí nghiệm thể hiện ở bảng 4.14 và đồ thị 4.19.
Bảng 4.14. Kết quả hiệu lực ức chế của các hoạt chất sinh học đƣợc tiết ra trong quá trình sinh trƣởng và phát triển của nấm Chaetomium sp. đối với
nấm Neoscytalidium dimidiatum
Ngày sau cấy Đƣờng kính tản nấm
CT1 CT2 CT3 CT4 1 6,33 0 0 0 2 19,17 6,17 5,33 0 3 31,50 8,33 6,17 5,83 4 57,33 15,17 7,50 6,00 5 80,00 20,83 7,67 6,50
Ghi chú: Đường kính đĩa petri Ø 80mm
Hình 4.19. Đƣờng kính tản nấm của nấm Neoscytalidium dimidiatum ở các cơng thức thí nghiệm với các nồng độ hoạt chất sinh học của nấm đối kháng
Chaetomium sp. khác nhau 5 ngày sau cấy
Từ kết quả thí nghiệm 1 thể hiện trong bảng 4.14, dịch nấm đối kháng
Chaetomium sp. được lọc nhưng không hấp khử trùng, sau 5 ngày nuôi cấy xuất
hiện nấm đối kháng Chaetomium sp. mọc trên mơi trường đĩa thí nghiệm. Như
vậy, dịch nấm đối kháng Chaetomium sp. không được hấp khử trùng ức chế nấm
gây bệnh Neoscytalidium dimidiatum bằng cả cơ chế cạnh tranh dinh dưỡng và
ni cấy, cơng thức 4 - thí nghiệm chứa 50% dịch nấm đối kháng Chaetomium
sp. tản nấm bệnh đạt đường kính 6,50 mm; chậm hơn nhiều so với đường kính 80 mm ở cơng thức đối chứng cấy nấm bệnh trên môi trường PDA. Hiệu quả ức chế nấm bệnh tăng khi tăng nồng độ dịch nấm đối kháng.
Thí nghiệm 2 :
Dịch nuôi nấm Chaetomium sp. được lọc qua giấy lọc, cho vào môi
trường PDA theo tỷ lệ từng cơng thức thí nghiệm, hấp khử trùng dịch nấm đối kháng sau lọc. Mỗi đĩa petri chứa tổng 10ml hỗn hợp môi trường và dịch nuôi nấm đối kháng.
CT1: Đối chứng - Cấy nấm Neoscytalidium dimidiatum trên môi
trường PDA
CT2: Cấy nấm Neoscytalidium dimidiatum trên môi trường chứa 90%
PDA + 10% dd nấm Chaetomium sp.
CT3: Cấy nấm Neoscytalidium dimidiatum trên môi trường chứa 70%
PDA + 30% dd nấm Chaetomium sp.
CT4: Cấy nấm Neoscytalidium dimidiatum trên môi trường chứa 50%
PDA + 50% dd nấm Chaetomium sp.
Kết quả thí nghiệm thể hiện ở bảng 4.15, đồ thị 4.20 và hình 4.21.
Bảng 4.15. Kết quả hiệu lực ức chế của các hoạt chất sinh học đƣợc tiết ra trong quá trình sinh trƣởng và phát triển của nấm Chaetomium đối với nấm
Neoscytalidium dimidiatum
Ngày sau cấy Đƣờng kính tản nấm
CT1 CT2 CT3 CT4 1 13,17 9,00 8,67 7,00 2 27,50 12,50 9,83 9,17 3 62,33 21,67 13,50 13,00 4 80,00 32,00 20,33 18,83 5 80,00 45,17 29,00 23,50 6 80,00 55,33 36,50 32,33 7 80,00 59,50 40,17 38,67
Hình 4.20. Đƣờng kính tản nấm của nấm Neoscytalidium dimidiatum ở các cơng thức thí nghiệm với các nồng độ hoạt chất sinh học của nấm đối kháng
Chaetomium sp. khác nhau 4 ngày sau cấy
(a) (b)
(c) (d)
Hình 4.21. Kết quả hiệu lực ức chế của dịch nuôi nấm Chaetomium sp. đƣợc lọc qua giấy lọc, hấp khử trùng dịch nấm đối kháng sau lọc
(a) – CT1 ; (b) – CT2 ; (c) – CT3 ; (d) – CT4
Từ bảng 4.15, dịch nấm đối kháng Chaetomium sp. được lọc và hấp khử trùng nên chỉ ức chế nấm gây bệnh Neoscytalidium dimidiatum bằng hoạt chất sinh học tiết ra trong quá trình phát triển. Sau 4 ngày ni cấy, ở cơng thức 4 - thí nghiệm chứa 50% dịch nấm đối kháng Chaetomium sp. tản nấm bệnh đạt đường kính 18,83 mm; chậm hơn nhiều so với đường kính 80 mm ở cơng thức đối chứng cấy nấm bệnh trên môi trường PDA. Hiệu quả ức chế nấm bệnh tăng khi tăng nồng độ dịch nấm đối kháng.
Hiệu quả ức chế nấm gây bệnh Neoscytalidium dimidiatum của nấm đối
kháng Chaetomium sp. ở thí nghiệm 1 (khơng hấp khử trùng dịch nấm đối kháng)
mạnh hơn thí nghiệm 2 (hấp khử trùng dịch nấm đối kháng) do tồn tại bào tử nấm
đối kháng Chaetomium sp. phát triển và ức chế nấm bệnh bằng cơ chế cạnh tranh
dinh dưỡng.
Qua kết quả bảng 4.12 và bảng 4.13 có thể kết luận : Hoạt chất sinh học do nấm đối kháng Chaetomium sp. tiết ra trong q trình sinh trưởng và phát triển có tác dụng ức chế sự phát triển của nấm Neoscytalidium dimidiatum gây bệnh đốm nâu thanh long.
4.3.5. Nghiên cứu đánh giá hiệu lực sinh học của các hợp chất sinh học thu đƣợc từ nấm đối kháng Trichoderma asperellum đối với nấm Neoscytalidium đƣợc từ nấm đối kháng Trichoderma asperellum đối với nấm Neoscytalidium
dimidiatum gây bệnh đốm nâu trên cây thanh long
Dùng micropipet nhỏ vào mỗi đĩa giấy 30µl dung dịch tương ứng với từng cơng thức thí nghiệm. Theo dõi vịng đối kháng tạo ra từ các hoạt chất sinh học tách chiết từ dịch nuôi nấm Trichoderma asperellum bằng cách dung môi đã lựa chọn ta được kết quả ở bảng 4.16.
Bảng 4.16. Kết quả hiệu lực ức chế của hoạt chất sinh học tách chiết từ dịch nuôi nấm Trichoderma asperellum đối với nấm Neoscytalidium dimidiatum
Ngày thí
nghiệm CT1 CT2 CT3 CT4 CT5 CT6 CT7 CT8 CT9 CT10
1 11,50 0 0 0 0 0 0 0 0 0
2 15,17 0 0 0 0 0 0 0 0 0
3 17,83 0 0 0 0 0 0 0 0 0
CT1: Neoscytalidium dimidiatum – Dịch nuôi nấm Trichoderma asperellum không qua lọc.
CT2: Neoscytalidium dimidiatum – H (Sản phẩm chiết thô từ n – Hexane) nồng độ 500 μg/ml
CT3: Neoscytalidium dimidiatum – H (Sản phẩm chiết thô từ n – Hexane) nồng độ 1000 μg/ml
CT4: Neoscytalidium dimidiatum – H (Sản phẩm chiết thô từ n – Hexane) nồng độ 2000 μg/ml
CT5: Neoscytalidium dimidiatum – E (Sản phẩm chiết thô từ Ethyl acetate - EtOAc) nồng độ 500 μg/ml
CT6: Neoscytalidium dimidiatum – E (Sản phẩm chiết thô từ Ethyl acetate - EtOAc) nồng độ 1000 μg/ml
CT7: Neoscytalidium dimidiatum – E (Sản phẩm chiết thô từ Ethyl acetate - EtOAc) nồng độ 2000 μg/ml
CT8: Neoscytalidium dimidiatum – B (Sản phẩm chiết thô từ n – Butanol) nồng độ 500 μg/ml
CT9: Neoscytalidium dimidiatum – B (Sản phẩm chiết thô từ n – Butanol) nồng độ 1000 μg/ml
CT10: Neoscytalidium dimidiatum – B (Sản phẩm chiết thô từ n –
Butanol) nồng độ 2000 μg/ml
Qua bảng 4.16 ta thấy, hoạt chất sinh học tách chiết từ dịch nuôi nấm