- Pha hỗn dịch bào tử: Lấy một vòng que cấy bào tử Streptomyces 155.16,
cho vào ống nghiệm chứa 10ml nước cất vô trùng, lắc cho bào tử phân tán đều, thu được hỗn dịch bào tử ở độ pha loãng 10-1
(định ước). Lấy 1ml hỗn dịch bào tử này pha loãng đến nồng độ 10-6 làm mẫu chứng, 9ml còn lại được đưa vào đĩa Petri vô trùng.
- Đột biến dưới tác dụng của ánh sáng UV: 9ml hỗn dịch bào tử ở nồng độ 10-1 đựng trong đĩa Petri được chiếu ánh sáng UV (λ=254nm) với khoảng cách 60cm, thời gian 5 phút, sau đó lấy ra, để tối 2h, rồi dùng pipet vô trùng pha loãng đến nồng độ 10-4
, 10-5 bằng nước cất vô trùng.
- Cấy các bào tử sau đột biến: Cấy 0,1ml mẫu chứng 10-6 và 0,1ml hỗn dịch bào tử đột biến ở các nồng độ 10-4 và 10-5 vào các đĩa Petri có chứa MT1, dùng que trang vô trùng dàn đều hỗn dịch bào tử trên bề mặt thạch, mỗi độ pha loãng làm 3
đĩa song song. Các đĩa Petri sau khi cấy được ủ ở nhiệt độ 28°C trong 6 ngày đến khi xuất hiện khuẩn lạc. Đếm các khuẩn lạc, xác định % độ sống sót theo công thức:
% độ sống sót = m o
N
N 10-6 + k 100% Trong đó: Nm : Số khuẩn lạc sau đột biến
No : Số khuẩn lạc trong mẫu chứng
10-k : Nồng độ hỗn dịch bào tử được sử dụng.
- Tiến hành sàng lọc với các khuẩn lạc sau khi đột biến tương tự như phương pháp sàng lọc ngẫu nhiên. Làm song song mẫu chứng. Phần trăm biến đổi hoạt tính được xác định theo công thức:
% biến đổi hoạt tính = i 100%
o
D D
Trong đó:
Di: Đường kính trung bình vòng vô khuẩn của biến chủng thứ i sau đột biến Do: Đường kính trung bình vòng vô khuẩn của mẫu chứng.
- Sau khi tiến hành đột biến, dựa vào kết quả thu được để lựa chọn ra các biến chủng có % biến đổi hoạt tính (+) cao nhất dùng cho các nghiên cứu tiếp theo.