- Vi khuẩn dùng để thử nghiệm:
+ Tụ cầu khuẩn Staphylococcus aureus; + Vi khuẩn Escherichia coli (E. coli).
Các chủng vi khuẩn dùng để thử nghiệm phải là các chủng được lấy từ thành viên của Ngân hàng Giống thế giới (WFCC) hoặc Ngân hàng Giống Nhật Bản (JSCC). Việc nuôi cấy các chủng vi khuẩn này cũng phải theo hướng dẫn của Ngân hàng cung cấp.
- Nước cất hoặc nước khử ion có độ dẫn điện < 1 µS /cm.
- Chất hoạt động bề mặt không ion: polyoxyetylen xobitan monooleat.
- Nguyên vật liệu sinh học
3.1. Nguyên vật liệu
- Môi trường lỏng – 1/500 canh thang dinh dưỡng (1/500 NB).
- Môi trường agar dinh dưỡng. - Môi trường agar đĩa.
- Môi trường agar nghiêng.
- Canh thang cazein đậu tương với licitin và polyoxyetylen xobitan monooleat (Canh thang SCDLP).
- Dung dịch đệm photphat.
- Nước muối sinh lý đệm photphat.
3.2. Môi trường nuôi cấy
3.3. Cách tiến hành
- Tiền nuôi cấy vi khuẩn. - Chuẩn bị các mẫu thử. - Chuẩn bị vi khuẩn.
- Nhiễm vi khuẩn lên mẫu thử. - Ủ các mẫu thử đã nhiễm vi khuẩn. - Thu hồi vi khuẩn từ các mẫu thử:
+ Xác định vi khuẩn trên các mẫu thử ngay sau khi nhiễm.
3.4. Biểu thị kết quả
3.4.1. Xác định số lượng vi khuẩn sống thu hồi
Số lượng vi khuẩn sống thu hồi được tính theo công thức sau: N = (100 x C x D x V)/A
trong đó:
N là số lượng vi khuẩn sống thu hồi trên mỗi cm2 mẫu thử; C là số vi khuẩn trung bình của mỗi đĩa (trong số hai đĩa lặp lại); D là hệ số pha loãng của đĩa được đếm;
V là thể tích của canh thang SCDLP đã cho vào mẫu, ml; A là diện tích bề mặt của màng mỏng, mm2.
3.4.2. Xác định hoạt tính kháng khuẩn
Hoạt tính kháng khuẩn được tính theo công thức sau: R = (Ut – U0) – (At – U0) = Ut - At trong đó:
R là giá trị hoạt tính kháng khuẩn;
U0 là giá trị trung bình logarit chung của số vi khuẩn sống thu hồi từ các mẫu thử chưa xử lý ngay sau khi nhiễm, tế bào/cm2;
Ut là giá trị trung bình logarit chung của số vi khuẩn sống thu hồi từ các mẫu thử chưa xử lý sau 24h, tế bào/cm2;
At là giá trị trung bình logarit chung của số vi khuẩn sống thu hồi từ các mẫu thử đã xử lý sau 24h, tế bào/cm2.
3.4.3. Xác định tỉ lệ hoạt tính kháng khuẩn
Tỉ lệ hoạt tính kháng khuẩn có thể được tính theo công thức sau: trong đó:
R là tỉ lệ hoạt tính kháng khuẩn, %.
B là số lượng vi khuẩn sống thu hồi trung bình sau khi nhiễm của các mẫu thử chưa xử lý sau 24 giờ, tế bào/cm2.
C là số lượng vi khuẩn sống thu hồi trung bình sau khi nhiễm của các mẫu thử đã xử lý chống khuẩn sau 24 giờ, tế bào/cm2.
100x x B C B R= −