RG1: Rehmatinoside E (chất mới)
Hợp chất RG1 đƣợc phân lập dƣới dạng bột màu trắng, công thức phân tử
đƣợc xác định là C36H56O17 bằng pic ion HR-ESI-MS tại m z 783.3414 [M + Na]+ (tính toán lý thuyết cho [C36H56O17Na]+, 783.3410).
Hình 3.1. Cấu trúc hóa học của hợp chất RG1 và của hợp chất so sánh
19
Hình 3.3. Phổ 1H-NMR của hợp chất RG1
Phổ 1H-NMR của RG1 (đo trong CD3OD) cho thấy bốn tín hiệu proton
singlet của bốn nhóm methyl bậc ba của tại δH 1.06, 1.10, 1.39 và 2.34 (mỗi 3H, s); một tín hiệu doublet của nhóm methyl bậc hai tại δH 1.24 (d, J = 6.5 Hz); hai proton anome ở δH 4.45 (1H, d, J = 8.0 Hz) và 4.68 (1H, d, J = 7.5 Hz) cho thấy sự hiện diện của hai đơn vị đƣờng.
Phổ 13C-NMR cho thấy 36 tín hiệu carbon, bao gồm một carbon carbonyl ở δC 168.7, sáu carbon olefinic ở δC 104.8, 118.9, 134.1, 140.9, 141.3 và 154.5, bốn carbon không proton ở δC 42.3, 79.1, 82.0 và 83.3, mƣời bốn carbon methine ở δC 39.3, 51.6, 71.7, 72.5, 74.8, 75.8, 77.0, 78.0, 78.2, 78.8, 79.7, 93.4, 97.9 và 99.4, sáu carbon methylene ở δC 18.7, 31.2, 32.7, 48.0, 62.9 và 72.1, năm carbon methyl ở δC 14.7, 18.5, 20.5, 21.3 và 25.9.
Hình 3.4. Phổ 13C-NMR của hợp chất RG1
Phân tích dữ liệu NMR cho thấy cấu trúc của RG1 chứa một iridoid, một apo carotenoid sesquiterpenoid và hai phân tử đƣờng. Độ dịch chuyển hóa học 13
C-NMR của hai thành phần đƣờng ở δC 99.4, 74.8, 78.0, 71.7, 78.2 và 62.9; 97.9, 75.8, 78.8, 77.0, 72.5 và 18.5; và tín hiệu 2 proton anome ở δH 4.68 (1H, d, J = 7.5 Hz) và 4.45 (1H, d, J = 8.0 Hz) chỉ ra rằng 2 phân tử đƣờng là β-D- glucopyranosyl và β-D-quinovopyranosyl. Các phân tử đƣờng này cũng đƣợc đề cập trong các bài báo về loài R. glutinosa [26-28].
21
Hình 3.6. Phổ HMBC của hợp chất RG1
Tƣơng tác HMBC giữa H-1 (δH 5.50) và C-3 (δC 140.9), H-3 (δH 6.23) và C-1 (δC 93.4) / C-5 (δC 39.3), H-6 (δH 4.88) và C-4 (δC 104.8) / C-8 (δC 79.1) / C-9 (δC 51.6) và giữa H-10 (δH 1.39) và C-7 (δC 48.0) / C- 8 (δC 79.1) / C-9 (δC 51.6) gợi ý sự hiện diện của liên kết đôi ở C-3 / C-4, nhóm oxy và hydroxyl ở C-6 và C-8. Tƣơng tác NOESY giữa H-10 (δH 1.39) và H-1 (δH 5.50) / H-6 (δH 4.88) cho thấy tất cả các proton này đều là định hƣớng α. Ngoài ra, tƣơng tác HMBC giữa H-1′ (δH 4.68) và C-1 (δC 93.4) chỉ ra vị trí của β-D- glucopyranosyl tại C-1 của iridoid. Tƣơng tác HMBC giữa H-13″ (δH 1.06) và C-1″ (δC 42.3) / C-2″ (δC 31.2) / C-6″ (δC 82.0) / C-14″ (δC 72.1), H -7" (δH 6.87) và C-1" (δC 42.3) / C-5" (δC 83.3) / C-6" (δC 82.0) và giữa H-12" (δH 2.34) và C-8" (δC 134.1) / C-9" (δC 154.5) / C-10" (δC 118.9) chỉ ra vị trí của các nhóm hydroxyl tại C-6" và C-14" và liên kết đôi ở C-7"/ C-8" và C-9"/ C- 10" của sesquiterpene.
Tƣơng tác NOESY giữa H-7″ (δH 6.87) và H-12″ (δH 2.34) / H-13″ (δH 1.06) và giữa H-14″ (δH 3.01 và 3.64) / H-15″ (δH 1.10) chỉ ra rằng nhóm hydroxymethylene ở C-1″, nhóm methyl ở C-5″ và nhóm hydroxyl ở C-6″ ở cùng một phía. Cấu hình của cả liên kết đôi của sesquiterpene ở C-7"/ C-8" và C-9"/ C-10" đƣợc xác định là E, dựa trên hằng số ghép nối lớn giữa H-7" và H-8", J = 16,0 Hz và tƣơng tác NOESY giữa H-8″ (δH 6.50) và H-10″ (δH 5.86).
Các cấu hình tuyệt đối ở C-1", C-5" và C-6" của sesquiterpene đƣợc xác định bằng phổ CD với hiệu ứng Cotton ở 226 nm (dƣơng) và 265 mn (âm), tƣơng tự nhƣ của sec-hydroxyjiocarotenoside A1 [29]. Vị trí của β-D-quinovopyranosyl tại C-5″ của sesquiterpene đã đƣợc xác nhận bởi tƣơng tác HMBC từ H-1"' (δH 4.45) đến C-5″ (δC 83.3). Hơn nữa, vị trí este hóa tại C-11″ của sesquiterpene và C-6 của ajugol đã đƣợc xác nhận bởi tƣơng tác HMBC từ H-6 (δH 4.88) đến C-11″ (δC 168.7). Dựa trên các phân tích số liệu phổ NMR trên và so sánh với số liệu của hợp chất tham khảo Aeginetoyl ajugol 5′′-O--D-quinovoside [30], cấu trúc hóa học của RG1 đã đƣợc xác định là hợp chất iridoid-sesquiterpene mới và đƣợc đặt tên là rehmannioside E [31].
23
Hình 3.8. Phổ NOESY của hợp chất RG1
Bảng 3.1. Số liệu phổ NMR của hợp chất RG1 và hợp chất so sánh
C δC# δCa,b δHa,c (mult., J = Hz) 1 93.7 93.4 5.50 (d, 2.5) 3 140.3 140.9 6.23 (dd, 2.5, 6.5) 4 105.9 104.8 5.00 (dd, 2.5, 6.5) 5 41.3 39.3 2.90 (dd, 2.5, 9.5) 6 78.2 79.7 4.88 (m) 7 50.0 48.0 1.97 (dd, 4.0, 14.0) 2.22 (dd, 6.5, 14.0) 8 79.4 79.1 - 9 51.8 51.6 2.56 (dd, 2.0, 9.0) 10 25.2 25.9 1.39 (s) 1' 99.4 99.4 4.68 (d, 7.5) 2' 74.8 74.8 3.21 (m) 3' 77.8 78.0 3.39 (t, 9.0) 4' 71.4 71.7 3.30 (t, 9.0) 5' 78.0 78.2 3.30 (m) 6' 62.9 62.9 3.69 (dd, 5.5, 12.0) 3.91 (dd, 1.5, 12.0) 1" 39.9 42.3 - 2" 37.1 31.2 1.09 (m)/2.20 (m) 3" 18.7 18.7 1.40 (m)/2.20 (m) 4" 32.9 32.7 1.73 (m) 5" 83.6 83.3 - 6" 80.4 82.0 - 7" 141.3 141.3 6.87 (d, 16.0) 8" 133.6 134.1 6.50 (d, 16.0) 9" 154.7 154.5 - 10" 118.7 118.9 5.86 (s) 11" 168.7 168.7 -
25 12" 14.6 14.7 2.34 (s) 13" 26.0 20.5 1.06 (s) 14" 27.6 72.1 3.01 (d, 11.0) 3.64 (d, 11.0) 15" 21.9 21.3 1.10 (s) 1'" 98.0 97.9 4.45 (d, 8.0) 2"' 75.7 75.8 3.23 (dd, 8.0, 9.0) 3"' 78.8 78.8 3.29 (t, 9.0) 4"' 77.0 77.0 3.03 (t, 9.0) 5"' 72.5 72.5 3.24 (m) 6"' 18.5 18.5 1.24 (d, 6.5)
ađo trong CD3OD, b125MHz, c500MHz,δC#
Aeginetoyl ajugol 5′′-O--D-quinovoside [30]