Nguyên tắc: Hàm lượng phenolic tổng được xác định dựa vào thuốc thử Folin-Ciocalteu và được hiệu chuẩn thông qua đường chuẩn axit galic [37].
Độ hấp thụ được đo ở bước sóng 765 nm. Hàm lượng phenolic tổng được thể hiện tương đương axit galic trên mẫu bột rau (mg GAE/g mẫu khô).
Tiến hành:
Dựng đường chuẩn axit galic
Pha dung dịch acid gallic theo dãy nồng độ 0, 20, 40, 60, 80, và 100
µg/ml. Hỗn hợp phản ứng được chuẩn bị gồm 100 µl dung dịch acid gallic theo từng nồng độ đã pha như trên và 500 µl dung dịch thuốc thử Folin 10%, lắc đều và để yên 5 phút. Hỗn hợp sau đó được trộn với 400 µl Na2CO3 7,5%, lắc đều và ủ trong tối 30 phút. Độ hấp thụ OD được xác định ở bước sóng 765nm.
Xử lý mẫu và xác định hàm lượng phenolic tổng trong cao chiết
Mẫu được cân chính xác với lượng 1,0g để hoà chung với 8ml ethanol. Sau đó, 100µl mẫu được trộn chung với 500µl thuốc thử Folin – Ciocalteu 10% và 400µl dung dịch Na2CO3 7,5%. Hỗn hợp được ủ trong 30 phút trước khi độ hấp thu được đo ở bước sóng 765nm. Mẫu trắng được chuẩn bị tương tự nhưng thay dung dịch chiết bằng nước cất. Các thí nghiệm được thực hiện lặp lại 3 lần độc lập
Trong đó:
- A : Độ hấp thu của gallic acid ở bước sóng 765nm; - a : Độ dốc (slope) của đường chuẩn;
- b : Hệ số chắn (intercept) của đường chuẩn; - m : Khối lượng mẫu cao (mg);
- Vmẫu : Thể tích mẫu tham gia phản ứng (ml); - LOD : Độ hao hụt khối lượng (%);