1. Chiết dựa vào dung môi
Bột dược liệu được chiết với ether dầu hỏa để loại chất béo rồi chiết saponin bằng methanol – nước (tỷ lệ 4:1). Loại methanol dưới áp suất giảm. Hòa cặn trong nước để có dung dịch 10% rồi lắc với n – butanol. Tách lớp n – butanol, bốc hơi butanol dưới áp suất giảm rồi hòa cặn với methanol để có dung dịch chấm sắc ký. Có thể tinh chế thêm bằng cách rót từ từ dung dịch methanol vào ehter có lượng lớn gấp 10 – 15 lần (có khi dùng aceton hoặc hexan thay ether).
-Chiết với este dầu hỏa
-Chiết với hỗn hợp Methanol – nước
Chiết với cồn
Bột rễ cam thảo
-Hexan,benzen, PE để loại tạp -Ethanol (50-90%),MeOH, nước
Dịch chiết cồn
-Cô thu hồi dung môi
Cao cồn -Lắc với n-Butanol Saponin thô / n- butanol -Cô quay Cao saponin thô
2. Chiết saponin bằng cách tủa trong môi trường axit
Cho nguyên liệu thực vật cần chiết xuất saponin vào dung dịch cồn 70° bằng phương pháp ngấm kiệt. Dịch chiết cồn thu được sẽ đem cô thu hồi còn khoảng 1 lít, sau đó pha loãng với 5 lít nước
-Chiết với cồn 70%
-Cô thu hồi dung môi, hòa cắn với nước
-Rót axit HCl đến pH=2, khuấy đều 5 phút
(Giàu axit Glycyrrhizar)
Rễ và thân cây ngâm
-Cắt bỏ rễ con, ủ đống -Thái mỏng, sấy khô, tán bột
Bột dược liệu
-Loại chất béo
Bột dược liệu đã loại béo
-Chiết hồi lưu với cồn 75o
Bã dược liệu
-Rửa với cồn, bốc hơi cồn
-Hòa tan trong nước, tủa GA trong nước bằng H2SO4
Tủa GA
-Ly tâm lấy tủa
-Lấy tủa bằng nước đá, hòa tan lại trong 95o sôi, bốc hơi cồn
GA
3. Chiết xuất Saponin bằng sắc ký cột Diaion HP-20
Dung dịch mẫu trong nước được nạp lên cột có chứa Diaion HP – 20, sau đó triển khai bằng (H20 – MeOH) với nồng độ MeOH tăng dần:
-Rửa với cồn, bốc hơi cồn
-Hòa tan trong nước, tủa GA trong nước bằng H2SO4
Hình 8: Ảnh hưởng của độ phân cực