CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.2.2 Phương pháp thí nghiệm và phân tích : 1 Chuẩn bị giống vi sinh vật :
3.2.2.1 Chuẩn bị giống vi sinh vật :
• Chuẩn bị giống vi khuẩn lên men lactic :
_Giống vi khuẩn lên men lactic được cung cấp từ ống nghiệm thạch nghiêng MRS agar, được bảo quản trong tủ lạnh 40C.
_Chuẩn bị môi trường : Pha môi trường MRS lỏng.
Phối vào mỗi bình erlen 50ml MRS lỏng.
Đậy nắp bằng bông không thấm và giấy bạc, cho vào bịch hấp. Đem hấp khử trùng bằng Autolave 1210C, 15 phút, 1 amt. _Nuôi cấy LAB :
Mọi thao tác được tiến hành sau khi đã khử trùng môi trường xung quanh và dụng cụ làm thí nghiệm, thao tác được thực hiện dưới ngọn lửa đèn cồn.
Lấy sinh khối cấy chuyển vào bình erlen chứa MRS lỏng.
Quấn parafin quanh miệng bình để nuôi cấy kị khí ở 370C từ 16_24h.
• Chuẩn bị giống E.coli :
_Giống E.coli được cung cấp từ ống thạch nghiêng bảo quản trong tủ lạnh ở 40C.
_Chuẩn bị môi trường :
Pha môi trường Pepton Water.
Phối vào bình erlen 50ml Pepton Water.
Đậy nắp bằng bông không thấm và giấy bạc, cho vào bịch hấp ở 1210C, 15 phút, 1 atm.
_Nuối cấy E.coli tăng sinh khối :
Mọi thao tác được tiến hành sau khi đã khử trùng môi trường xung quanh và dụng cụ làm thí nghiệm, thao tác được thực hiện dưới ngọn lửa đèn cồn.
Lấy sinh khối cấy chuyển vào bình erlen chứa Pepton Water lỏng. Đem ủ hiếu khí ở 370C trong 21h.
Sử dụng E.coli sau khi đã nuôi cấy qua đêm và pha loãng 10-2
(tương đương 10-5 tb/ml) để kiểm tra hoạt tính kháng khuẩn của các vi khuẩn lactic.
• Chuẩn bị giống Salmonella :
_Giống Salmonella được cung cấp từ ống thạch nghiêng bảo quản trong tủ lạnh ở 40C.
_Chuẩn bị môi trường :
Pha môi trường Pepton Water.
Phối vào bình erlen 50ml Pepton Water.
Đậy nắp bằng bông không thấm và giấy bạc, cho vào bịch hấp ở 1210C, 15 phút, 1 atm.
_Nuối cấy Salmonella tăng sinh khối :
Mọi thao tác được tiến hành sau khi đã khử trùng môi trường xung quanh và dụng cụ làm thí nghiệm, thao tác được thực hiện dưới ngọn lửa đèn cồn.
Đem ủ hiếu khí ở 370C trong 21h.
Sử dụng Salmonella sau khi đã nuôi cấy qua đêm và pha loãng 10-2
để kiểm tra hoạt tính kháng khuẩn của các vi khuẩn lactic.
• Chuẩn bị giống B.subtilis :
_Giống B.subtilis được cung cấp từ đĩa thạch bảo quản trong tủ lạnh ở 40C.
_Chuẩn bị môi trường :
Pha môi trường Pepton Water.
Phối vào bình erlen 50ml Pepton Water.
Đậy nắp bằng bông không thấm và giấy bạc, cho vào bịch hấp ở 1210C, 15 phút, 1 atm.
_Nuối cấy B.subtilis tăng sinh khối :
Mọi thao tác được tiến hành sau khi đã khử trùng môi trường xung quanh và dụng cụ làm thí nghiệm, thao tác được thực hiện dưới ngọn lửa đèn cồn.
Lấy sinh khối cấy chuyển vào bình erlen chứa Pepton Water lỏng. Đem ủ hiếu khí ở 370C trong 21h.
Sử dụng B.subtilis sau khi đã nuôi cấy qua đêm và pha loãng 10-2 để kiểm tra hoạt tính kháng khuẩn của các vi khuẩn lactic.
• Chuẩn bị giống Pseudomonas :
_Giống Pseudomonas được cung cấp từ đĩa thạch bảo quản trong tủ lạnh ở 40C.
_Chuẩn bị môi trường :
Pha môi trường Pepton Water.
Phối vào bình erlen 50ml Pepton Water.
Đậy nắp bằng bông không thấm và giấy bạc, cho vào bịch hấp ở 1210C, 15 phút, 1 atm.
_Nuối cấy Pseudomonas tăng sinh khối :
Mọi thao tác được tiến hành sau khi đã khử trùng môi trường xung quanh và dụng cụ làm thí nghiệm, thao tác được thực hiện dưới ngọn lửa đèn cồn.
Lấy sinh khối cấy chuyển vào bình erlen chứa Pepton Water lỏng. Đem ủ hiếu khí ở 370C trong 21h.
Sử dụng Pseudomonas sau khi đã nuôi cấy qua đêm và pha loãng 10-2 để kiểm tra hoạt tính kháng khuẩn của các vi khuẩn lactic.