- Có tác dụng tư bổ cường tráng Germanium giúp khí huyết lưu thông, làm tăng sức cho tế bào hấp thụ oxy tốt hơn Lượng polysaccharid cao có trong
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. Phân lập các hợp chất
Mẫu nấm được cắt nhỏ, phơi, sấy khô ở 400C đem nghiền nhỏ (3,5 kg), ngâm với metanol ở nhiệt độ phòng (8 ngày). Cất thu hồi dung môi được cao metanol (121g). Phân bố cao metanol trong nước và chiết lần lượt với các dung môi chọn lọc, rồi cất thu hồi dung môi đã thu được các cao tương ứng là cao etyl axetat (28g), cao butanol (33g).
Cao etyl axetat được tiến hành sắc ký cột silica gel hệ dung môi rửa giải hexan: axeton (100:0, 50:1; 25:1: 15: 1; 9:1; 4:1: 2:1) thu được 10 phân đoạn chính. Phân đoạn 2 sắc ký cột với hexan: axeton 15:1 thu được chất 95 (123mg). Phân đoạn 3 sắc ký cột với hexan: axeton 9:1 thu được chất 96 (31mg).
3.2. Hợp chất 95
Hợp chất 95 là chất bột màu trắng. Phổ tử ngoại (UV) cho hấp thụ cực đại 211nm và 285nm
Phổ hồng ngoại (IR) cho hấp thụ cực đại ở 3433 (OH), 2959, 1726, 1090 cm-1. Phổ khối lượng va chạm electron (EI-MS) cho pic ion phân tử m/z 396 tương ứng với công thức phân tử C28H44O.
Phổ 1H-NMR cho thấy có tín hiệu của 6 nhóm metyl δ 0,61 (3H, s), 0,82 (3H, d, J = 6,5 Hz), 0,85 (3H, d, J = 6,5), 0,93 (3H, d, J = 7,0 Hz), 0,96 (3H,s) và 1,05 (3H, d, J = 7,0 Hz), 1 tín hiệu của proton carbinol ở δ 3,48 (1H, m) và 4 tín hiệu của proton olefinic ở δ 5,28 (1H, dd, J = 15,5, 7,5 Hz), 5,25 (1H, dd, J = 15,5, 7,0Hz), 5,35 (1H, m) và 5,49 (1H, m).
Phổ 13C-NMR cho thấy tín hiệu 28 nguyên tử cacbon bao gồm 6 cacbon olefinic ở δ 116,3, 119,6, 130,0, 135,6, 140,7 và 142,0 và 1 tín hiệu cacbon liên kết với oxy ở δ 70,5.
Bảng 3.1. Số liệu phổ 13C - NMR của hợp chất 95
C DEPT δ (ppm)
Thực nghiệm Tài liệu [8]
1 CH2 39,0 38,4 2 CH2 31,5 32,0 3 CH 68,3 70,5 4 CH2 40,4 40,8 5 C 140,3 141,3 6 CH 118,2 119,6 7 CH 115,8 116,3 8 C 139,8 139,8 9 CH 45,5 46,3 10 C 37,7 37,0 11 CH2 20,6 21,1 12 CH2 38,2 39,1 13 C 42,2 42,8 14 CH 53,6 54,6 15 CH2 22,2 23,0 16 CH2 27,4 28,7 17 CH 55,0 55,7 18 CH3 11,5 12,0 19 CH3 15,8 16,3 20 CH 40,0 40,4 21 CH3 19,1 19,6 22 CH 131,2 132,0 23 CH 135,0 135,6 24 CH 41,8 42,8 25 CH 32,2 33,1 26 CH3 19,4 19,9 27 CH3 20,4 21,1 28 CH3 17,0 17,6
Từ số liệu phổ UV, IR, EI-MS, 1H-, 13C-NMR, DEPT và so sánh với tài liệu [39] cho phép xác định hợp chất 95 là ergosterol.
Hợp chất ergosterol (hợp chất có trong nhiều loài nấm) được tách ra từ cordyceps, dưới tác dụng của tia cực tím ergosterol có thể bị biến đổi thành vitamin D2 một yếu tố dinh dưỡng có lợi cho sự phát triển của xương ở cả người và động vật. Bên cạnh đó ergosterol là hợp chất có nhiều hoạt tính dược học
khác, chẳng hạn như nó có tính độc kháng virus, tác động rõ rệt đối với chứng loạn nhịp tim, chống khối u, điều hòa miễn dịch [27,49].
OH
H
H H
(95) Ergosterol
Hình 3.2: Phổ hồng ngoại (IR) của chất 95
Hình 3.4: Phổ 1H-NMR của hợp chất 95
Hình 3.6: Phổ 1H-NMR của hợp chất 95
Hình 3.8: Phổ 13C-NMR của hợp chất 95
Hình 3.11: Phổ DEPT của hợp chất 95
Hình 3.20: Phổ COSY của hợp chất 95
3.3. Hợp chất 96
Hợp chất 96 thu được dưới dạng thể hình kim không màu.
Trên phổ 13C-NMR xuất hiện tín hiệu của 28 nguyên tử carbon, trong đó có 6 cacbon methyl, 7 methylen, 11 methil và 4 cacbon không nối với nguyên tử nào được xác định bằng các phổ DEPT 90 và DEPT 135.
Hai nối đôi được xác định 135,6 (C-6), 130,1 (C-7), 135,2 (C-22) và 131,5 (C-23), hai cacbon bậc ba nối với nguyên tử oxi tại 81,4 (C-5) và 78,4 (C-8) cùng với hai tín hiệu carbon của nối đôi tại C-6/C-7 rất đặc trưng cho sự tạo thành liên kết peroxit tại C-5/C-8.
Ngoài ra cũng trên phổ 13C-NMR còn xuất hiện tín hiệu của một cacbon oxymethyl tại δ 64,6 (C-3) và sáu nhóm methyl tại δ 12,5 (C-18), 17,9 (C-19), 20,2 (C-21), 19,4 (C-26), 19,7 (C-27) và 17,2 (C-28).
Trên phổ 1H-NMR, sự có mặt của hai nhóm methyl bậc bốn được nhận biết là hai singlet tại δ 0,79 (s, H-18) và 0,82 (s, H-19), ba nhóm methyl bậc ba
tại 0,87 d (J=6,5 Hz, H-26), 0,89 d (J=6,5 Hz, H-27) và 0,96 d (J=7,0 Hz, H-
28). Bốn proton của hai nối đôi cũng được xác định tại δ 6,23 (J=8,5 Hz, H-6),
6,44 d (J=8,5 Hz, H-7), 5,18 (m, H-22) và 5,26 (m, H-23) và một proton
oxymethyl tại δ 3,58 (m, H-3).
Những dấu hiệu này điện hình cho một hợp chất sterol mà cấu trúc hoá học của nó có thể là esgosterol peroxit. Các dữ liệu phổ của 96 được kiểm tra và so sánh với các dữ liệu phổ tương ứng của esgosterol peroxit và cho kết quả phù hợp. Ngoài ra phổ HSQC và HMBC cũng được thực hiện để xác định chính xác từng giá trị độ dịch chuyển hoá học của cacbon và proton.
Trên phổ HMBC, tương tác của H-6 với C-5/C-10/C-8, tương tác của H-7 với C-5, C-9, tương tác của H-19 với C-1/C-5/C-9/C-10, tương tác của H-18 với C-12/C-13/C-15/C-17, tương tác của H-21 với C-17/C-20/C-22 cũng như tương tác của H-28 với C-23/C-24/C-25 chứng tỏ sự có mặt của nối đôi tại C- 6/C-7, C-22/C-23 cũng như sự có mặt của liên kết peroxid tại C-5/C-8. Sự trùng khớp về giá trị độ dịch chuyển hoá học của 96 với esgosterol peroxit cũng cho thấy nhóm hydroxy gắn vào C-3 với cấu hình β.
Công thức phân tử dự kiến là C28H44O3 với khối lượng phân tử là 428 đvc đã được khẳng định bằng kết quả thu được trên phổ khối lượng EI-MS với sự xuất hiện của các pic ion tại m/z 428 [M]+.
Bảng 3.2. Số liệu phổ NMR của hợp chất 96 C DEPT δC δH HMBC (H-C) 1 CH2 29,9 1,39 m; 1,63 m 2 CH2 34,5 1,72 m; 1,62 m 3 CH 64,6 3,58 m 4 CH2 38,7 1,18m 5 C 81,4 - 6, 7, 19 6 CH 135,6 6,23 d (J = 8,5 Hz) 4,5,7,8,10 7 CH 130,1 6,44 d (J = 8,5 Hz) 5,6,8,9,15 8 C 78,4 - 6,7 9 CH 50,9 1,33 m 7,19 10 C 36,5 - 6 11 CH2 21,7 0,97 m
12 CH2 36,9 1,82 m 13 C 44,0 - 14 CH 51,2 1,47 m 15 CH2 22,8 1,47 m; 1,13 m 16 CH2 28,2 1,34 m; 1,66 m 17 CH 55,4 1,28 m 18 18 CH3 12,5 0,79 s 12,13,14,15,17 19 CH3 17,9 0,82 s 1,5,9,10 20 CH 40,1 1,98 m 22,23 21 CH3 20,2 1,39 d (J=6,5 Hz) 17, 20, 22 22 CH 135,6 5,18 m 24,28 23 CH 131,5 5,28 m 24,26,27 24 CH 42,0 1,87 m 22,23 25 CH 32,4 1,52 m 26 CH3 19,4 0,87 d (J=6,5 Hz) 24, 25 27 CH3 19,7 0,89 d (J=6,5 Hz) 24, 25 28 CH3 17,2 0,96 d (J= 7,0 Hz) 23, 24, 25
Từ dữ liệu trên, hợp chất 96 được xác định là egrosterol peroxit (5α, 8α- epidioxyergosta-6,22-dien-3β-ol). Hợp chất này đã được phân lập từ lá cây
Ajuga remot, từ bọt biển Axinella cannabina và Typha latifolia cũng như một số
loài khác. Hợp chất egrosterol peroxit được biết đến với hoạt tính kháng khuẩn và ức chế sự phát triển của tế bào ung thư khá cao [4].
. O H O O (96) Egrosterol peroxit
Hình 3.21: Phổ khối lượng của hợp chất 96
Hình 3.23: Phổ 1H-NMR của hợp chất 96
Hình 3.25: Phổ 13C-NMR của hợp chất 96
KẾT LUẬN
Nghiên cứu thành phần hoá học dịch chiết nấm Linh chi đen (Ganoderma
sinense Zhao, Xu et Zhang) thuộc họ Ganodermaceae ở Việt Nam chúng tôi đã thu được một số kết quả như sau:
- Nấm Linh chi đen chiết với dung môi metanol trong 8 ngày, cất thu hồi dung môi thu được cao metanol thô (121g).
- Bằng các phương pháp phân bố cao metanol trong nước và chiết với các dung môi chọn lọc rồi chưng cất chân không thu được 28 g cao etylaxetat và 33g cao butanol.
- Phân lập các hợp chất từ cao etylaxetat bằng các phương pháp sắc ký thu được hợp chất 95 (123mg) và hợp chất 96 (31mg).
