2.2.2.1. Phân lập các hợp chất
Cây Sim đợc định danh bởi BS.TTƯT. Vũ Quang Chính, chủ tịch hội Đông Y – Tỉnh Thanh Hoá. Mẫu hoa sim đợc lấy ở huyện Triệu sơn – tỉnh Thanh
Hoá vào tháng 05/ 2009 vào thời kì hoa nở rộ. Mẫu lấy về rữa sạch, để ráo nớc sau đó nhúng qua etanol 960 rồi phơi trong bóng cho đến khô. Mẫu khô đợc ngâm chiết trong metanol (3 lần) rồi loại bỏ dung môi thu đợc cao MeOH. Cao MeOH đợc phân tán vào nớc rồi lần lợt chiết với các dung môi hexan, clorofom, etylaxetat, butanol, lọc dịch chiết rồi loại bỏ dung môi thu đợc các cao tơng ứng.
Cao etylaxetat đợc tiến hành sắc kí cột với chất rửa giải là hệ dung môi etylaxetat: MeOH với độ phân cực tăng dần của dung môi thu đựơc các phân đoạn khác nhau.
Các dịch chiết tơng ứng từ hoa sim (Rhodomyrtus tomentosa) đều là những hỗn hợp phức tạp chứa các hợp chất khác nhau. Để phân lập từng chất ra khỏi hỗn hợp, đã sử dụng phơng pháp sắc ký cột với các hệ dung môi rửa giải thích hợp và lặp lại nhiều lần. Việc tinh chế các chất dùng phơng pháp kết tinh lại trong hệ dung môi thích hợp và thu đợc các chất có độ tinh khiết cao. Để xác định cấu trúc hóa học của các chất thu đợc phải sử dụng các ph- ơng pháp phổ .
Việc phân lập các thành phần hóa học từ hoa sim (Rhodomyrtus tomentosa) đợc thực hiện theo sơ đồ 2.1.
Ngâm trong metanol 15 ngày Lọc dịch chiết và loại bỏ dung môi
Phân tán vào nớc Chiết với các dung môi và cho bay hơi tự nhiên
n-hexan etyl axetat clorofom butanol
Nhồi cột
Rửa giải bằng dung môi EtOAc- MeOH
(
Sơ đồ 2.1. Sơ đồ tách các hợp chất từ hoa cây sim 2.2.2.2. Phơng pháp tiến hành sắc ký cột cao etylaxetat
Cao etylaxetat đợc trộn theo tỷ lệ thích hợp (1:1) với silicagel (254
Bã mẫu Cao metanol Cao n-hexan Dịch chiết butanol Hệ dung môi 8 : 2 Hệ dung môi 5 : 5 Cao Etyl axetat Cao clorofom Hợp chất B (TDH 252) Hợp chất A (TDH 44)
sắc ký cột với các hệ dung môi triển khai theo tỷ lệ thay đổi (bảng 2.1), lấy lần lợt những thể tích xác định dung dịch chảy ra khỏi cột. Cất thu hồi dung môi, dùng axeton hoặc metanol để rửa chất thu đợc. Các số liệu và hệ dung môi của quá trình chạy cột cao etylaxetat hoa sim đợc thể hiện ở bảng 2.1.
Bảng 2.1. Bảng số liệu quá trình chạy cột cao etylaxetat hoa sim STT Hệ dung môi EtOAc/MeOH Tỷ lệ Phân đoạn
1 EtOAc/MeOH 10 : 0 1 : 10 2 EtOAc/MeOH 9 :1 11 : 20 3 EtOAc/MeOH 8 : 2 21 : 30 4 EtOAc/MeOH 7 : 3 31 : 40 5 EtOAc/MeOH 6 : 4 41 : 50 6 EtOAc/MeOH 5 : 5 51 : 70 7 EtOAc/MeOH 0 : 10 71 : 100
Tại phân đoạn 28, 29 tơng ứng với hệ dung môi 8:2 xuất hiện một l- ợng lớn chất màu nâu vàng. Dùng hexan để rửa chất nhiều lần sau đó sử dụng axeton đun nóng thấy chất này tan, để nguội đến lúc kết tinh thu đợc một kết tủa màu vàng đậm. Cho bay hơi từ từ thu đợc một tinh thể màu vàng đậm. Quá trình đợc lặp lại nhiều lần thu đợc chất sạch kí hiệu là chất A.
Tại phân đoạn 65 tơng ứng với hệ dung môi 5:5 có một lợng chất rắn màu trắng đục. Thực hiện quá trình kết tinh giống chất A nhng chất này không tan trong cả dung môi axeton nóng, vì vậy hexan và axeton đợc dùng làm dung môi rửa chất bẩn, sau đó dùng axeton để kết tinh thu đợc một chất sạch màu trắng kí hiệu là chất B.
Chơng 3